如何開展比對實(shí)驗(yàn)

如何開展比對實(shí)驗(yàn)2011.1.6學(xué)習(xí)和討論要點(diǎn)定義和術(shù)語有關(guān)文件的規(guī)定和細(xì)則比對試驗(yàn)設(shè)計(jì)方案要點(diǎn)不同檢測系統(tǒng)檢驗(yàn)結(jié)果可比性的評估術(shù)語和定義檢測系統(tǒng)：完成一個(gè)檢測項(xiàng)目所需要的儀器、試劑、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品、操作程序等的組合。若是手工操作，還必須包括具體的操作人員。配套檢測系統(tǒng)：整個(gè)檢測系統(tǒng)由同一廠商或儀器的指定廠商提供并配套使用，若該系統(tǒng)經(jīng)FDA認(rèn)可,使用這樣的檢測系統(tǒng)對病人標(biāo)本進(jìn)行檢驗(yàn)，其結(jié)果具溯源性。自建檢測系統(tǒng)：實(shí)驗(yàn)室根據(jù)自己的意愿自行建立的檢測系統(tǒng)，其檢驗(yàn)結(jié)果往往不可溯源，不同檢測系統(tǒng)間缺乏可比性。檢測系統(tǒng)儀器試劑校準(zhǔn)品溯源性和可比性溯源性:通過一條具有規(guī)定不確定度的不間斷的比較鏈，使測量結(jié)果或測量標(biāo)準(zhǔn)的值能夠與規(guī)定的參考標(biāo)準(zhǔn)，通常是與國家標(biāo)準(zhǔn)或國際標(biāo)準(zhǔn)聯(lián)系起來的特性?？杀刃?不同檢測系統(tǒng)或不同檢驗(yàn)方法對一批病人標(biāo)本測定結(jié)果的一致程度。兩者關(guān)系：溯源性是可比性的基礎(chǔ)，可比性是溯源性的目標(biāo)。追求檢驗(yàn)結(jié)果的可比性是最大的質(zhì)量。比對試驗(yàn)Ifthelaboratoryusesmorethanoneinstrumenttotestforagivenanalyte,aretheinstrumentscheckedagainsteachotheratleasttwiceayearforcorrelationofpatient/clientresults?

實(shí)驗(yàn)室使用一臺以上的儀器進(jìn)行同一試驗(yàn)，須每年至少進(jìn)行兩次病人結(jié)果的比對有關(guān)文件的規(guī)定和細(xì)則

CLSI﹑NCCLS﹑EPCLSI是美國【臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會】的英文縮寫，英文名為ClinicalandLaboratoryStandardsInstitute。CLSI前身是NCCLS【美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會】，英文名稱為Nationalcommitteeforclinicallaboratory。美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會（NCCLS）

評價(jià)方案（EvaluationProtocol,簡稱EP）系列文件,目前已普遍為臨床實(shí)驗(yàn)用來對儀器、試劑及方法學(xué)進(jìn)行系統(tǒng)化評價(jià)的文件。CLSIEP9-A2CLSI文件EP9-A2（用患者標(biāo)本進(jìn)行方法比對及偏倚評估；批準(zhǔn)指南-第二版）是為實(shí)驗(yàn)室人員和生產(chǎn)廠商制定的。它敘述了測定兩種方法之間相對偏倚的程序，也敘述了采用一分為二的患者樣本設(shè)計(jì)方法比對試驗(yàn)時(shí)所需要考慮的因素。

CLSICLSI文件EP9-A2

此文件為臨床實(shí)驗(yàn)室用戶和制造商提供了設(shè)計(jì)一個(gè)評價(jià)實(shí)驗(yàn)的指南，用于評價(jià)測定同一被測物的兩種方法之間的偏倚。理想情況下，待評方法（或候選方法）應(yīng)該與參考方法相比較。CLSICLSI文件EP9-A2本指南便于估計(jì)兩種方法在不同樣本濃度下的偏倚（預(yù)期的差異）。如果參較方法同廠家使用的方法相同，那么就可以把實(shí)驗(yàn)結(jié)果與廠家的聲明進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)比較，以確定性能是否可以接受。CLSICLSI文件EP9-A21.1比對試驗(yàn)概述評價(jià)一個(gè)分析方法需要以下條件：操作者有足夠的時(shí)間熟悉儀器操作及保養(yǎng)程序；操作者有足夠的時(shí)間熟悉評價(jià)方案；在評價(jià)實(shí)驗(yàn)過程中，待評方法及參比方法必須保證有適當(dāng)?shù)馁|(zhì)量控制；待評方法及參比方法必須有足夠的數(shù)據(jù)以保證結(jié)果具有代表性（需要多少數(shù)據(jù)取決于兩種方法的精密度和干擾作用，兩方法間的偏倚大小，樣本分析物數(shù)據(jù)的范圍及檢測的醫(yī)學(xué)要求）。CLSICLSI文件EP9-A2在熟悉儀器操作過程中，待評和參評方法的操作者必須掌握儀器安裝、操作、維護(hù)、故障排除及兩個(gè)方法的質(zhì)量控制的所有方面。此過程可以在其他評價(jià)工作之前或與儀器廠商培訓(xùn)階段同時(shí)進(jìn)行。兩種方法都要進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)質(zhì)量控制。CLSICLSI文件EP9-A2在熟悉過程后，方法比對實(shí)驗(yàn)即可開始。工作組建議在至少5個(gè)工作日內(nèi)最少要分析完40個(gè)患者樣本。在遵循廠家的推薦進(jìn)行校準(zhǔn)的條件下，增加測定樣本數(shù)及測定天數(shù)，可以提高實(shí)驗(yàn)的可靠性及有效性。CLSICLSI文件EP9-A2用待評方法和參比方法對每一患者樣本各作兩份測定。分析每一方法在同一批內(nèi)的雙份測定結(jié)果。應(yīng)盡可能使至少50％樣本的測定結(jié)果處于實(shí)驗(yàn)室的參考區(qū)間之外。CLSICLSI文件EP9-A2實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，合理記錄數(shù)據(jù)（如附錄所建議的）。數(shù)據(jù)作圖并目測或統(tǒng)計(jì)學(xué)方法評價(jià)圖的相對線性、足夠范圍和離散的均勻性。根據(jù)數(shù)據(jù)的檢查結(jié)果，使用簡單的線性回歸或用其他方法估計(jì)在醫(yī)學(xué)決定水平處的預(yù)期偏倚的可信區(qū)間。然后把此評價(jià)結(jié)果與廠家聲明或內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行比較以判斷方法是否可以接受。CLSI《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床實(shí)驗(yàn)室管理辦法》新舊批號試劑對比驗(yàn)證同一項(xiàng)目不同分析系統(tǒng)結(jié)果比對評估同一項(xiàng)目不同分析系統(tǒng)結(jié)果比對評估《管理辦法》中規(guī)定：實(shí)驗(yàn)室內(nèi)采用不同方法或儀器檢驗(yàn)同一項(xiàng)目至少半年進(jìn)行一次比對，樣本至少20份具體試驗(yàn)方法同方法學(xué)比對實(shí)驗(yàn)。比對結(jié)果不好應(yīng)及時(shí)解決考慮不同方法線性參數(shù)可調(diào)Y=bX+a參數(shù)調(diào)整后重新比對ISO15189ISO15189根據(jù)ISO15189臨床實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量保證之內(nèi)審要求,在同一實(shí)驗(yàn)室使用兩種以上型號的分析儀時(shí),應(yīng)當(dāng)進(jìn)行比對試驗(yàn)。在衛(wèi)生部的醫(yī)院管理年檢查中,明確提出比對試驗(yàn)的重要性。ISO151895.6.6當(dāng)同樣的檢驗(yàn)應(yīng)用不同程序或設(shè)備，或在不同地點(diǎn)進(jìn)行，或以上各項(xiàng)均不同時(shí)，應(yīng)有確切機(jī)制以驗(yàn)證在整個(gè)臨床適用區(qū)間內(nèi)檢驗(yàn)結(jié)果的可比性。應(yīng)按適合于程序和設(shè)備特性的規(guī)定周期驗(yàn)證。5.6.7實(shí)驗(yàn)室應(yīng)文件化并記錄比對活動，只要適用，針對其結(jié)果迅速采取措施。對識別出的問題或不足應(yīng)采取措施并保留記錄。ISO151895.6檢驗(yàn)程序的質(zhì)量保證CLIA’88CLIA’884、化驗(yàn)結(jié)果的比較如果實(shí)驗(yàn)室對某一項(xiàng)目的測定采用兩種相似的方法，則所在組室的負(fù)責(zé)人必須每年兩次對有關(guān)的化驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行比較工作，步驟如下：一、選擇適當(dāng)數(shù)量的標(biāo)本二、確定可接受的標(biāo)準(zhǔn)三、進(jìn)行兩種方法測定結(jié)果的比較，如達(dá)不到標(biāo)

準(zhǔn)，要有解決措施四、記錄全過程，并保存兩年CLIA'88海軍總醫(yī)院檢驗(yàn)科程序文件

比對試驗(yàn)設(shè)計(jì)方案要點(diǎn)比對計(jì)劃

標(biāo)準(zhǔn)比對方案：原則上常規(guī)生化項(xiàng)目、血細(xì)胞計(jì)數(shù)、凝血三項(xiàng)三地實(shí)驗(yàn)室之間的比對每年進(jìn)行一次。其他項(xiàng)目視具體情況每1~2年進(jìn)行一次。程序文件比對試驗(yàn)設(shè)計(jì)方案要點(diǎn)1.各種儀器處于良好的工作狀態(tài)，嚴(yán)格按SOP操作。2.檢驗(yàn)人員有足夠的時(shí)間熟悉檢測系統(tǒng)的各個(gè)環(huán)節(jié)，熟悉評價(jià)方案。3.在整個(gè)實(shí)驗(yàn)中，保持實(shí)驗(yàn)方法和比較方法都處于完整的質(zhì)量控制之下，始終對實(shí)驗(yàn)結(jié)果有校準(zhǔn)措施。4.實(shí)驗(yàn)時(shí)間至少做5天，時(shí)間長一些更好，可以客觀反映實(shí)際情況。程序文件比對試驗(yàn)設(shè)計(jì)方案要點(diǎn)5.至少做40份病人標(biāo)本，多一點(diǎn)更好。6.盡可能使50%的實(shí)驗(yàn)標(biāo)本分析物的含量不在參考區(qū)間內(nèi)，各個(gè)標(biāo)本分析物含量越寬越好。7.不要使用對任一方法有干擾的標(biāo)本。8.每份標(biāo)本應(yīng)有足夠的量，以便使實(shí)驗(yàn)方法和比較方法都能做雙份測定。程序文件比對試驗(yàn)設(shè)計(jì)方案要點(diǎn)9.將標(biāo)本按1、2、3、4、5、6、7、8順序排列先測一遍，然后將順序倒過來做雙份第二次測定。10.應(yīng)在2個(gè)小時(shí)內(nèi)兩種方法對同批標(biāo)本分別開始實(shí)驗(yàn)，最好使用當(dāng)天采集的標(biāo)本。程序文件實(shí)驗(yàn)樣本要求：來源于健康人或患者，無干擾，盡量避免儲存；測定物濃度范圍在檢測線性范圍內(nèi)較均勻分布；樣本數(shù)至少40例（確認(rèn)），增加數(shù)量能提高可信性參比方法：實(shí)驗(yàn)室當(dāng)前使用的方法，生產(chǎn)廠家聲明的方法和公認(rèn)的參考方法都可作為參比方法。參比方法應(yīng)該做到如下幾點(diǎn)：

具有比待評方法更好的精密度；可能的情況下，不受已知干擾物質(zhì)的干擾；使用與待評方法相同的單位；可能的情況下，與標(biāo)準(zhǔn)品或參考方法有已知的相對偏倚（可溯源）。具體操作：測定方法： 每天分別用兩種方法進(jìn)行測定，測定順序：1、2、3、4、5、6、7、88、7、6、5、4、3、2、1順序中的濃度應(yīng)盡可能隨機(jī)排列。第二次標(biāo)本的反向順序可以減少交叉污染及漂移對重復(fù)測定標(biāo)本平均值的影響。測定次數(shù)： 至少測定5天，共40個(gè)樣本，160個(gè)測試試驗(yàn)方法比較方法試驗(yàn)方法（Y）比較方法（X）標(biāo)

本

號結(jié)

果1（Y1）結(jié)

果2（Y2）結(jié)

果1（X1）結(jié)

果2（X2）復(fù)雜的后期數(shù)據(jù)處理同種方法內(nèi)離群值檢查（參考方法和待評方法）兩種方法間離群值檢查繪制散點(diǎn)圖、偏倚圖回歸分析檢查范圍是否足夠（r﹥0.975）得出回歸方程決定水平的預(yù)期偏倚與允許總偏差比較

有文獻(xiàn)認(rèn)為預(yù)期偏倚應(yīng)<1/2TEa實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的收集、處理和應(yīng)用1.不采用已明確有人為誤差的結(jié)果。2.記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果。若兩方法結(jié)果的差值大于任一方法的批內(nèi)不精密度時(shí)，應(yīng)查對標(biāo)本，并重新實(shí)驗(yàn)。若找不出原因，應(yīng)保留數(shù)據(jù)備考。3.整個(gè)實(shí)驗(yàn)必須有室內(nèi)質(zhì)量控制，失控時(shí)必須重做。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的收集、處理和應(yīng)用4.檢查每一方法內(nèi)雙份測定值有無離群表現(xiàn)。以4倍的各方法差值的均值為判斷限，各方法內(nèi)的成對差值都應(yīng)在限值內(nèi)，說明雙份測定結(jié)果符合要求。5.將實(shí)驗(yàn)結(jié)果點(diǎn)畫于X、Y座標(biāo)紙上，圖中標(biāo)出斜率為1通過零點(diǎn)的直線，看圖了解有無線性關(guān)系，有無明顯離群點(diǎn)。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的收集、處理和應(yīng)用6.檢查X、Y關(guān)系實(shí)驗(yàn)點(diǎn)有無離群表現(xiàn)：先看圖有無明顯離群點(diǎn)。若有，應(yīng)對X、Y配對值作離群值計(jì)算。以4倍的平均差值為判斷限，所有差值都不應(yīng)超出限值。7.檢查標(biāo)本內(nèi)分析物含量分布是否適當(dāng)：影響r的因素一是實(shí)驗(yàn)點(diǎn)和回歸線的離散程度，一是分析物含量分布寬度。一般要求r≥0.975或r2≥0.95，認(rèn)為X范圍是合適的(圖1)。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的收集、處理和應(yīng)用8.線性回歸統(tǒng)計(jì)：?=bX+a

b和a分別表示兩種方法間的比例誤差和恒定誤差。根據(jù)臨床使用要求，可在各個(gè)臨床決定水平濃度Xc處，了解Y方法引入后相對于X方法的系統(tǒng)誤差（SE）。

SE=?

Yc-Xc

?實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的收集、處理和應(yīng)用9.以方法學(xué)比較評估的系統(tǒng)誤差（SE）≤1/2CLIA’88允許誤差或根據(jù)生物學(xué)變異設(shè)定的分析質(zhì)量指標(biāo)，認(rèn)為系統(tǒng)穩(wěn)定狀態(tài)的系統(tǒng)誤差屬臨床可接受水平。10.使用2個(gè)及以上的醫(yī)學(xué)決定水平濃度。若項(xiàng)目只有一個(gè)醫(yī)學(xué)決定水平，則需估計(jì)在實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均值附近的系統(tǒng)誤差。11.若項(xiàng)目暫時(shí)沒有醫(yī)學(xué)決定水平的，則需估計(jì)在實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均值附近的系統(tǒng)誤差以及參考值上下限處的系統(tǒng)誤差。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的收集、處理和應(yīng)用12.相關(guān)系數(shù)好，并不代表二個(gè)檢測系統(tǒng)間不存在系統(tǒng)誤差或偏倚（圖2和表1）。13.當(dāng)相關(guān)系數(shù)較差時(shí)，應(yīng)改善數(shù)據(jù)分布范圍，或?qū)嶒?yàn)方法的精密度。不同檢測系統(tǒng)ALT測定相關(guān)與回歸分析不同檢測系統(tǒng)ALT測定的可接受性能評價(jià)

1/2CLIA’88醫(yī)學(xué)決定水平Y(jié)1Y2Y3Y4Y%SEY%SEY%SEY%SE10%X1=606610.0%623.3%6915.0%7220.0%

X2=3002874.3%3186.0%38428.0%35819.3%可接受性能評價(jià)可接受可接受不可接受不可接受比對結(jié)果的判斷

⑴將比對結(jié)果制成表格，根據(jù)結(jié)果判斷為：

合格和不合格

⑵不合格時(shí)啟動