霉菌的形態(tài)觀察

山東大學(xué)實驗報告年月日姓名系年級學(xué)號組別科目題目霉菌的形態(tài)觀察同組者：霉菌的形態(tài)觀察一.實驗?zāi)康?．掌握配制馬鈴薯培養(yǎng)基（PDA）的一般方法。2．學(xué)習(xí)并掌握觀察霉菌形態(tài)的基本方法。3．了解并掌握四類霉菌（根霉、毛霉、曲霉、青霉）的基本形態(tài)。二.實驗原理1.霉菌霉菌是可產(chǎn)生復(fù)雜分枝的菌絲體，其菌絲分基內(nèi)菌絲和氣生菌絲，氣生菌絲生長到一定階段分化產(chǎn)生繁殖菌絲，由繁殖菌絲產(chǎn)生孢子。霉菌菌絲體（尤其是繁殖菌絲）及孢子的形態(tài)特征是識別不同種類霉菌的重要依據(jù)。霉菌菌絲和孢子的寬度通常比細(xì)菌和放線菌粗得多（約3～10μm），常是細(xì)菌菌體寬度的幾倍至幾十倍，因此，用低倍顯微鏡即可觀察。本實驗采用毛霉、青霉，曲霉，根霉四種常見的霉菌作為菌種進(jìn)行觀察。2.小室培養(yǎng)法觀察霉菌的形態(tài)有多種方法，常用的有直接制片觀察法、載玻片培養(yǎng)觀察法和玻璃培養(yǎng)觀察法三種方法，本次實驗采用載玻片培養(yǎng)觀察法（小室培養(yǎng)法）。用無菌操作將培養(yǎng)基瓊脂薄層置于載玻片上，沿瓊脂邊緣接種后蓋上蓋玻片培養(yǎng)，霉菌即在載玻片和蓋玻片之間的有限空間內(nèi)沿蓋玻片橫向生長。培養(yǎng)一定時間后，將載玻片上的培養(yǎng)物置于顯微鏡下觀察。這種方法既可以保持霉菌自然生長狀態(tài)，還便于觀察不同發(fā)育期的培養(yǎng)物。三．實驗器材1.菌種曲霉（Aspergillussp.），青霉（Penicilliumsp.），毛霉（Mucorsp.）和根霉（Rhizopussp.）培養(yǎng)48h的馬鈴薯瓊脂（PDA）斜面培養(yǎng)物。2.培養(yǎng)基及試劑馬鈴薯瓊脂（PDA），20%甘油（無菌），乙醇。3.儀器及其它用品無菌操作臺，解剖刀，鑷子，無菌吸管，U型玻璃棒，普通光學(xué)顯微鏡，擦鏡紙，綢布，酒精燈，載玻片，接種針，培養(yǎng)皿等。四．操作步驟1.培養(yǎng)基的配制按附錄所示配方稱取PDA各組分，先將馬鈴薯去皮，切成小塊稱取20g煮沸20min，然后先用1層紗布濾去未溶解的固體，再用6層紗布過濾，將濾液體積用無菌水調(diào)至100mL，然后再加入糖及瓊脂，加塞后用牛皮紙包好，準(zhǔn)備滅菌。2.培養(yǎng)基及裝置的滅菌（1）滅菌準(zhǔn)備準(zhǔn)備12個平皿，在其中10個平皿皿底鋪一張略小于皿底的圓濾紙片，再放一U形玻棒，其上放一潔凈載玻片和三塊蓋玻片，蓋上皿蓋后再與另外2個空平皿一起用牛皮紙包好；在100mL錐形瓶中用甘油配制20%的甘油，加塞包好；最后取2mL移液管兩支并用牛皮紙包好。（2）滅菌將上述用牛皮紙包好的儀器與試劑連同配好的PDA培養(yǎng)基一并放入滅菌鍋中110℃滅菌20~30min3.瓊脂塊制備分別取已滅菌并溶化冷卻至約50℃的馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基6～7mL注入兩個滅菌空平皿中，使之凝固成薄層。在兩個凝固后的平板背部用記號筆畫下約1×1cm4.接種在無菌操作臺上，先用鑷子將載玻片放于U型玻璃管上，然后用解剖刀取一小塊兒瓊脂塊，置于載玻片上，用接種環(huán)分別從斜面培養(yǎng)物上挑取很少量的4種菌的孢子，分別接種于培養(yǎng)小室中瓊脂塊的邊緣上，用無菌鑷子將蓋玻片覆蓋在瓊脂塊上。最后用移液管在培養(yǎng)小室中的圓濾紙上加2mL滅菌的20%的甘油（用于保持平皿內(nèi)的濕度)，蓋上皿蓋并貼上標(biāo)簽，每一種菌接種兩個小室（其中毛霉接種4個小室）。5.恒溫培養(yǎng)將接種后的平皿正置于28℃培養(yǎng)箱中恒溫培養(yǎng)7天6.鏡檢在顯微鏡下直接觀察小室培養(yǎng)后的載玻片，用低倍鏡即可較為清晰的觀察到霉菌的菌絲體及孢子，根據(jù)所學(xué)的四種菌的基本特征對四種菌進(jìn)行觀察比較與區(qū)分，必要時可以采用高倍鏡對菌進(jìn)行觀察。五．實驗結(jié)果記錄

1.四種霉菌的形態(tài)特征毛霉、根霉、青霉、曲霉的形態(tài)特征比較菌種形態(tài)特征根霉菌絲無隔、多核、分枝狀，有匍匐菌絲和假根。在假根的上方直立地生長出一至數(shù)根孢囊梗，其頂端膨大成球形孢子囊。囊的基部有囊托，中間有球形或半球形囊軸。囊內(nèi)產(chǎn)大量孢囊孢子，有性生殖時由不同性別的菌絲或匍匐菌絲上生出配子囊，配子囊雙雙異宗配合形成一接合孢子。曲霉?fàn)I養(yǎng)菌絲具有分隔；氣生菌絲的一部分形成長而粗糙的分生孢子梗，頂端膨大成球狀頂囊，表面輻射出一層或兩層小梗，小梗上著生成串的球形分生孢子。分生孢子梗生于足細(xì)胞上，并通過足細(xì)胞與營養(yǎng)菌絲相連。毛霉菌絲無隔、多核、分枝狀，無假根或匍匐菌絲。菌絲體上直接生出單生、總狀分枝或假軸狀分枝的孢囊梗。各分枝頂端著生球形孢子囊，無囊托。青霉菌絲有橫隔，分生孢子梗亦有橫隔，光滑或粗糙?；繜o足細(xì)胞，頂端不形成膨大的頂囊，其分生孢子梗經(jīng)過多次分枝，產(chǎn)生幾輪對稱或不對稱的小梗，形如掃帚，稱為帚狀體。小梗頂端有孢子。2.四種霉菌的圖示圖1根霉的形態(tài)（10×40）圖2黑曲霉的形態(tài)（10×10）圖3黑曲霉的形態(tài)（10×40）圖4黑曲霉足細(xì)胞（10×40）圖5毛霉的形態(tài)（10×40）隔分生小梗隔分生小梗圖6青霉的形態(tài)（10×40）六、實驗小結(jié)通過本次實驗，學(xué)會了小室培養(yǎng)培及馬鈴薯培養(yǎng)基的配制方法。另外，通過觀察霉菌的形態(tài)并且有特別的關(guān)注不同霉菌的細(xì)節(jié)及不同之處，比如菌絲是否有隔，孢子囊形態(tài)等特征，細(xì)心比較各種霉菌細(xì)節(jié)狀態(tài)的不同，掌握了霉菌的一些基本形態(tài)特征，擴展了視野。七、思考題1、黑曲霉和黑根霉在形態(tài)特征上有何區(qū)別？①菌絲：根霉無隔有假根，曲霉無隔有足細(xì)胞。②孢子梗：根霉位于假根上，曲霉由氣生菌絲分化而來。③孢子囊形態(tài)：根霉孢子囊表面平滑，曲霉表面不平滑，呈絮狀。2、如果要求對某放線菌或霉菌不同發(fā)育時期（基內(nèi)菌絲→氣生菌絲→孢子絲或繁殖菌絲）進(jìn)行連續(xù)觀察，寫出實驗方案。①選取對數(shù)期菌落進(jìn)行同步培養(yǎng)，分化出處于同一生長階段的菌。②接種，若放線菌則在平皿上插上至少7下培養(yǎng)，每隔一天在相