丙泊酚對(duì)大鼠肝臟細(xì)胞色素酶P450及同工酶影響的研究

丙泊酚對(duì)大鼠肝臟細(xì)胞色素酶P450及同工酶影響的研究隨著對(duì)藥物代謝酶的研究不斷深入,藥物在體內(nèi)代謝的研究不在局限于對(duì)代謝產(chǎn)物的分離鑒定,而是參與藥物代謝的酶學(xué)特征及相關(guān)基因分子生物學(xué)特征。細(xì)胞色素P450(cytochromeP450,CYP)是參與眾多外源物和內(nèi)源物在體內(nèi)代謝失活/活化的重要酶系,主要存在于肝微粒體中。CYP催化外源物的代謝具有范圍廣、專(zhuān)一性差、結(jié)構(gòu)差別大、個(gè)體差異大、催化底物有交叉重疊性以及易受誘導(dǎo)和抑制等特點(diǎn)。在藥物代謝過(guò)程中往往存在一種CYP亞族參與多個(gè)藥物代謝、一種藥物由多個(gè)CYP亞族催化代謝的現(xiàn)象。同時(shí),許多藥物既是某種藥酶的底物,也可能是該種酶或其他酶的誘導(dǎo)劑或抑制劑,當(dāng)多種藥物聯(lián)合用藥時(shí),有可能導(dǎo)致其中一種藥物發(fā)生代謝障礙或加快代謝速度,使發(fā)生毒副反應(yīng)或藥物效應(yīng)降低。丙泊酚由于生物轉(zhuǎn)化迅速而成為臨床上應(yīng)用最廣泛的麻醉藥。經(jīng)典的觀點(diǎn)認(rèn)為丙泊酚不需經(jīng)過(guò)P450氧化代謝,在肝內(nèi)主要由葡萄糖醛酸降解為醌類(lèi)代謝產(chǎn)物而排除。但現(xiàn)在觀點(diǎn)認(rèn)為CYP3A4、CYP2C9、CYP2A6等多種P450同工酶均能代謝丙泊酚,其中62%丙泊酚通過(guò)葡萄糖醛酸代謝,38%由P450同工酶代謝。而細(xì)胞色素酶P450的活性受藥物、環(huán)境因子,甚至食物成分以及炎癥等多種因素的影響而發(fā)生改變。但是有關(guān)丙泊酚對(duì)細(xì)胞色素酶P450同工酶影響的研究未見(jiàn)報(bào)道。本研究通過(guò)以經(jīng)典的酶誘導(dǎo)劑75mg/kg苯巴比妥鈉作為對(duì)照組,通過(guò)腹腔給藥測(cè)定丙泊酚對(duì)SD大鼠肝細(xì)胞色素酶P450及CYP2E1、CYP3A4的影響。1.丙泊酚和苯巴比妥鈉麻醉ED50的測(cè)定:目的:序貫法測(cè)定SD大鼠腹腔注射苯巴比妥鈉和丙泊酚的麻醉半數(shù)有效量ED50,確定丙泊酚的酶誘導(dǎo)劑量。方法:36只SD大鼠,隨機(jī)分為兩組:苯巴比妥鈉組(n=18),丙泊酚組(n=18)。大鼠腹腔給藥后立即觀察大鼠的行為學(xué)表現(xiàn),以大鼠前爪翻正發(fā)射消失作為麻醉終點(diǎn)的指標(biāo),前爪翻正反射恢復(fù)作為意識(shí)恢復(fù)的指標(biāo)。用序貫增減法確定給藥劑量,根據(jù)公式ED50=lg-1(ΣC/Σt)計(jì)算各組動(dòng)物的ED50,在此基礎(chǔ)上求出兩藥ED50的效價(jià)比。結(jié)果:序貫法測(cè)定SD大鼠苯巴比妥鈉的半數(shù)有效量ED50為122.415mg/kg;丙泊酚的麻醉半數(shù)有效量ED50為59.452mg/kg,兩種藥物ED50的效價(jià)比為0.486。結(jié)論:75mg/kg苯巴比妥鈉麻醉鎮(zhèn)靜劑量相當(dāng)于丙泊酚36.42mg/kg。2.從行為學(xué)上觀察丙泊酚對(duì)細(xì)胞色素酶P450的影響目的:從行為學(xué)上觀察丙泊酚對(duì)細(xì)胞色素酶P450的影響。方法:健康雄性大鼠分為:苯巴比妥鈉組75mg/kg、丙泊酚組36.42mg/kg、對(duì)照組等體積的生理鹽水,每組8只,每天單次腹腔注射,連續(xù)用藥三天后,在給予1.5倍ED50丙泊酚75mg/kg,測(cè)定大鼠的反正翻射消失和恢復(fù)時(shí)間.觀察其行為學(xué)表現(xiàn).(翻正反射消失的時(shí)間和恢復(fù)時(shí)間)。結(jié)果:SD大鼠苯巴比妥鈉、丙泊酚和生理鹽水組分別每天單次腹腔注射,連續(xù)三天,第四天測(cè)定大鼠丙泊酚麻醉的翻正反射,與生理鹽水組比較,丙泊酚組潛伏期縮短P<0.01。結(jié)論:丙泊酚具有與苯巴比妥鈉相同的酶誘導(dǎo)現(xiàn)象。3.研究丙泊酚對(duì)肝微粒體蛋白和細(xì)胞色素酶P450及其同工酶含量的變化目的:測(cè)定丙泊酚對(duì)肝微粒體蛋白和細(xì)胞色素酶P450及其同工酶含量的變化。方法:健康雄性SD大鼠36只,體重180-220g,隨機(jī)分為3組,苯巴比妥鈉組、丙泊酚組、生理鹽水組,分別給予大鼠苯巴比妥鈉75mg/kg、丙泊酚36.42mg/kg及等量生理鹽水,持續(xù)三天。鈣沉淀法制備大鼠肝微粒體溶液,并測(cè)定肝微粒體蛋白含量和P450的含量以及同工酶CYP2E1、CYP3A4的活性。結(jié)果:三組間肝重指數(shù)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05),三組間肝微粒體蛋白含量經(jīng)單因素方差分析差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05),與生理鹽水組比較(p<0.05),苯巴比妥鈉組和丙泊酚組微粒體蛋白含量升高(p<0.05)。大鼠肝微粒體CYP450含量,與生理鹽水組比較,苯巴比妥鈉組和丙泊酚組P450含量增高(p<0.05),與苯巴比妥鈉組比較,苯巴比妥鈉組CYP450含量增加更加顯著(p<0.05);各組間氨基比林-N脫甲基酶活性、紅霉素脫甲基酶活性單因素方差分析差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,與生理鹽水組比較,苯巴比妥鈉組氨基比林-N脫甲基酶活性顯著增高(p<0.01),而丙泊酚組酶活性差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,提示丙泊酚對(duì)大鼠氨基比林-N-脫甲基活性無(wú)影響,紅霉素脫甲基酶活性結(jié)果分析表明,與生理鹽水組比較,苯巴比妥鈉組紅霉素脫甲基酶活性顯著上升(p<0.01);而丙泊酚組紅霉