DB2312T 087-2023胚培養(yǎng)滅活疫苗用種雞蛋檢驗技術(shù)操作規(guī)程

CCSB41DB2312綏化市市場監(jiān)督管理局發(fā)布DB2312/T087—2023本文件按照GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。本文件由綏化市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局歸口。本文件起草單位：黑龍江省百洲生物工程有限公司、明水縣農(nóng)業(yè)綜合行政執(zhí)法大隊。本文件主要起草人：李山峰、張洪楠、張越、王丹、王海楠、王東升。1DB2312/T087—2023本文件規(guī)定了胚培養(yǎng)滅活疫苗的種雞蛋的蛋重、蛋形、孵化率、蛋殼表面細(xì)菌含量、蛋內(nèi)容物細(xì)菌含量、卵黃抗體、病原7項檢驗方法。本文件適用于獸用生物制品生產(chǎn)企業(yè)對胚培養(yǎng)滅活疫苗用種雞蛋檢測及質(zhì)量考察。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T16550雞新城疫診斷技術(shù)GB/T19167傳染性法氏囊病診斷技術(shù)GB/T23197雞傳染性支氣管炎診斷技術(shù)NY/T551雞產(chǎn)蛋下降綜合征診斷技術(shù)NY/T772禽流感病毒RT-PCR檢測方法SN/T4053雞傳染性貧血檢疫技術(shù)規(guī)范《中華人民共和國獸藥典》2020年版（三部）3術(shù)語和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。4主要技術(shù)內(nèi)容4.1蛋重使用電子天平稱重（精度為0.1g），應(yīng)控制在50g～70g之間，且整齊度不大于10g。4.2蛋形肉眼觀察應(yīng)為卵圓形，表面光澤無裂紋、沙皮、畸形。4.3孵化率將種蛋洗凈、消毒后入孵化器孵化，溫度控制在38℃~38.5℃之間，濕度控制在65%～70%之間，每60min翻蛋一次，孵化5d～6d，用照蛋燈逐個照檢，胚胎及血管發(fā)育正常為合格，孵化率應(yīng)大于90%。4.4蛋殼表面細(xì)菌含量檢測每批抽檢10枚種雞蛋，分別用無菌棉拭子在蛋殼表面擦拭1cm2面積后馬上折斷棉拭子頭放入準(zhǔn)備好的含10ml生理鹽水的無菌瓶內(nèi)，將無菌瓶放在振蕩器上200r/min振蕩10min，在超凈工作臺內(nèi)分別吸取0.1ml生理鹽水，涂布于TSA培養(yǎng)基平板上，37℃培養(yǎng)48h，統(tǒng)計菌落數(shù)，為消毒效果提供數(shù)據(jù)指導(dǎo)。4.5蛋內(nèi)容物細(xì)菌含量檢測每批抽檢10枚種雞蛋，打開蛋殼倒出蛋清和蛋黃，按1：2加入無菌生理鹽水用無菌組織搗碎機(jī)勻2DB2312/T087—2023漿，在超凈工作臺內(nèi)分別吸取0.1ml生理鹽水，涂布于TSA培養(yǎng)基平板上，37℃培養(yǎng)48h，統(tǒng)計菌落數(shù)，為產(chǎn)品生產(chǎn)過程控制以及追溯提供數(shù)據(jù)支撐。4.6卵黃抗體每批抽檢10枚種雞蛋，卵黃直接稀釋測定法檢測：在樣品管中加入0.5ml0.9%生理鹽水，再吸取0.5ml卵黃做1:1稀釋，混勻后即為待檢卵黃樣品，依照《中華人民共和國獸藥典》2020版三部附錄血凝抑制試驗方法測定，判定結(jié)果時以完全抑制4HA單位抗原的最高稀釋度作為判定終點，卵黃中雞新城疫、禽流感（H9亞型）或傳染性支氣管炎（M41株)的抗體效價均應(yīng)小于1：4。在卵黃直接稀釋測定法檢測出現(xiàn)跳孔或測不出抗體時，采用卵黃氯仿萃取法檢測，取上述1:1稀釋過的卵黃稀釋液0.5ml，在通風(fēng)櫥中加入0.5ml氯仿，震蕩混勻，室溫靜置30min，3000r/min離心5min，作為待檢卵黃樣品，進(jìn)行HI抗體檢測，判定結(jié)果時以完全抑制4HA單位抗原的最高稀釋度作為判定終點，讀數(shù)加1，卵黃中雞新城疫、禽流感（H9亞型）或雞傳染性支氣管炎（M41株)的抗體效價均應(yīng)小于1：4。4.7外源病毒檢測每批抽檢10枚種雞蛋，打開蛋殼倒出蛋清和蛋黃，用無菌組織搗碎機(jī)勻漿，重點檢測經(jīng)胚垂直傳播的病原體。按照NY/T772的規(guī)定檢測禽流感，應(yīng)為陰性；按照GB/T16550的規(guī)定檢測雞新城疫，應(yīng)為陰性；按照GB/T23197的規(guī)定檢測雞傳染性支氣管炎，應(yīng)為陰性；按照《中華人民共和國獸藥典》2020版三部附錄3302ELISA方法檢測禽白血病，應(yīng)為陰性；按照《中華人民共和國獸藥典》2020版三部附錄3304間接免疫熒光試驗（IFA)方法檢測禽網(wǎng)狀內(nèi)皮增生癥，應(yīng)為陰性；按照GB/T按照SN/T按照NY/T19167的規(guī)定檢測雞傳染性法氏囊病，應(yīng)為陰性；4053的規(guī)定檢測雞傳染性貧血，應(yīng)為陰性；551的規(guī)定檢測產(chǎn)蛋下降綜合征，應(yīng)為陰性。5檢驗記