《諸氏鯔蝦虎魚 毒理學(xué)評(píng)價(jià) 第2部分：攝食抑制》

1DB44/TXXXX.2—2021諸氏鯔蝦虎魚毒理學(xué)評(píng)價(jià)第2部分：攝食抑制本文件規(guī)定了諸氏鯔蝦虎魚毒理學(xué)評(píng)價(jià)中攝食抑制的原理、器材、評(píng)價(jià)步驟、質(zhì)量控制、結(jié)果與報(bào)告、實(shí)驗(yàn)室廢棄物的處理等要求。本文件適用于直接或間接排入海洋、入海河口的污染物及受納水體的攝食抑制毒性評(píng)價(jià)。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件。不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T18420.2-2009海洋石油勘探開發(fā)污染物生物毒性第2部分：檢驗(yàn)方法SN/T3592實(shí)驗(yàn)室化學(xué)藥品和樣品廢棄物處理的標(biāo)準(zhǔn)指南DB44/Txxxx.1-2021諸氏鯔蝦虎魚毒理學(xué)評(píng)價(jià)第1部分：急性毒性3術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。3.1半數(shù)效應(yīng)濃度medianeffectiveconcentration,EC50在一定觀察期內(nèi)，與對(duì)照組相比，引起實(shí)驗(yàn)魚攝食量減少50%的受試物濃度。3.2攝食量foodintake魚類在一定時(shí)間內(nèi)攝食的食物數(shù)量或生物量。3.3攝食抑制feedinginhibition動(dòng)物接觸外源物質(zhì)后引起的異常攝食效應(yīng)，包括攝食量、攝食種類等的改變。4原理魚類大多具有敏銳的化學(xué)感覺，以感受其生存環(huán)境中的許多信息，水環(huán)境中的化學(xué)信息影響著包括攝食、游泳等魚類行為的各個(gè)方面。通過觀察測(cè)定諸氏鯔蝦虎魚在一定試驗(yàn)期間內(nèi)接觸試驗(yàn)物質(zhì)后的攝食異常效應(yīng)，可得到毒性物質(zhì)對(duì)諸氏鯔蝦虎魚攝食有顯著影響的具體濃度。5器材5.1主要儀器設(shè)備5.1.1飼養(yǎng)諸氏鯔蝦虎魚和輪蟲的養(yǎng)殖箱、水處理設(shè)備等。2DB44/TXXXX.2—20215.1.2測(cè)定環(huán)境因子的溶氧儀、鹽度計(jì)、pH計(jì)、溫度計(jì)等。5.1.3電子天平、高速攪拌器、生物顯微鏡、惰性材料容器、量筒、膠頭滴管、手抄網(wǎng)等。5.2諸氏鯔蝦虎魚5.2.1質(zhì)量按DB44/Txxxx.1-2021中6.2.1的規(guī)定執(zhí)行。5.2.2日齡選擇宜采用8日齡～14日齡仔魚，同批收集的仔魚孵出時(shí)間間隔不能超過24h。5.2.3餌料褶皺臂尾輪蟲（Brachionusplicatilis質(zhì)量應(yīng)符合B44/Txxxx.1-2021中6.2.3.1的規(guī)定。5.3受試物按照DB44/Txxxx.1—2021中6.3的規(guī)定執(zhí)行。6評(píng)價(jià)步驟6.1樣品準(zhǔn)備6.1.1稀釋水天然海水或人工配制海水，水質(zhì)及配制方法按照DB44/Txxxx.1-2021中7.1.1的規(guī)定執(zhí)行。6.1.2貯備液配制按照DB44/Txxxx.1-2021中7.1.2的規(guī)定執(zhí)行。6.2麻醉劑配制按照DB44/Txxxx.1-2021中6.5的規(guī)定執(zhí)行。6.3諸氏鯔蝦虎魚準(zhǔn)備將馴養(yǎng)后的8日齡～14日齡的諸氏鯔蝦虎魚置于稀釋水中饑餓5h～24h。6.4試驗(yàn)濃度設(shè)置至少應(yīng)設(shè)定5個(gè)濃度組（等比系數(shù)應(yīng)不大于2.0并設(shè)一個(gè)空白對(duì)照組。若使用助溶劑應(yīng)增設(shè)助溶劑對(duì)照組，助溶劑的濃度應(yīng)與試驗(yàn)組中助溶劑的最高濃度一致，試驗(yàn)溶液中助溶劑的最高濃度不得超過0.1‰。每個(gè)試驗(yàn)容器液體體積為40mL。各試驗(yàn)組設(shè)3個(gè)平行。6.5諸氏鯔蝦虎魚移入采用適度強(qiáng)光誘使仔魚集中，用膠頭滴管在饑餓魚箱中隨機(jī)撈取，從低濃度組開始依次向高濃度組分放，每個(gè)容器10尾，在30min內(nèi)完成。6.6試驗(yàn)環(huán)境條件3DB44/TXXXX.2—2021試驗(yàn)期間水溫變化范圍不超過1℃,其它環(huán)境條件符合DB44/Txxxx.1-2021中7.4.3的規(guī)定。6.7投喂向各試驗(yàn)容器中投入褶皺臂尾輪蟲，使試液中輪蟲密度約為60個(gè)/mL。每個(gè)試驗(yàn)容器投喂體積不超過0.2mL。6.8觀察和記錄輪蟲投入后開始計(jì)時(shí)，試驗(yàn)持續(xù)時(shí)間為1h。試驗(yàn)開始和結(jié)束時(shí)測(cè)定試驗(yàn)溶液水溫、鹽度、pH值、溶解氧，并記錄于原始記錄表中。原始記錄表見附錄A中的表A.1。試驗(yàn)結(jié)束時(shí)向試驗(yàn)容器中加入麻醉劑，使MS-222終濃度為5.0mg/L～20.0mg/L，用膠頭滴管吸取諸氏鯔蝦虎魚置于載玻片上，40×~100×顯微鏡下觀察。攝食輪蟲數(shù)以仔魚消化道內(nèi)未被消化的輪蟲咀嚼器數(shù)量為準(zhǔn)。雙人或多人重復(fù)觀察計(jì)數(shù)，結(jié)果取平均值，記錄于原始記錄表中。原始記錄表見附錄A中的表A.2。7質(zhì)量控制7.1試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，對(duì)照組（包括空白對(duì)照組和溶劑對(duì)照組）和試驗(yàn)組諸氏鯔蝦虎魚無(wú)死亡。7.2對(duì)照組平均輪蟲攝食數(shù)量7個(gè)以上（包括本數(shù)），且平行組間變異系數(shù)小于15%。7.3原始記錄應(yīng)完整，包括樣品名稱、編號(hào)、試驗(yàn)時(shí)間、評(píng)價(jià)依據(jù)、馴養(yǎng)及質(zhì)量控制記錄等。8結(jié)果與報(bào)告8.1結(jié)果計(jì)算按照GB/T18420.2-2009附錄C方法計(jì)算EC50。8.2評(píng)價(jià)報(bào)告評(píng)價(jià)報(bào)告內(nèi)容應(yīng)包括以下內(nèi)容：a)受試物，包括受試樣品的名稱、來源、保存方法、保存時(shí)間等。b)諸氏鯔蝦虎魚，包括來源、日齡、馴養(yǎng)情況。c）試驗(yàn)條件，包括：1）貯備液和試驗(yàn)溶液配制方法、濃度；2）各試驗(yàn)容器諸氏鯔蝦虎魚的數(shù)量；3）試驗(yàn)開始和結(jié)束時(shí)的水質(zhì)因子，如水溫、溶氧、鹽度、pH等。d）結(jié)果，包括：1）各個(gè)試驗(yàn)組死亡率、攝食輪蟲數(shù)；2）攝食抑制EC50值及其計(jì)算方法；3）試驗(yàn)期間，可能會(huì)影響試驗(yàn)結(jié)果的因素。9實(shí)驗(yàn)室廢棄物處理按照SN/T3592的規(guī)定執(zhí)行。4DB44/TXXXX.2—2021附錄A（資料性）諸氏鯔蝦虎魚攝食抑制評(píng)價(jià)原始記錄表A.1諸氏鯔蝦虎魚攝食抑制評(píng)價(jià)水質(zhì)因子原始記錄表諸氏鯔蝦虎魚攝食抑制評(píng)價(jià)水質(zhì)因子原始記錄見表A.1。表A.1諸氏鯔蝦虎魚攝食抑制評(píng)價(jià)水質(zhì)因子原始記錄表樣品名稱：評(píng)價(jià)依據(jù)：樣品編號(hào)：樣品表觀性狀：評(píng)價(jià)日期：℃‰評(píng)價(jià)結(jié)束時(shí)評(píng)價(jià)人（簽名復(fù)核人（簽名A.2諸氏鯔蝦虎魚攝食抑制評(píng)價(jià)攝食量原始記錄表諸氏鯔蝦虎魚攝食抑制評(píng)價(jià)攝食量原始記錄見表A.2。5DB44/TXX