實(shí)驗(yàn)室分析方法驗(yàn)證及案例課件

分析方法驗(yàn)證

MethodValidation2005-101實(shí)驗(yàn)室分析方法驗(yàn)證及案例需要驗(yàn)證的分析方法藥典方法完全驗(yàn)證或部分驗(yàn)證或系統(tǒng)適用性試驗(yàn)非藥典分析方法(新建立變更修改)成品的方法(含量有關(guān)物質(zhì))殘留溶劑測(cè)定方法原料中間體測(cè)定方法清洗驗(yàn)證分析方法的驗(yàn)證其它雜質(zhì)研究用方法穩(wěn)定性批示方法Stabilityindicatingmethods2實(shí)驗(yàn)室分析方法驗(yàn)證及案例方法適用范圍和可接受標(biāo)準(zhǔn)方案中應(yīng)確定,包括:化合物的成分、組成和含量輔料或添加劑定量/定性檢測(cè)限和定量限線性范圍精密度和準(zhǔn)確度儀器的類型3實(shí)驗(yàn)室分析方法驗(yàn)證及案例驗(yàn)證方案的內(nèi)容驗(yàn)證目的:方法原理使用范圍和目的.驗(yàn)證人員及職責(zé)(驗(yàn)證執(zhí)行人員、組長(zhǎng)、經(jīng)理、QA):引用標(biāo)準(zhǔn)分析方法SOP儀器及其操作參數(shù)需要的檢驗(yàn)材料、試劑及標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)等;溶液的制備:標(biāo)準(zhǔn)、樣品溶液等的制備;測(cè)定的過(guò)程:如平衡時(shí)間,空白、標(biāo)準(zhǔn)、樣品測(cè)定次序,系統(tǒng)適用性試驗(yàn)(項(xiàng)目、指標(biāo)),測(cè)定參數(shù)等;計(jì)算公式及說(shuō)明。4實(shí)驗(yàn)室分析方法驗(yàn)證及案例驗(yàn)證方案的內(nèi)容驗(yàn)證項(xiàng)目可接受標(biāo)準(zhǔn)驗(yàn)證內(nèi)容驗(yàn)證項(xiàng)目1測(cè)定規(guī)程（溶液配制、測(cè)定條件、測(cè)定方法）數(shù)據(jù)表格計(jì)算公式及結(jié)果統(tǒng)計(jì)結(jié)論記錄與圖譜要求驗(yàn)證項(xiàng)目2……樣品測(cè)定（包括系統(tǒng)適用性試驗(yàn)等）驗(yàn)證評(píng)價(jià)及結(jié)論要求。驗(yàn)證方案的起草、審核、批準(zhǔn)5實(shí)驗(yàn)室分析方法驗(yàn)證及案例驗(yàn)證報(bào)告內(nèi)容摘要：方法原理、檢驗(yàn)?zāi)康暮蛻?yīng)用范圍；化合物類型；驗(yàn)證結(jié)果及結(jié)論。驗(yàn)證人員及職責(zé)測(cè)定方法描述驗(yàn)證項(xiàng)目1測(cè)定規(guī)程（溶液配制、測(cè)定條件、測(cè)定方法）數(shù)據(jù)表格計(jì)算公式及結(jié)果統(tǒng)計(jì)結(jié)論記錄與圖譜、標(biāo)準(zhǔn)曲線驗(yàn)證項(xiàng)目2……6實(shí)驗(yàn)室分析方法驗(yàn)證及案例驗(yàn)證報(bào)告內(nèi)容樣品測(cè)定（包括系統(tǒng)適用性試驗(yàn)等）驗(yàn)證評(píng)價(jià)及結(jié)論。起草、審核、批準(zhǔn)。附件：SOP、驗(yàn)證記錄、圖譜、標(biāo)準(zhǔn)曲線復(fù)印件。7實(shí)驗(yàn)室分析方法驗(yàn)證及案例分析方法分類標(biāo)準(zhǔn)分析方法：指法定分析方法，包括各國(guó)現(xiàn)行的藥典（USP、EP）或其實(shí)公認(rèn)的的標(biāo)準(zhǔn)參考資料中的方法。非標(biāo)準(zhǔn)化分析方法：新建立的分析方法或修改了的標(biāo)準(zhǔn)化分析方法都屬于非標(biāo)準(zhǔn)分析方法。在根據(jù)方法類型，選擇不同的驗(yàn)證項(xiàng)目進(jìn)行分析方法驗(yàn)證8實(shí)驗(yàn)室分析方法驗(yàn)證及案例分析方法驗(yàn)證重視程度驗(yàn)證的方法類型和內(nèi)容必須反映分析的目的和API生產(chǎn)的步驟。原料（GB）溶劑API包裝材料關(guān)鍵中間體GMP要求驗(yàn)證的重要性遞增

9實(shí)驗(yàn)室分析方法驗(yàn)證及案例分析方法驗(yàn)證的前提儀器：已校驗(yàn)，校驗(yàn)同期之內(nèi)；人員：培訓(xùn)；熟悉方法和儀器；對(duì)照品：法定標(biāo)準(zhǔn)品、商業(yè)標(biāo)準(zhǔn)品、工作標(biāo)準(zhǔn)品；材料：試劑；容器穩(wěn)定性：溶液和試劑在檢驗(yàn)周期的穩(wěn)定性，尤其使用自動(dòng)進(jìn)樣器。方法的開(kāi)發(fā)以完成，對(duì)方法草案進(jìn)行驗(yàn)證。10實(shí)驗(yàn)室分析方法驗(yàn)證及案例分析方法驗(yàn)證檢查的關(guān)注點(diǎn)驗(yàn)證的SOP驗(yàn)證方案：起草、審核和批準(zhǔn)驗(yàn)證項(xiàng)目和可接受標(biāo)準(zhǔn)驗(yàn)證用標(biāo)準(zhǔn)品和樣品驗(yàn)證報(bào)告：起草、審核批準(zhǔn)11實(shí)驗(yàn)室分析方法驗(yàn)證及案例標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證Q7A：除非所使用方法是載于現(xiàn)行法定藥典或其它公認(rèn)的標(biāo)準(zhǔn)參考資料內(nèi)，分析方法應(yīng)進(jìn)行驗(yàn)證。盡管如此，所有所用方法的適用性應(yīng)在實(shí)際使用情況予以證實(shí)并記錄成文。兩個(gè)要求：實(shí)驗(yàn)室必須滿足標(biāo)準(zhǔn)方法規(guī)定的性能指標(biāo)；標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證的數(shù)據(jù)必須充分滿足實(shí)驗(yàn)室測(cè)定的要求。12實(shí)驗(yàn)室分析方法驗(yàn)證及案例標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證對(duì)標(biāo)準(zhǔn)分析方法進(jìn)行評(píng)價(jià)，以確定需要進(jìn)行驗(yàn)證的程度。有三種選擇：不需要驗(yàn)證（系統(tǒng)適用性試驗(yàn)）部分驗(yàn)證和完全驗(yàn)證。適用性考慮的因素有：用戶的儀器、人員、試劑和環(huán)境條件證明可以滿足方法規(guī)定的分析要求，則只需規(guī)定和執(zhí)行系統(tǒng)適用性試驗(yàn)即可，方法無(wú)需再驗(yàn)證；評(píng)價(jià)：化合物的類型、方法的檢測(cè)限和定量限、線性范圍、儀器的類型及其它的存放地和環(huán)境條件等。13實(shí)驗(yàn)室分析方法驗(yàn)證及案例標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證企業(yè)內(nèi)控的要求藥品申報(bào)注冊(cè)要求檢驗(yàn)方法性能的再驗(yàn)證一些臨介項(xiàng)目，如雜質(zhì)檢查的定量限和檢測(cè)限，應(yīng)予以證明。14實(shí)驗(yàn)室分析方法驗(yàn)證及案例非標(biāo)準(zhǔn)分析方法新建立修改或變更15實(shí)驗(yàn)室分析方法驗(yàn)證及案例驗(yàn)證的方法類型 分析方法類型有四類：鑒別；雜質(zhì)定量；雜質(zhì)限度檢查；含量原料藥含量或制劑中有效成份測(cè)定；藥品溶出度釋放度測(cè)定。16實(shí)驗(yàn)室分析方法驗(yàn)證及案例分析方法的驗(yàn)證項(xiàng)目1.Specificity(專屬性)2.Precision(精密度)3.Accuracy(準(zhǔn)確度)4.Linesrity(線性)5.Range(范圍)6.DetectionLimit(檢測(cè)限)7.QuantitationLimit(定量限)8.Robustness(耐用性)（USP）17實(shí)驗(yàn)室分析方法驗(yàn)證及案例驗(yàn)證內(nèi)容分析方法的驗(yàn)證，一般根據(jù)方法的類型和檢測(cè)的要求，有驗(yàn)證方案中擬訂驗(yàn)證的內(nèi)容和可接受標(biāo)準(zhǔn)；專屬性精密度（包括重復(fù)性中間精密度）線性范圍準(zhǔn)確度檢測(cè)限和定量限。耐用性只有在分析方法建立的適當(dāng)階段或特殊要求時(shí)予以考慮進(jìn)行驗(yàn)證。18實(shí)驗(yàn)室分析方法驗(yàn)證及案例驗(yàn)證的方法類型與驗(yàn)證內(nèi)容

鑒別雜質(zhì)定量雜質(zhì)限度含量/效價(jià)溶出度準(zhǔn)確度-

+

-+精密度重復(fù)性中間精密度

--

++(1)

--

++專屬性++++檢測(cè)限-++-定量限-+--線性-+-+范圍-+-+19實(shí)驗(yàn)室分析方法驗(yàn)證及案例驗(yàn)證的方法類型與驗(yàn)證內(nèi)容(補(bǔ)充)“+”代表需要“-”代表不需要（1）有了重現(xiàn)性驗(yàn)證情況下，驗(yàn)證可不需要20實(shí)驗(yàn)室分析方法驗(yàn)證及案例專屬性（Specificity）定義專屬性是指在其他成份（如雜質(zhì)、降解產(chǎn)物、輔料等）可能存在的情況下，采用的方法能準(zhǔn)確測(cè)定出被測(cè)物的特性；能反映該分析方法在有共存物時(shí)對(duì)供試物準(zhǔn)確而不受干擾的測(cè)定能力。21實(shí)驗(yàn)室分析方法驗(yàn)證及案例專屬性的測(cè)定鑒別反應(yīng)：能與可能共存的物質(zhì)或結(jié)構(gòu)相似的化合物區(qū)分。含量測(cè)定和雜質(zhì)測(cè)定分離度評(píng)價(jià)—色譜法和其他分離方法；已知的雜質(zhì)定性；破壞性試驗(yàn)證明DAD（PDA）峰純度檢查。22實(shí)驗(yàn)室分析方法驗(yàn)證及案例準(zhǔn)確度（Accuracy）準(zhǔn)確度是指用該方法測(cè)定的結(jié)果與真實(shí)值或參考值接近的程度。一般以回收率（%）表示。準(zhǔn)確度應(yīng)在不同測(cè)定項(xiàng)目規(guī)定的限度范圍內(nèi)建立。23實(shí)驗(yàn)室分析方法驗(yàn)證及案例準(zhǔn)確度測(cè)定原料藥；已知純度的對(duì)照品或樣品進(jìn)行測(cè)定依據(jù)線性數(shù)據(jù)結(jié)果推算制劑可用配料試驗(yàn)來(lái)測(cè)定收率雜質(zhì)定量測(cè)定的準(zhǔn)確度標(biāo)準(zhǔn)加入法：向制劑中加入已知量雜質(zhì)測(cè)定雜質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確度可接受的范圍根據(jù)方法的類型、測(cè)量的濃度范圍及方法的本身的要求來(lái)確定（常量、微量）24實(shí)驗(yàn)室分析方法驗(yàn)證及案例精密度（Precision）精密度是指在規(guī)定的測(cè)試條件下，同一個(gè)均勻樣品，經(jīng)過(guò)多次取樣測(cè)定所得一系列結(jié)果之間的接近程度。精密度用相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）來(lái)表示。精密度有三人評(píng)價(jià)水平：重復(fù)性、中間精密度、重現(xiàn)性。25實(shí)驗(yàn)室分析方法驗(yàn)證及案例重復(fù)性（Repeatability）在相同操作條件下，由個(gè)分析人員在較短的時(shí)間連續(xù)測(cè)定所得結(jié)果的精密度為重復(fù)性；不同溶液制備26實(shí)驗(yàn)室分析方法驗(yàn)證及案例重復(fù)性測(cè)定用100%的測(cè)試濃度至少用6次測(cè)定結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)。或3個(gè)濃度（80%、100%、120%）×3次重復(fù)性用RSD來(lái)評(píng)價(jià)。RSD范圍應(yīng)根據(jù)方法的類型、測(cè)量的濃度范圍及方法本身的要求來(lái)確定。常量測(cè)定，RSD一般不大于2.0%。27實(shí)驗(yàn)室分析方法驗(yàn)證及案例中間精密度

（IntermediatePrecision）在同一個(gè)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，在不同時(shí)間或不同分析人員或用不同設(shè)備測(cè)定結(jié)果的精密度。28實(shí)驗(yàn)室分析方法驗(yàn)證及案例中間精密度的測(cè)定變動(dòng)因素有不同日期不同分析人員不同設(shè)備。以T-檢驗(yàn)評(píng)價(jià)（6次結(jié)果的平均值之間差異）以F-檢驗(yàn)評(píng)價(jià)（6次結(jié)果的精密度之間差異）評(píng)價(jià)不同因素之間測(cè)定結(jié)果之間有無(wú)顯著性差異。29實(shí)驗(yàn)室分析方法驗(yàn)證及案例重現(xiàn)性

（Reproducibility）在不同實(shí)驗(yàn)室，測(cè)定結(jié)果的精密度（也稱為實(shí)驗(yàn)室間的精密度）。通常在分析方法藥典標(biāo)準(zhǔn)化時(shí)才考慮。30實(shí)驗(yàn)室分析方法驗(yàn)證及案例檢測(cè)限

（Limitofdetection,LOD）是在指定的分析方法條件下，樣品中被測(cè)物能被檢出的最低量。是一種限度試驗(yàn)的參數(shù)，用以表示測(cè)量方法在所述條件下對(duì)樣品中供試物的最低檢出量，但不需要準(zhǔn)確定量，只需指出高于或低于該規(guī)定濃度即可。通常用樣品中百分濃度或ppm表示。31實(shí)驗(yàn)室分析方法驗(yàn)證及案例檢測(cè)限測(cè)定直觀評(píng)價(jià)法（比色，TLC等）信噪比法以信噪比為2~3:1時(shí)相應(yīng)濃度或注入儀器的量來(lái)表確定檢測(cè)限。如色譜方法標(biāo)準(zhǔn)偏差和斜率法（UV、AA等）檢測(cè)限=3.3×SD/S檢測(cè)限（%或ppm）:Cmin/樣品濃度32實(shí)驗(yàn)室分析方法驗(yàn)證及案例定量限

（LimitofQuantitation,LOQ）是在指定的分析方法條件下，樣品中被測(cè)物能被定量檢出的最低量。其測(cè)定結(jié)果應(yīng)具一定準(zhǔn)確度和精密度。是一種含量測(cè)定的定量參數(shù)，雜質(zhì)和降解產(chǎn)物的定量測(cè)定時(shí)應(yīng)確定。通常用以樣品中的百分濃度或ppm表示。33實(shí)驗(yàn)室分析方法驗(yàn)證及案例定量限測(cè)定直觀評(píng)價(jià)法（比色，TLC等）信噪比法以信噪比為10:1時(shí)相應(yīng)濃度或注入儀器的量來(lái)表確定檢測(cè)限。如色譜方法標(biāo)準(zhǔn)偏差和斜率法（UV、AA等）檢測(cè)限=10×SD/S檢測(cè)限（%或ppm）:Cmin/樣品濃度34實(shí)驗(yàn)室分析方法驗(yàn)證及案例線性（Linearity）指在給范圍內(nèi)，測(cè)試結(jié)果與試樣中被測(cè)物濃度呈正比的程度?；蛟囼?yàn)結(jié)果（或測(cè)得響應(yīng)信號(hào)）與供試物濃度（或質(zhì)量）的變化成線性關(guān)系。35實(shí)驗(yàn)室分析方法驗(yàn)證及案例線性測(cè)定線性關(guān)系的測(cè)定應(yīng)在規(guī)定的范圍內(nèi)進(jìn)行。經(jīng)精密稀釋或稱量，至少制備5份供試液。每個(gè)濃度測(cè)定1~3次，以測(cè)得的響應(yīng)信號(hào)（或平均值）對(duì)被測(cè)物濃度進(jìn)行線性回歸。相關(guān)系數(shù)R越接近1.00，表明越呈線性。方法目的不同，R的要求不同。（R>0.999；殘留溶劑、清洗方法>0.99）線性回歸軟件：Origin5.0。36實(shí)驗(yàn)室分析方法驗(yàn)證及案例范圍（Range）分析方法的范圍指能達(dá)到一定的精密度、準(zhǔn)確度和線性的條件下，測(cè)試方法適用的樣品中被測(cè)物上限和下限濃度（含量）之間的區(qū)別。通常以分析方法測(cè)定結(jié)果相同的單位表示，如%或ppm。37實(shí)驗(yàn)室分析方法驗(yàn)證及案例范圍確定原料藥和制劑含量：80%~120%；制劑含量均勻度檢查，范圍應(yīng)為測(cè)試濃度的70%~130%,其它劑型看藥典。雜質(zhì)測(cè)定：擬訂出規(guī)定限度的50%~120%。一些情況下，定量限~日常測(cè)定結(jié)果×150%，使測(cè)定結(jié)果在方法函蓋的范圍之內(nèi)。如果含量測(cè)定與雜質(zhì)檢查同時(shí)測(cè)定，用百分歸一化法，則線性范圍應(yīng)為雜質(zhì)規(guī)定下限的-20%至含量限度（或上限）的+20%。注意：樣品測(cè)定的結(jié)果應(yīng)包括在方法的范圍之內(nèi)。38實(shí)驗(yàn)室分析方法驗(yàn)證及案例耐用性（Robustness）指在測(cè)定條件有較小變動(dòng)時(shí)（但仍在正常允許使用范圍內(nèi)），測(cè)定結(jié)果不受影響的程度，也即證明方法的可靠性。開(kāi)始分析方法研究時(shí)，應(yīng)考慮其耐用性。如測(cè)定條件要求苛刻，則應(yīng)在方法中寫(xiě)明。如溶液穩(wěn)定性；流動(dòng)相組成/pH，不同牌號(hào)色譜柱，柱溫，流速等。39實(shí)驗(yàn)室分析方法驗(yàn)證及案例幾個(gè)典型分析方法的驗(yàn)證案例HPLC含量分析方法驗(yàn)證HPLC有關(guān)物質(zhì)分析方法驗(yàn)證GC殘留溶劑分析方法驗(yàn)證UV清洗驗(yàn)證分析方法驗(yàn)證40實(shí)驗(yàn)室分析方法驗(yàn)證及案例HPLC含量分析方法驗(yàn)證項(xiàng)目系統(tǒng)適用性試驗(yàn)系統(tǒng)精密度（峰面積的RSD）柱效分離度對(duì)稱因子外加：3批樣品測(cè)定（驗(yàn)證系統(tǒng)適用性）USP27新規(guī)定41實(shí)驗(yàn)室分析方法驗(yàn)證及案例HPLC含量測(cè)定驗(yàn)證的項(xiàng)目驗(yàn)證的項(xiàng)目指標(biāo)(參考)系統(tǒng)適用性關(guān)鍵參數(shù);重復(fù)性等專屬性分離度>1.5準(zhǔn)確度98.0～102.0%精密度重復(fù)性中間精密度

RSD≤2.0%RSD≤2.0%線性線性方程,R≥0.999范圍限度的80%～120%耐用性依據(jù)方法特點(diǎn)和公司要求制定項(xiàng)目42實(shí)驗(yàn)室分析方法驗(yàn)證及案例HPLC有關(guān)物質(zhì)分析方法驗(yàn)證的項(xiàng)目系統(tǒng)適用性試驗(yàn)系統(tǒng)精密度（峰面積的RSD）n=5or6柱效分離度對(duì)稱因子43實(shí)驗(yàn)室分析方法驗(yàn)證及案例驗(yàn)證的項(xiàng)目驗(yàn)證項(xiàng)目雜質(zhì)定量指標(biāo)(參考)專屬性+分離度>1.5準(zhǔn)確度+98.0～102.0%精密度重復(fù)性中間精密度

++

RSD≤2.0%RSD≤2.0%檢測(cè)限+依據(jù)雜質(zhì)限度評(píng)價(jià)，遠(yuǎn)低于定量限+依據(jù)雜質(zhì)限度評(píng)價(jià)，遠(yuǎn)低于線性+線性方程,R≥0.999范圍+限度的50%～150%或更寬，包括實(shí)際結(jié)果44實(shí)驗(yàn)室分析方法驗(yàn)證及案例HPLC有關(guān)物質(zhì)分析方法

驗(yàn)證報(bào)告評(píng)述關(guān)鍵點(diǎn)：雜質(zhì)對(duì)照品：原料、中間體、付產(chǎn)物、降解產(chǎn)物線性范圍每個(gè)雜質(zhì)的LOD、LOQ45實(shí)驗(yàn)室分析方法驗(yàn)證及案例殘留溶劑分析方法驗(yàn)證項(xiàng)目系統(tǒng)適用性試驗(yàn)系統(tǒng)精密度（峰面積的RSD）n=6柱效分離度對(duì)稱因子46實(shí)驗(yàn)室分析方法驗(yàn)證及案例殘留溶劑驗(yàn)證項(xiàng)目驗(yàn)證項(xiàng)目雜質(zhì)定量指標(biāo)(參考)專屬性+分離度>3準(zhǔn)確度+95.0~105.0%精密度重復(fù)性中間精密度

++

RSD≤5.0～10.0%RSD≤5.0～10.0%檢測(cè)限+依據(jù)雜質(zhì)限度評(píng)價(jià)定量限+依據(jù)雜質(zhì)限度評(píng)價(jià)線性+線性方程,R≥0.99范圍+LOQ～限度的120%，包括實(shí)際結(jié)果47實(shí)驗(yàn)室分析方法驗(yàn)證及案例USPOVIUSP<467> 有機(jī)揮發(fā)性雜質(zhì)OVI四個(gè)溶劑：氯仿、二氯甲烷、1,4二氯六環(huán)、三氯乙烯專論規(guī)定工藝未使用，不用檢測(cè)。48實(shí)驗(yàn)室分析方法驗(yàn)證及案例EP殘留溶劑 EP4.8殘留溶劑（四類溶劑）5.4Residualsolvents殘留溶劑目錄和限度2.4.24.Identif