實驗室分析方法驗證及案例課件

分析方法驗證

MethodValidation2005-101實驗室分析方法驗證及案例需要驗證的分析方法藥典方法完全驗證或部分驗證或系統(tǒng)適用性試驗非藥典分析方法(新建立變更修改)成品的方法(含量有關(guān)物質(zhì))殘留溶劑測定方法原料中間體測定方法清洗驗證分析方法的驗證其它雜質(zhì)研究用方法穩(wěn)定性批示方法Stabilityindicatingmethods2實驗室分析方法驗證及案例方法適用范圍和可接受標準方案中應(yīng)確定,包括:化合物的成分、組成和含量輔料或添加劑定量/定性檢測限和定量限線性范圍精密度和準確度儀器的類型3實驗室分析方法驗證及案例驗證方案的內(nèi)容驗證目的:方法原理使用范圍和目的.驗證人員及職責(zé)(驗證執(zhí)行人員、組長、經(jīng)理、QA):引用標準分析方法SOP儀器及其操作參數(shù)需要的檢驗材料、試劑及標準物質(zhì)等;溶液的制備:標準、樣品溶液等的制備;測定的過程:如平衡時間,空白、標準、樣品測定次序,系統(tǒng)適用性試驗(項目、指標),測定參數(shù)等;計算公式及說明。4實驗室分析方法驗證及案例驗證方案的內(nèi)容驗證項目可接受標準驗證內(nèi)容驗證項目1測定規(guī)程（溶液配制、測定條件、測定方法）數(shù)據(jù)表格計算公式及結(jié)果統(tǒng)計結(jié)論記錄與圖譜要求驗證項目2……樣品測定（包括系統(tǒng)適用性試驗等）驗證評價及結(jié)論要求。驗證方案的起草、審核、批準5實驗室分析方法驗證及案例驗證報告內(nèi)容摘要：方法原理、檢驗?zāi)康暮蛻?yīng)用范圍；化合物類型；驗證結(jié)果及結(jié)論。驗證人員及職責(zé)測定方法描述驗證項目1測定規(guī)程（溶液配制、測定條件、測定方法）數(shù)據(jù)表格計算公式及結(jié)果統(tǒng)計結(jié)論記錄與圖譜、標準曲線驗證項目2……6實驗室分析方法驗證及案例驗證報告內(nèi)容樣品測定（包括系統(tǒng)適用性試驗等）驗證評價及結(jié)論。起草、審核、批準。附件：SOP、驗證記錄、圖譜、標準曲線復(fù)印件。7實驗室分析方法驗證及案例分析方法分類標準分析方法：指法定分析方法，包括各國現(xiàn)行的藥典（USP、EP）或其實公認的的標準參考資料中的方法。非標準化分析方法：新建立的分析方法或修改了的標準化分析方法都屬于非標準分析方法。在根據(jù)方法類型，選擇不同的驗證項目進行分析方法驗證8實驗室分析方法驗證及案例分析方法驗證重視程度驗證的方法類型和內(nèi)容必須反映分析的目的和API生產(chǎn)的步驟。原料（GB）溶劑API包裝材料關(guān)鍵中間體GMP要求驗證的重要性遞增

9實驗室分析方法驗證及案例分析方法驗證的前提儀器：已校驗，校驗同期之內(nèi)；人員：培訓(xùn)；熟悉方法和儀器；對照品：法定標準品、商業(yè)標準品、工作標準品；材料：試劑；容器穩(wěn)定性：溶液和試劑在檢驗周期的穩(wěn)定性，尤其使用自動進樣器。方法的開發(fā)以完成，對方法草案進行驗證。10實驗室分析方法驗證及案例分析方法驗證檢查的關(guān)注點驗證的SOP驗證方案：起草、審核和批準驗證項目和可接受標準驗證用標準品和樣品驗證報告：起草、審核批準11實驗室分析方法驗證及案例標準分析方法驗證Q7A：除非所使用方法是載于現(xiàn)行法定藥典或其它公認的標準參考資料內(nèi)，分析方法應(yīng)進行驗證。盡管如此，所有所用方法的適用性應(yīng)在實際使用情況予以證實并記錄成文。兩個要求：實驗室必須滿足標準方法規(guī)定的性能指標；標準分析方法驗證的數(shù)據(jù)必須充分滿足實驗室測定的要求。12實驗室分析方法驗證及案例標準分析方法驗證對標準分析方法進行評價，以確定需要進行驗證的程度。有三種選擇：不需要驗證（系統(tǒng)適用性試驗）部分驗證和完全驗證。適用性考慮的因素有：用戶的儀器、人員、試劑和環(huán)境條件證明可以滿足方法規(guī)定的分析要求，則只需規(guī)定和執(zhí)行系統(tǒng)適用性試驗即可，方法無需再驗證；評價：化合物的類型、方法的檢測限和定量限、線性范圍、儀器的類型及其它的存放地和環(huán)境條件等。13實驗室分析方法驗證及案例標準分析方法驗證企業(yè)內(nèi)控的要求藥品申報注冊要求檢驗方法性能的再驗證一些臨介項目，如雜質(zhì)檢查的定量限和檢測限，應(yīng)予以證明。14實驗室分析方法驗證及案例非標準分析方法新建立修改或變更15實驗室分析方法驗證及案例驗證的方法類型 分析方法類型有四類：鑒別；雜質(zhì)定量；雜質(zhì)限度檢查；含量原料藥含量或制劑中有效成份測定；藥品溶出度釋放度測定。16實驗室分析方法驗證及案例分析方法的驗證項目1.Specificity(專屬性)2.Precision(精密度)3.Accuracy(準確度)4.Linesrity(線性)5.Range(范圍)6.DetectionLimit(檢測限)7.QuantitationLimit(定量限)8.Robustness(耐用性)（USP）17實驗室分析方法驗證及案例驗證內(nèi)容分析方法的驗證，一般根據(jù)方法的類型和檢測的要求，有驗證方案中擬訂驗證的內(nèi)容和可接受標準；專屬性精密度（包括重復(fù)性中間精密度）線性范圍準確度檢測限和定量限。耐用性只有在分析方法建立的適當階段或特殊要求時予以考慮進行驗證。18實驗室分析方法驗證及案例驗證的方法類型與驗證內(nèi)容

鑒別雜質(zhì)定量雜質(zhì)限度含量/效價溶出度準確度-

+

-+精密度重復(fù)性中間精密度

--

++(1)

--

++專屬性++++檢測限-++-定量限-+--線性-+-+范圍-+-+19實驗室分析方法驗證及案例驗證的方法類型與驗證內(nèi)容(補充)“+”代表需要“-”代表不需要（1）有了重現(xiàn)性驗證情況下，驗證可不需要20實驗室分析方法驗證及案例專屬性（Specificity）定義專屬性是指在其他成份（如雜質(zhì)、降解產(chǎn)物、輔料等）可能存在的情況下，采用的方法能準確測定出被測物的特性；能反映該分析方法在有共存物時對供試物準確而不受干擾的測定能力。21實驗室分析方法驗證及案例專屬性的測定鑒別反應(yīng)：能與可能共存的物質(zhì)或結(jié)構(gòu)相似的化合物區(qū)分。含量測定和雜質(zhì)測定分離度評價—色譜法和其他分離方法；已知的雜質(zhì)定性；破壞性試驗證明DAD（PDA）峰純度檢查。22實驗室分析方法驗證及案例準確度（Accuracy）準確度是指用該方法測定的結(jié)果與真實值或參考值接近的程度。一般以回收率（%）表示。準確度應(yīng)在不同測定項目規(guī)定的限度范圍內(nèi)建立。23實驗室分析方法驗證及案例準確度測定原料藥；已知純度的對照品或樣品進行測定依據(jù)線性數(shù)據(jù)結(jié)果推算制劑可用配料試驗來測定收率雜質(zhì)定量測定的準確度標準加入法：向制劑中加入已知量雜質(zhì)測定雜質(zhì)標準品準確度可接受的范圍根據(jù)方法的類型、測量的濃度范圍及方法的本身的要求來確定（常量、微量）24實驗室分析方法驗證及案例精密度（Precision）精密度是指在規(guī)定的測試條件下，同一個均勻樣品，經(jīng)過多次取樣測定所得一系列結(jié)果之間的接近程度。精密度用相對標準偏差（RSD）來表示。精密度有三人評價水平：重復(fù)性、中間精密度、重現(xiàn)性。25實驗室分析方法驗證及案例重復(fù)性（Repeatability）在相同操作條件下，由個分析人員在較短的時間連續(xù)測定所得結(jié)果的精密度為重復(fù)性；不同溶液制備26實驗室分析方法驗證及案例重復(fù)性測定用100%的測試濃度至少用6次測定結(jié)果進行評價。或3個濃度（80%、100%、120%）×3次重復(fù)性用RSD來評價。RSD范圍應(yīng)根據(jù)方法的類型、測量的濃度范圍及方法本身的要求來確定。常量測定，RSD一般不大于2.0%。27實驗室分析方法驗證及案例中間精密度

（IntermediatePrecision）在同一個實驗室內(nèi)，在不同時間或不同分析人員或用不同設(shè)備測定結(jié)果的精密度。28實驗室分析方法驗證及案例中間精密度的測定變動因素有不同日期不同分析人員不同設(shè)備。以T-檢驗評價（6次結(jié)果的平均值之間差異）以F-檢驗評價（6次結(jié)果的精密度之間差異）評價不同因素之間測定結(jié)果之間有無顯著性差異。29實驗室分析方法驗證及案例重現(xiàn)性

（Reproducibility）在不同實驗室，測定結(jié)果的精密度（也稱為實驗室間的精密度）。通常在分析方法藥典標準化時才考慮。30實驗室分析方法驗證及案例檢測限

（Limitofdetection,LOD）是在指定的分析方法條件下，樣品中被測物能被檢出的最低量。是一種限度試驗的參數(shù)，用以表示測量方法在所述條件下對樣品中供試物的最低檢出量，但不需要準確定量，只需指出高于或低于該規(guī)定濃度即可。通常用樣品中百分濃度或ppm表示。31實驗室分析方法驗證及案例檢測限測定直觀評價法（比色，TLC等）信噪比法以信噪比為2~3:1時相應(yīng)濃度或注入儀器的量來表確定檢測限。如色譜方法標準偏差和斜率法（UV、AA等）檢測限=3.3×SD/S檢測限（%或ppm）:Cmin/樣品濃度32實驗室分析方法驗證及案例定量限

（LimitofQuantitation,LOQ）是在指定的分析方法條件下，樣品中被測物能被定量檢出的最低量。其測定結(jié)果應(yīng)具一定準確度和精密度。是一種含量測定的定量參數(shù)，雜質(zhì)和降解產(chǎn)物的定量測定時應(yīng)確定。通常用以樣品中的百分濃度或ppm表示。33實驗室分析方法驗證及案例定量限測定直觀評價法（比色，TLC等）信噪比法以信噪比為10:1時相應(yīng)濃度或注入儀器的量來表確定檢測限。如色譜方法標準偏差和斜率法（UV、AA等）檢測限=10×SD/S檢測限（%或ppm）:Cmin/樣品濃度34實驗室分析方法驗證及案例線性（Linearity）指在給范圍內(nèi)，測試結(jié)果與試樣中被測物濃度呈正比的程度?；蛟囼灲Y(jié)果（或測得響應(yīng)信號）與供試物濃度（或質(zhì)量）的變化成線性關(guān)系。35實驗室分析方法驗證及案例線性測定線性關(guān)系的測定應(yīng)在規(guī)定的范圍內(nèi)進行。經(jīng)精密稀釋或稱量，至少制備5份供試液。每個濃度測定1~3次，以測得的響應(yīng)信號（或平均值）對被測物濃度進行線性回歸。相關(guān)系數(shù)R越接近1.00，表明越呈線性。方法目的不同，R的要求不同。（R>0.999；殘留溶劑、清洗方法>0.99）線性回歸軟件：Origin5.0。36實驗室分析方法驗證及案例范圍（Range）分析方法的范圍指能達到一定的精密度、準確度和線性的條件下，測試方法適用的樣品中被測物上限和下限濃度（含量）之間的區(qū)別。通常以分析方法測定結(jié)果相同的單位表示，如%或ppm。37實驗室分析方法驗證及案例范圍確定原料藥和制劑含量：80%~120%；制劑含量均勻度檢查，范圍應(yīng)為測試濃度的70%~130%,其它劑型看藥典。雜質(zhì)測定：擬訂出規(guī)定限度的50%~120%。一些情況下，定量限~日常測定結(jié)果×150%，使測定結(jié)果在方法函蓋的范圍之內(nèi)。如果含量測定與雜質(zhì)檢查同時測定，用百分歸一化法，則線性范圍應(yīng)為雜質(zhì)規(guī)定下限的-20%至含量限度（或上限）的+20%。注意：樣品測定的結(jié)果應(yīng)包括在方法的范圍之內(nèi)。38實驗室分析方法驗證及案例耐用性（Robustness）指在測定條件有較小變動時（但仍在正常允許使用范圍內(nèi)），測定結(jié)果不受影響的程度，也即證明方法的可靠性。開始分析方法研究時，應(yīng)考慮其耐用性。如測定條件要求苛刻，則應(yīng)在方法中寫明。如溶液穩(wěn)定性；流動相組成/pH，不同牌號色譜柱，柱溫，流速等。39實驗室分析方法驗證及案例幾個典型分析方法的驗證案例HPLC含量分析方法驗證HPLC有關(guān)物質(zhì)分析方法驗證GC殘留溶劑分析方法驗證UV清洗驗證分析方法驗證40實驗室分析方法驗證及案例HPLC含量分析方法驗證項目系統(tǒng)適用性試驗系統(tǒng)精密度（峰面積的RSD）柱效分離度對稱因子外加：3批樣品測定（驗證系統(tǒng)適用性）USP27新規(guī)定41實驗室分析方法驗證及案例HPLC含量測定驗證的項目驗證的項目指標(參考)系統(tǒng)適用性關(guān)鍵參數(shù);重復(fù)性等專屬性分離度>1.5準確度98.0～102.0%精密度重復(fù)性中間精密度

RSD≤2.0%RSD≤2.0%線性線性方程,R≥0.999范圍限度的80%～120%耐用性依據(jù)方法特點和公司要求制定項目42實驗室分析方法驗證及案例HPLC有關(guān)物質(zhì)分析方法驗證的項目系統(tǒng)適用性試驗系統(tǒng)精密度（峰面積的RSD）n=5or6柱效分離度對稱因子43實驗室分析方法驗證及案例驗證的項目驗證項目雜質(zhì)定量指標(參考)專屬性+分離度>1.5準確度+98.0～102.0%精密度重復(fù)性中間精密度

++

RSD≤2.0%RSD≤2.0%檢測限+依據(jù)雜質(zhì)限度評價，遠低于定量限+依據(jù)雜質(zhì)限度評價，遠低于線性+線性方程,R≥0.999范圍+限度的50%～150%或更寬，包括實際結(jié)果44實驗室分析方法驗證及案例HPLC有關(guān)物質(zhì)分析方法

驗證報告評述關(guān)鍵點：雜質(zhì)對照品：原料、中間體、付產(chǎn)物、降解產(chǎn)物線性范圍每個雜質(zhì)的LOD、LOQ45實驗室分析方法驗證及案例殘留溶劑分析方法驗證項目系統(tǒng)適用性試驗系統(tǒng)精密度（峰面積的RSD）n=6柱效分離度對稱因子46實驗室分析方法驗證及案例殘留溶劑驗證項目驗證項目雜質(zhì)定量指標(參考)專屬性+分離度>3準確度+95.0~105.0%精密度重復(fù)性中間精密度

++

RSD≤5.0～10.0%RSD≤5.0～10.0%檢測限+依據(jù)雜質(zhì)限度評價定量限+依據(jù)雜質(zhì)限度評價線性+線性方程,R≥0.99范圍+LOQ～限度的120%，包括實際結(jié)果47實驗室分析方法驗證及案例USPOVIUSP<467> 有機揮發(fā)性雜質(zhì)OVI四個溶劑：氯仿、二氯甲烷、1,4二氯六環(huán)、三氯乙烯專論規(guī)定工藝未使用，不用檢測。48實驗室分析方法驗證及案例EP殘留溶劑 EP4.8殘留溶劑（四類溶劑）5.4Residualsolvents殘留溶劑目錄和限度2.4.24.Identif