課件藥分章七章芳香胺類(lèi)

第七章苯乙胺類(lèi)擬腎上腺素藥物的分析AnalysisofAromaticamines第一節(jié)結(jié)構(gòu)與性質(zhì)Phenethylamine苯乙胺類(lèi)藥物的基本結(jié)構(gòu)*具有烴胺側(cè)鏈，屬于芳烴胺類(lèi)藥物。多數(shù)在苯環(huán)上有1~2個(gè)羥基取代基。如在苯環(huán)3、4位上有羥基取代，則為兒茶酚胺類(lèi)藥物。腎上腺素(adrenaline)鹽酸克倫特羅(clenbuterolhydrochloride)硫酸沙丁胺醇(salbutamolsulfate)鹽酸麻黃堿(ephedrinehydrochloride)R1

R2

R3HX常見(jiàn)的苯乙胺類(lèi)藥物苯乙胺-化學(xué)性質(zhì)弱堿性：烴胺基側(cè)鏈，仲胺氮－弱堿性游離堿難溶于水，易溶于有機(jī)溶劑；其鹽可溶于水酚羥基特性：鄰苯二酚（或苯酚）結(jié)構(gòu)，與金屬離子絡(luò)合呈色；在空氣中或遇光、熱易氧化，色澤變深；在堿性溶液中更易變色。光學(xué)活性：手性碳原子，具有旋光性。苯環(huán)取代基特性：如鹽酸克倫特羅芳伯氨基；紫外、紅外吸收特性進(jìn)行定性、定量分析。第二節(jié)鑒別試驗(yàn)與三氯化鐵反應(yīng)、與甲醛－硫酸反應(yīng)（生成醌式有色物）藥物三氯化鐵甲醛－硫酸腎上腺素Adrenaline0.1mol/L鹽酸液中顯翠綠色，加氨試液顯紫色，紫紅色紅色重酒石酸去甲腎上腺素Noradrenalinebitartrate翠綠色，加碳酸氫鈉試液顯藍(lán)色，紅色淡紅色鹽酸去氧腎上腺素Phenylephrinehydrochloride紫色玫瑰紅，橙紅，深棕紅鹽酸異丙腎上腺素Isoprenalinehydrochloride深綠色，滴加新制5%碳酸氫鈉液，顯藍(lán)紫色，紅色棕色，暗紫色鹽酸多巴胺Dopaminehydrochloride墨綠色，滴加1%氨溶液，顯紫紅色07:46:18還原反應(yīng)（酚羥基，易被碘、過(guò)氧化氫、鐵氰化鉀氧化呈現(xiàn)不同顏色）腎上腺素碘或過(guò)氧化氫中性或酸性腎上腺素紅放置棕紅色多聚體鹽酸異丙腎上腺素偏酸性條件碘異丙腎上腺素紅硫代硫酸鈉淡紅色溶液重酒石酸去甲腎上腺素酒石酸氫鉀飽和液pH3.56碘試液放置5min硫代硫酸鈉溶液為無(wú)色或僅顯微紅色或淡紫色腎上腺素或鹽酸異丙腎上腺素明顯的深紅棕色或紫色鑒別試驗(yàn)氨基醇的雙縮脲反應(yīng) 鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿，芳環(huán)側(cè)鏈具有氨基醇結(jié)構(gòu)，可顯雙縮脲特征反應(yīng)。藍(lán)紫色鑒別試驗(yàn)與亞硝基鐵氰化鈉反應(yīng)(Rimini試驗(yàn))

重酒石酸間羥胺的脂肪伯氨基重酒石酸間羥胺水溶解亞硝基鐵氰化鈉試液丙酮數(shù)滴，碳酸氫鈉少量△紅紫色脂肪伯胺基的專(zhuān)屬反應(yīng)丙酮不含有甲醛鑒別試驗(yàn)紫外特征吸收藥物溶劑濃度(mg/ml)λmax(nm)吸收度(A)重酒石酸間羥胺水0.10272鹽酸異丙腎上腺素水0.052800.50鹽酸多巴胺0.5%硫酸0.03280鹽酸芬氟拉明0.1mol/L鹽酸0.25263,270鹽酸苯乙雙胍水0.012340.60鹽酸克倫特羅0.1mol/L鹽酸0.03243,296硫酸沙丁胺醇水0.08274鹽酸偽麻黃堿水0.50251,257,263紅外特征吸收：上述藥物還可采用紅外吸收光譜進(jìn)行鑒別第三節(jié)特殊雜質(zhì)檢查酮體檢查生產(chǎn)工藝：酮體氫化還原制得藥物，若氫化不完全則引入酮體雜質(zhì)。藥物檢查的雜質(zhì)溶劑樣品濃度(mg/ml)測(cè)定波長(zhǎng)(nm)A腎上腺素酮體HCl(9→2000)2.0310不得過(guò)0.05鹽酸去氧腎上腺素酮體水2.0310不得大于0.20重酒石酸去甲腎上腺素酮體水2.0310不得大于0.05鹽酸異丙腎上腺素酮體水2.0310不得大于0.15鹽酸甲氧明酮胺水1.5347不得大于0.06紫外分光光度法檢查酮體的條件及要求310酮體樣品利用酮體在紫外310nm處有最大吸收，而藥物本身在此波長(zhǎng)幾乎沒(méi)有吸收，測(cè)定一定濃度下樣品溶液在310nm處的吸收度來(lái)控制酮體的限量。比較法07:46:18光學(xué)純度檢查大多數(shù)苯乙胺類(lèi)擬腎上腺素藥物分子結(jié)構(gòu)中存在手性碳原子通過(guò)比旋度測(cè)定控制藥物的質(zhì)量光學(xué)純度檢查最佳方法-手性分離重酒石酸去甲腎上腺素的光學(xué)純度檢查：稱(chēng)取重酒石酸去甲腎上腺素消旋體約50mg溶于5ml蒸餾水中，滴加氨水調(diào)pH為7

8；以乙酸乙酯萃取3次，所得乙酸乙酯層用蒸餾水洗滌2次，再用1g硫酸鈉脫水，過(guò)濾除去硫酸鈉，得到溶液置于50ml量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得手性分離系統(tǒng)適用性溶液。同法制備(R)-重酒石酸去甲腎上腺素供試品溶液。取20l注入液相色譜儀，照高效液相色譜法測(cè)定。用ChiralpakAD-H色譜柱，；以正己烷-乙醇-乙醇胺(800∶200∶2)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm；流速0.8ml/min。對(duì)映體的分離因子為7.2。通過(guò)手性高效液相色譜法分離，按峰面積歸一化法，可以測(cè)定重酒石酸去甲腎上腺素的光學(xué)純度（ee%)色譜法和電泳法第四節(jié)含量測(cè)定原料：非水溶液滴定法、溴量法、亞硝酸鈉法制劑：比色法、紫外分光光度法、高效液相色譜法 非水溶液滴定法是在非水溶劑中進(jìn)行的酸堿滴定測(cè)定法。主要應(yīng)用對(duì)象：有機(jī)堿及其氫鹵酸鹽、磷酸鹽、硫酸鹽以及有機(jī)酸堿金屬鹽類(lèi)藥物或有機(jī)弱酸。酸性溶劑：冰醋酸堿性溶劑：DMF兩性溶劑：甲醇惰性溶劑：氯仿，甲苯，丙酮一、非水溶液滴定法一、非水溶液滴定法該類(lèi)藥物（堿性藥物為例）為什么要采用非水滴定法？在水中堿性較弱，不能順利地進(jìn)行中和滴定（滴定突躍不明顯，滴定終點(diǎn)難以判斷、無(wú)法獲得滿(mǎn)意的測(cè)定結(jié)果)。在酸性非水介質(zhì)中（如gHAc中），則能顯示出較強(qiáng)的堿性，滴定突躍增大，可以順利地進(jìn)行中和滴定。非水溶液滴定法原理＊置換滴定，即用強(qiáng)酸（HClO4）置換出與生物堿結(jié)合的較弱的酸（HA）供試品：以消耗標(biāo)準(zhǔn)液8ml計(jì)算。溶劑：gHAc，一般用量10~30ml，滴定劑：0.1mol/LHClO4/無(wú)水gHAc溶液指示劑：結(jié)晶紫做空白試驗(yàn)測(cè)定方法非水溶液滴定法適用范圍：pKb＞8的有機(jī)堿鹽pKb為8~10選冰醋酸作溶劑pKb為10~12選冰醋酸和醋酐作溶劑pKb為12

選醋酐作溶劑非水溶液滴定法HClO4、HBr、HCl、H2SO4、HNO3水中酸強(qiáng)度相等。＊gHAc中酸強(qiáng)度不相同.HClO4＞HBr＞HCl＞H2SO4＞HNO3＞其它弱酸酸根的影響非水溶液滴定法氫鹵酸鹽的測(cè)定氫鹵酸gHAc中酸性較強(qiáng)，對(duì)滴定有影響。排除方法：加入過(guò)量的HgAc2/gHAc溶液非水溶液滴定法◆水的膨脹系數(shù)是0.21×10-3/

C◆gHAc膨脹系數(shù)是1.1×10-3/

C，較大，體積隨溫度變化較大，且還具有揮發(fā)性。測(cè)定樣品與標(biāo)定標(biāo)準(zhǔn)溶液時(shí)溫度不同，應(yīng)對(duì)濃度進(jìn)行校正。(濃度校正因子F)

標(biāo)準(zhǔn)溶液（滴定劑）的穩(wěn)定性其中：0.0011：gHAc的膨脹系數(shù)t0和t1：標(biāo)定標(biāo)準(zhǔn)溶液和測(cè)定樣品時(shí)的溫度N0和N1：t0和t1所對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度★說(shuō)明：ⅰ．

t1-t0

>10

Cⅱ．或貯存時(shí)間超過(guò)30天則在臨用前必須重新標(biāo)定標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度。校正公式：終點(diǎn)指示方法紫藍(lán)藍(lán)綠黃綠黃（堿性區(qū)）—————→（酸性區(qū)）終點(diǎn)的顏色應(yīng)用電位法校準(zhǔn)。最常用的指示劑是結(jié)晶紫CrystalViolet（CV）例：重酒石酸去甲腎上腺素－－直接滴定鹽酸克倫特羅－－加醋酸汞消除氫鹵酸干擾；由于堿性較弱，電位法指示終點(diǎn)硫酸沙丁胺醇－－加入醋酐以增大突躍，結(jié)晶紫為指示劑注：加入醋酐注意防止氨基被乙?；?，所以在冰醋酸溶解樣品后應(yīng)放冷后再加醋酐。非水溶液滴定法--11種(P229)

基本原理：化學(xué)計(jì)量關(guān)系：1：61藥物=3Br2=3I2=6Na2S2O3

二、溴量法

鹽酸去氧腎上腺素和重酒石酸間羥胺

鹽酸克侖特羅分子結(jié)構(gòu)中含有芳伯氨基，在酸性溶液中可與亞硝酸鈉定量發(fā)生重氮化反應(yīng)，生成重氮鹽，可用永停滴定法取本品約0.25g，精密稱(chēng)定，置100ml燒杯中，加鹽酸溶液(1→2)25ml使溶解，再加水25ml，照永停滴定法，用亞硝酸鈉滴定液(0.05mol/L)滴定。每1ml亞硝酸鈉滴定液(0.05mol/L)相當(dāng)于15.68mg的C12H18Cl2N2O

HCl

三、亞硝酸鈉法四、紫外分光光度法&比色法鹽酸甲氧明注射液含量測(cè)定：精密量取本品適量(約相當(dāng)于鹽酸甲氧明100mg)，置250ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻；精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，照紫外-可見(jiàn)分光光度法，在290nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，按C11H17NO3

HCl的吸收系數(shù)()為137計(jì)算，即得。紫外分光光度法重氮化-偶合顯色或與亞鐵離子絡(luò)合顯色 以鹽酸克倫特羅為例，測(cè)定原理如下：注意：由于偶合劑（N-(1-萘基)-乙二胺）與亞硝酸也能顯色干擾測(cè)定，所以在重氮化后，應(yīng)加入氨基磺酸銨分解剩余的亞硝酸。比色法五、高效液相色譜法高效分離，高靈敏度和高選擇性－可用于制劑常規(guī)分析，臨床藥物監(jiān)測(cè)和體內(nèi)藥物動(dòng)力學(xué)研究。例1：重酒石酸去甲腎上腺素注射液分析色譜條件：色譜柱：ODS流動(dòng)相：0.14%庚烷基磺酸鈉溶液－甲醇(65:35)，用磷酸調(diào)pH至3.0±0.1，流速：1.0ml/min檢測(cè)波長(zhǎng)：280nm測(cè)定方法：精密量取本品適量（約相當(dāng)于重酒石酸去甲腎上腺素4mg），置25ml量瓶中，加醋酸溶液（1→25）稀釋至刻度，搖勻，取2μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取重酒石酸去甲腎腺素對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加醋酸溶液（1→25）制成每1ml中含0.16mg的溶液，同法測(cè)定。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得。第五節(jié)體內(nèi)藥物分析動(dòng)物組織中的鹽酸克倫特羅殘留的測(cè)定—瘦肉精

瘦肉精（Heparinase）促進(jìn)瘦肉生長(zhǎng)、抑制肥肉生長(zhǎng)的物質(zhì)都可以叫做“瘦肉精”。

β-興奮劑(β-agonist)

小知識(shí)特布他林(Terbutaline)

萊克多巴胺

(Ractopamine)鹽酸克倫特羅

(clenbuterol)沙丁胺醇(Salbutamol)

鹽酸克倫特羅擬腎上腺素類(lèi)藥物β-受體激動(dòng)劑鹽酸克倫特羅游離脂肪酸增加

鹽酸克倫特羅的作用加強(qiáng)體內(nèi)脂肪分解

增強(qiáng)支氣管纖毛活動(dòng)

促進(jìn)粘液溶解，利于痰液排出

抑制蛋白質(zhì)分解，加強(qiáng)糖原分解

解除支氣管痙攣

危害近年來(lái)，人們對(duì)鹽酸克倫特羅的研究日益活躍，對(duì)其監(jiān)控檢測(cè)方法的發(fā)展無(wú)疑是有利于民的。特點(diǎn)：易殘留，難代謝，性質(zhì)穩(wěn)定，難以消除在大鼠、豬和肉用犢牛試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)心臟容量減少，使皮膚變薄，導(dǎo)致該器官的輕度萎縮以及肝和肺的萎縮，后肢發(fā)軟，肌肉震顫，心率加快。屠宰時(shí)可見(jiàn)肉色深、肉質(zhì)堅(jiān)硬、干燥。

對(duì)人的心臟有很大的刺激作用，產(chǎn)生心悸、心慌；對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)刺激，產(chǎn)生惡心、嘔吐、頭暈、乏力和肌肉顫動(dòng)、手抖甚至不能站立等現(xiàn)象；長(zhǎng)期食用還會(huì)導(dǎo)致染色體畸變，誘發(fā)惡性腫瘤，嚴(yán)重的可以致人死亡。

畜人鹽酸克倫特羅的研究方法經(jīng)典的溶劑提取固相萃取(SPE)基質(zhì)固相分散(MSPD)免疫親和柱等凈化提取液去除非檢測(cè)信號(hào)的背景濃縮待測(cè)液前處理技術(shù)氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用修飾電極技術(shù)生物傳感器技術(shù)高效毛細(xì)管電泳放射免疫分析酶聯(lián)免疫滴金免疫技術(shù)高效液相色譜氣相色譜凝膠滲透色譜色譜技術(shù)波譜與色譜聯(lián)用技術(shù)電化學(xué)技術(shù)免疫分析技術(shù)色譜技術(shù)波譜與色譜聯(lián)用技術(shù)電化學(xué)技術(shù)免疫分析技術(shù)色譜技術(shù)波譜與色譜聯(lián)用技術(shù)電化學(xué)技術(shù)免疫分析技術(shù)檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)技術(shù)目的手段1.提取稱(chēng)取動(dòng)物肝臟組織樣品5g

0.05g于帶蓋的聚四氟乙烯離心管中，加入乙酸乙酯15ml，再加入10.0%碳酸鈉溶液3ml，然后以10000r/min以上的速度勻質(zhì)60秒，蓋上蓋子以5000r/min的速度離心2分鐘，吸取上層有機(jī)溶劑于離心管中，在殘?jiān)性偌尤胍宜嵋阴?0ml，在渦旋混合器上混合1分鐘，離心后吸取有機(jī)溶劑并合并提取液。NY/T468-2006在收集的有機(jī)溶劑中加入0.10mol/L的鹽酸溶液5ml，渦旋混合30秒，以5000r/min的速度離心2分鐘，吸取下層水溶液，同樣步驟重復(fù)萃取一次，合并兩次萃取液，用2.5mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至5.2。2.凈化SCX小柱依次用甲醇5ml、水5ml和30mmol/L鹽酸5ml活化，然后將上述萃取液上樣至固相萃取小柱中依次用水5ml和甲醇5ml淋洗柱子，在溶劑流過(guò)固相萃取柱后，抽干SCX小柱，再用4%氨化甲醇溶液5ml洗脫，收集洗脫液。

3.測(cè)定

(1)衍生化：在50℃水浴中用氮?dú)獯蹈缮鲜鱿疵撘?，加入甲?00

l和BSTFA(雙三甲基硅烷三氟乙酰胺)100

l，試管加蓋后于渦旋混合器上振蕩30秒，在80℃的烘箱中加熱衍生1小時(shí)(蓋住蓋子)；同時(shí)吸取標(biāo)準(zhǔn)工作液0.5ml加入到4%氨化甲醇溶液4.5ml中，用氮?dú)獯蹈珊笸瑯悠凡僮鳎苌Y(jié)束后加入甲苯0.3ml轉(zhuǎn)入進(jìn)樣小瓶中，進(jìn)行氣相色譜-質(zhì)譜(GC/MS)分析。(2)GC/MS測(cè)定參數(shù)：色譜柱HP-5MS5%苯基甲基聚硅氧烷，30m×0.25mm(內(nèi)徑)，0.25

m(膜厚)；進(jìn)樣口溫度220℃；進(jìn)樣方式不分流；進(jìn)樣體積1

l；柱溫70℃(保持0.6分鐘)，以25℃/min升溫至200℃(保持6分鐘)，以25℃/min升溫至280℃(保持5分鐘)；載氣氦氣；流速0.9ml/min(恒流)；GC/MS傳輸線溫度280℃；溶劑延遲8分鐘；EM電壓高于調(diào)諧電壓200V；離子源(EI)溫度200℃；四極桿溫度160℃；選擇離子監(jiān)測(cè)(m/z)86、212、262、277。4.定性定量方法(1)定性：樣品峰與標(biāo)樣的保留時(shí)間之差不多于2秒，并人工比較選擇離子的豐度，其中試樣峰的選擇離子相對(duì)強(qiáng)度(與基峰的比例)不超過(guò)標(biāo)準(zhǔn)相應(yīng)選擇離子相對(duì)強(qiáng)度平均值的

20％(m/z262)和

50％(m/z212、277)。(2)定量方法：選擇試樣峰(m/z86)