營養(yǎng)基因組學指導慢病人群健康管理指南 (征求意見稿)

1本文件規(guī)定了營養(yǎng)基因組學的檢測方法、試劑和儀器、樣本的采集和檢測、質(zhì)量控制、結(jié)果判讀、檢測報告出具及基因位點的臨床意義解讀。本文件適用于醫(yī)院、第三方實驗室的臨床研究、科研、常規(guī)檢測等營養(yǎng)基因組學項目的結(jié)果解讀。2規(guī)范性引用文件本文件沒有規(guī)范性引用文件。3術語和定義下列術語及定義適用于本文件。3.1脫氧核糖核酸deoxyribonucleicacid,DNA核酸的一種，是由特殊序列的脫氧核糖核苷酸單元（dNTP）構(gòu)成的多聚核苷酸，起攜帶遺傳信息的功能。DNA為一種雙鏈分子，通過核苷酸堿基對間的氫鍵維系。DNA包含的類型的DNA：來自染色體的基因組DNA（gDNA）和線粒體DNA（mtDNA）。3.2基因gene遺傳物質(zhì)的最小功能單位，是指具有一定生物學意義的一段DNA。3.3單核苷酸多態(tài)性Singlenucleotidepolymorphism由單個核苷酸-A、T、C或G的改變而引起的DNA序列的改變，造成包括人類在內(nèi)的物種之間染色體基因組的多樣性。3.4營養(yǎng)基因組學Nutrigenomics研究營養(yǎng)素和植物化學物質(zhì)對機體基因的轉(zhuǎn)錄、翻譯表達及代謝機理的科學。3.5聚合酶鏈式反應法polymerasechainreaction,PCR一種分子生物學技術，用于放大特定的DNA片段，可看作生物體外的特殊DNA復制。23.6實時熒光定量PCR法real-timequantitativepcr,qPCR在DNA擴增反應中加入熒光基團，以熒光信號累積實時檢測每次PCR循環(huán)后產(chǎn)物總量，進而對待測樣品中的目的序列進行定量分析的方法。3.7原位雜交法insituhybridization，ISH用特定標記的已知堿基序列核酸作為探針與組織、細胞中待檢測核酸按堿基互補配對的原則在原位進行特異性結(jié)合，形成雜交體，然后用與標記物相應的監(jiān)測系統(tǒng)，通過免疫組織化學方法在被檢測核酸原位進行細胞內(nèi)核酸定位。3.8Sanger測序Sangersequencing英國人FrederickSanger發(fā)現(xiàn)在DNA復制過程中摻入ddNTP，會產(chǎn)生一系列末端終止DNA鏈，能通過電泳按長度分辨。由此誕生了以Sanger命名的測序原理即雙脫氧鏈終止法測序原理。3.9臨床實驗室自建項目LaboratoryDevelopedTest,LDT臨床實驗室自建項目是指醫(yī)學檢驗部門自行開發(fā)建立，并自發(fā)在實驗室和臨床進行技術研發(fā)論證，遵循質(zhì)量控制體系和管理標準的檢測方法。4技術要求4.1營養(yǎng)基因組學基因檢測4.1.1檢測方法選擇常用于靶標檢測的方法包括實時熒光定量PCR法、PCR-電泳分析法、PCR-高分辨率熔解曲線法、PCR-核酸質(zhì)譜法、原位雜交（ISH）法、PCR-基因芯片法、PCR-Sanger測序法、PCR-焦磷酸測序法、高通量測序法。應根據(jù)國家的體外診斷試劑分類要求和實驗室基因檢測的用途選擇合適的檢測方法。34.1.2試劑選擇和要求臨床檢測試劑應為國家藥品監(jiān)督管理局（NationalMedicalProductsAdministration,NMPA）批準的試劑盒，如果無法滿足臨床檢測需求，可采用符合國家《個體化醫(yī)學檢測LDT研制技術規(guī)范（試行版）》要求的實驗室自用方法（Laboratorydevelopedtest,LDT）試劑，所用標準品或標準參考物應符合國家衛(wèi)生健康委臨床檢驗中心推薦的標準和要求?！獙τ趪遗鷾实纳虡I(yè)化試劑盒，可按照說明書進行性能驗證。——對于LDT試劑，應按照《個體化醫(yī)學檢測質(zhì)量保證指南（試行版）》和《個體化醫(yī)學檢測LDT研制技術規(guī)范（試行版）》的要求進行性能驗證。4.1.3儀器選擇和要求實驗室可參考生產(chǎn)商提供的操作說明書編寫書面的、有案可查的預防性維護及校準計劃，確定儀器設備的維護周期，建立儀器設備日常維護的標準操作程序（StandardOperatingProcedure,SOP）?！糜诨驍U增及產(chǎn)物分析的機器應有省級及以上藥品監(jiān)督管理局批準的注冊號?！獙τ谀承┯嬃糠治鰞x器，應依照我國計量法規(guī)定，由計量檢定機構(gòu)定期進行校驗，并保存好校驗證書。——應對加熱系統(tǒng)及冰箱等設備的溫度進行監(jiān)測?！獌x器維護過程中要注意清潔劑的使用，尤其是儀器的光路系統(tǒng)。——每臺儀器應配備專用的清潔工具。——在例行儀器的維護和保養(yǎng)后，應填寫儀器設備維修保養(yǎng)記錄表。4.2檢測流程4.2.1分析前樣本處理樣本的采集、運送和保存應按照NMPA批準的檢測試劑說明書和LDT試劑的SOP嚴格進行。4.2.2樣本的采集——用于基因檢測的樣本類型主要為全血樣本，也可以為唾液樣本。4——靜脈血液采集之前應按要求對預采血的部位徹底消毒?！獦颖静杉枰诿荛]、一次性采樣系統(tǒng)中完成，所用的材料如注射器、棉簽、——無論采集哪種類型的樣本，采樣時都必須戴手套，以避免樣本中病原微生物感4.2.3DNA核酸提取4.2.4靶標檢測實驗過程中應嚴格執(zhí)行實驗室SOP，不能擅自修改，以保證檢測各環(huán)節(jié)標準、有序地進行，確保檢測結(jié)果的真實性、準確性和可重復性。4.3個體化營養(yǎng)建議4.3.1參考標準參考美國食品藥品管理局（FoodandDrugAdministration,FDA）、中國疾病預防控制中心（ChineseCenterforDiseaseControlandPrevention,CDC）和Pubmed等發(fā)布的最新指南、專家共識或公開發(fā)表的高質(zhì)量臨床研究，參照營養(yǎng)基因組學檢測結(jié)果，結(jié)合慢病患者個體臨床實際診療情況，給出個體化營養(yǎng)和注釋。4.3.2基因結(jié)果臨床解釋綜合分析患者的健康問題，結(jié)合基因檢測結(jié)果，對患者本身存在的飲食問題進行干預。飲食建議會跟隨客戶的健康狀況的變化而變化，有必有進行周期性隨訪。4.3營養(yǎng)相關檢測位點表5鹽NPPA鈣鐵鋅碘鈉鉀鎂NBPF3表1.營養(yǎng)相關檢測位點表6參考文獻[1]Nutrigenomics:the[3]DronamrajuK.Profilesingenetics:Ar[4]孫長顥.分子營養(yǎng)學的定義及發(fā)展簡史[J].營養(yǎng)健康新觀察,2004[6]RayS.PersonalizedModificationofBreastMiCommunication[J].CurrentResearchinNutrition&Food