結核分支桿菌檢驗腳本

同學們大家好，歡迎大家來到微生物檢驗課堂。我是伊寧衛(wèi)生學校的周曉璇老師,本次課我們一起學習結核分支桿菌。結核分枝桿菌常常被稱為是細菌界又丑又懶又作精的細菌，那是為什么呢？讓我們一起來探索。結核分枝桿菌為細長直或略彎桿狀，有時分枝，有莢膜。革蘭染色陽性，但因結核分枝桿菌外側有較厚的脂質層，故在革蘭染色時，不易著色，常采用抗酸染色進行染色，此菌為抗酸菌。結核分枝桿菌為專性需氧菌，最適PH值6.5到6.8，生長非常緩慢，繁殖一代需要18到24小時才能完成，營養(yǎng)要求也高，常采用的培養(yǎng)基為羅氏培養(yǎng)基，在羅氏培養(yǎng)基，培養(yǎng)2到4周后可見乳白色米黃色顆粒結節(jié)或菜花狀的r型菌落，鑒于結核分枝桿菌生長緩慢，營養(yǎng)要求高，菌落不規(guī)則的特點，所以被稱為又丑又懶又作精的細菌。同時，結合分枝桿菌的抵抗力，也有它獨樹一幟的特點，他對75%的乙醇、濕熱、紫外線相對敏感，但可以耐受較干燥、強酸、強堿的環(huán)境，也可以耐受孔雀綠。微生物檢查法：結核病的臨床診斷需結合流行病學、臨床表現(xiàn)、影像和病理檢查結果綜合判斷，微生物學檢查法是確診依據。根據疾病類型和病灶部位采集標本。如肺結核采取痰液標本，最好取早晨第一次痰液，挑取帶血痰或濃痰。腎或膀胱結核采取無菌導尿或取中段尿液，腸結核采取糞便樣本，結核性腦膜炎，采取腰椎穿刺或采取腦積液。采集后的標本可直接涂片或離心沉淀、濃縮集菌后再涂片，用抗酸染色法染色鏡檢，如鏡下找到抗酸桿菌，則報告為查到抗酸桿菌，既可能是結核分枝桿菌，也可以是牛分枝桿菌、非結核分枝桿菌。細菌涂片檢查法較為簡單快速，但靈敏度低。2.分離培養(yǎng)：將待檢樣品，先置于4%氫氧化鈉或3%鹽酸培養(yǎng)基處理，再用離心沉淀法去沉淀物接入改良羅氏培養(yǎng)基，培養(yǎng)基所含的孔雀綠可抑制雜菌生長，在37℃環(huán)境下培養(yǎng)3-4周，可見菌落生長。根據生長速度和菌落特點可初步判斷為結核分枝桿菌。進一步用結核染色法、生化反應和分子診斷技術鑒定菌種。同時，抗結核一線藥物的敏感實驗也是非常有必要做的，采用商業(yè)化的快速培養(yǎng)系統(tǒng)，檢測時間可縮到2-3周，3.免疫學診斷：（1）結核菌素皮膚實驗（簡稱TST），也稱ppd實驗，是檢測機體是否存在針對結核菌素的遲發(fā)型超敏反應的一種皮試實驗，PPD即為純蛋白衍生物。是將細菌接種于甘油肉湯培養(yǎng)基，收集過濾液并加熱處理，再經三氯醋酸沉淀后的純化物，主要成分為細菌分泌的蛋白質且耐熱的成分。實驗方法是：取5單位的PPD，注入受試者前臂下皮，48至72小時后觀察接種部位出現(xiàn)紅腫應激反應，并測量應急直徑，直徑≥5mm者為陽性，直徑≥20mm者為強陽性，以輔助診斷機體是否感染結核分枝桿菌。（2）結核菌素皮試實驗，又稱TST，TST實驗僅用于輔助診斷兒童結核病，常用于評估卡介苗的免疫接種效果，潛伏結核病感染的流行病學調查或評估腫瘤病人的細胞免疫功能。需要注意的是，卡介苗免疫接種可引起不良性反應，另外，在發(fā)生感染早期患嚴重的結核病或伴有其他嚴重疾病，致細胞免疫功能低下，人群可出現(xiàn)陰性反應。（3）γ干擾素釋放實驗（IFN-γ）機體被結核分枝桿菌感染后，外周血中存在抗原特異性的T細胞，當再次遇到抗原刺激時，能迅速活化增殖并產生IFN-γ。IFN-γ釋放實驗是基于此原理建立的一種體外免疫檢測結核分枝桿菌感染的新方法。具體操作方法是：采集受試者外周學全血，或分離外周血單個核細胞，分離結核分枝桿菌桿菌較為特意的抗原，通過酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)定量檢測血漿中的IFN-γ的含量或酶聯(lián)免疫斑點實驗檢（ELISPOT）測分泌IFN-γ的T細胞的數量。該實驗方法特異性高于TST，且2天內可獲得結果，但不能將活動性結核病人從潛伏結核病感染中區(qū)分出來。（4）分子診斷：常用PCR技術，檢測結核分枝桿菌DNA，靈敏度高，每毫升標本中含有10到100個活菌即可檢出。RIF技術：以全自動實時熒光定量pcr技術為基礎，檢測rpoB基因。可在兩小時內同時檢測標本中存在的結核分枝桿菌和對利福平的耐藥性，可用于快速診斷。4.防治原則：對于結核病高負擔，國家針對新生兒普遍接種卡介苗（BCG）免疫接種。全球150多個國家和地區(qū)，包括中國將免疫接種卡介苗納入計劃免疫，我國規(guī)定，新生兒出生后24小時內要及時皮下接種卡介苗一次，但不推薦復種。一般認為，卡介苗可有效預防兒童結核性腦膜炎，粟粒性肺結核等重癥結核病。保護期僅10到15年，預防成人肺結核和潛伏期結核病感染的效果較差。新一代的結核病疫苗包括亞單位疫苗、DNA疫苗，改良卡介苗和結核分枝桿菌減毒活疫苗仍在研究中。治療原則：對作為傳染源的活動性肺結核病人，因早發(fā)現(xiàn)、早報告