刺參細(xì)菌性腐皮綜合征調(diào)查技術(shù)規(guī)范

1GB17378.7海洋監(jiān)測規(guī)范第7部分：近海污NY5052無公害食品海水養(yǎng)殖NY5070無公害食品水產(chǎn)品中漁藥殘DB37/T442無公害食品刺刺參細(xì)菌性腐皮綜合征bacterialskinulcersynd25.1調(diào)查人員接到報(bào)告后應(yīng)立即到達(dá)疾病發(fā)生地對(duì)疾病進(jìn)行核實(shí)。通過觀察刺參身體是否出6.2診斷確定刺參細(xì)菌性腐皮綜合征病原存在，遵循“早發(fā)現(xiàn)、早隔離、早治療”6.3專業(yè)調(diào)查人員應(yīng)根據(jù)調(diào)查、診斷、治療情況，提出處理措施和技術(shù)方案，協(xié)助7.1現(xiàn)場調(diào)查判定為刺參細(xì)菌性腐皮綜合征后，上一級(jí)漁業(yè)技術(shù)服務(wù)機(jī)構(gòu)應(yīng)組7.3上一級(jí)漁業(yè)技術(shù)服務(wù)機(jī)構(gòu)應(yīng)組織有關(guān)專家確定可能受到威脅的區(qū)域，提出3b)應(yīng)涉及監(jiān)測地點(diǎn)現(xiàn)場調(diào)查、追蹤調(diào)查、溯源調(diào) 水質(zhì)條件：(溫度、鹽度、酸堿度、溶氧、氨氮、浮游動(dòng)典型征狀：□急性發(fā)病死亡□體色正常(棕色/淡紅色/綠色)或發(fā)白□體表潰爛 6置28℃培養(yǎng)1d～2d后挑取優(yōu)勢菌落，重復(fù)培養(yǎng)3次以獲得純化菌株。記錄純化菌株的形狀、大小、顏B.2.1.2挑取單菌落，用2%戊二醛電鏡固定液固定數(shù)分鐘，取一滴固定好的菌液置于銅網(wǎng)上，以3%對(duì)純培養(yǎng)細(xì)菌菌株進(jìn)行16SrDNA分析。首先提取純培養(yǎng)細(xì)菌菌株DNA，測定其濃度，保證在60-100ng/μL。以此為模板、利用16S通用引物(27f:5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’，1492r:5’-TACGGCTACCTTGTTACGACTT-3’)進(jìn)行PCR擴(kuò)增。50μL的PCR反應(yīng)體系中含有：PreMix混合物25μL，濃度20μmol/L引物各1μL，DNA模板1μL，加蒸餾水至50μL體積。PCR反應(yīng)條件為：94℃預(yù)得序列結(jié)果，將結(jié)果上傳NCBIGenBank數(shù)據(jù)庫進(jìn)行Blast比對(duì)，選擇同源性較高7征征 ：（疾病發(fā)生地養(yǎng)殖水質(zhì)條件：(溫度、鹽度、酸堿度、溶氧、氨氮、浮游動(dòng) 設(shè)施條件：(育苗池、養(yǎng)殖池、餌料池、供水系統(tǒng)、供熱系統(tǒng)、供電系統(tǒng)，包括進(jìn)排水發(fā)病情況□急性發(fā)病死亡□體色正常(棕色/淡紅色/發(fā)病情況發(fā)病后的處理措施近三年疾病發(fā)生 疾病發(fā)生監(jiān)測區(qū)疾病發(fā)生監(jiān)控區(qū)周圍河流、湖泊：□有□無發(fā)病動(dòng)物來源情況發(fā)病動(dòng)物去向情況 水質(zhì)條件：(溫度、鹽度、酸堿度、溶氧、氨氮、浮游動(dòng)設(shè)施條件：(育苗池、養(yǎng)殖池、餌料池、供水系統(tǒng)、供熱系統(tǒng)、供電系統(tǒng)，包括進(jìn)排水疾病發(fā)生地天氣 感染源及感染途徑 針對(duì)疾病的防治疾病發(fā)生后期的 近三年疾病發(fā)生監(jiān)測技術(shù)方案情況E.2.1.2取樣前應(yīng)準(zhǔn)備一份樣品收集程序文件，包括樣品收集前完成工作的核查表、收集樣E.2.4.4若發(fā)現(xiàn)問題，應(yīng)及時(shí)將嚴(yán)重潰爛的個(gè)體揀出后掩埋或無害化處理，未發(fā)病和病輕的個(gè)體可用E.2.6.6每月或發(fā)現(xiàn)刺參異常時(shí)要通過DGGE或高通量測序技術(shù)進(jìn)行水質(zhì)和刺參腸道內(nèi)微生物a)一般煮沸法：普通鍋內(nèi)煮沸1.0h。適用對(duì)象包括c)焚燒法：在焚化爐中燒毀碳化。適用最初調(diào)查情況 現(xiàn)場調(diào)查情況 現(xiàn)場調(diào)查情況 追蹤調(diào)查情況