動植物油脂甘三酯分子2脂肪酸組分的測定編制說明

PAGEPAGE7《動植物油脂甘三酯分子2-脂肪酸組分的測定》編制說明前言油脂是混脂肪酸甘油三酯的混和物（themixturesofmixedtriglycerides），是自然界存在的三大重要物質(zhì)之一。組成油脂中甘三酯分子的脂肪酸是長碳鏈的（C10以上），與甘油基的重量比是90～95：10～5，脂肪酸占主要成分?？茖W研究已證明，脂肪酸的種類、含量、結構及在甘油基上的位置影響甘三酯的物理、化學特性及生理作用，特別是在人體中的代謝方式和生理功效。因此，脂肪酸的種類、含量的多少、在甘三酯中的分配是研究油脂最關注的對象。另外，構成油脂的脂肪酸在貯存、流通和加工過程中氧化、酸敗，其結構會發(fā)生變化，生成對人體有害的小分子物質(zhì)、氧化聚合物等等，不同脂肪酸抗氧化能力不同，一般相同條件下，不飽和脂肪酸比飽和脂肪酸易氧化，亞油酸比油酸易氧化等等，由此引起油脂的品質(zhì)發(fā)生變化，油脂產(chǎn)品質(zhì)量的優(yōu)劣直接關系到人民群眾的身體健康和生命安全。目前我國食用油脂年消耗量2000萬噸以上，并且隨著經(jīng)濟的發(fā)展和生活水平的提高，油脂產(chǎn)品多達數(shù)十種，價格也相差幾倍乃至十幾倍，一些見利忘義的不法之徒，摻假銷售，不僅損害消費者的利益，而且擾亂市場秩序。另外，油脂已不僅僅是大眾化烹調(diào)油，也有真對不同年齡、不同健康狀況人群使用的功能性油脂，如：醫(yī)用油脂中的中碳鏈脂肪酸甘油酯、嬰幼兒配方乳用脂肪等等。綜上所述，建立油脂甘三酯分子2-脂肪酸組分的測定方法，多一些科學鑒別手段，例如：橄欖油富含油酸，抗氧化穩(wěn)定性能較高，市場定價也很高，可以通過2-脂肪酸的測定，檢驗橄欖油的真?zhèn)危袛嚅蠙煊偷馁|(zhì)量。因此，通過油脂結構檢測和分析達到監(jiān)控油脂品質(zhì)、質(zhì)量變化，評價油脂生理功效及引導消費者正確食用油脂的目的，對我國油脂行業(yè)的發(fā)展、經(jīng)濟的發(fā)展具有重要意義。目前，國內(nèi)還沒有油脂甘三酯分子2-脂肪酸組分的測定方法的國家標準分析方法。任務來源及工作過程《動植物油脂甘三酯分子2-脂肪酸組分的測定》是由國家標準化管理委員會、全國糧油標準化技術委員會下達的“07年國家糧油標準制修訂計劃工作”中的一項，項目編號為20071527-T-449。該項國家標準由國家糧食局提出并歸口，國家糧食局科學研究院負責主持研究工作、方法驗證、標準的起草、征求意見、編制說明等。本標準制定主要工作過程為：首先，確定項目研究的目標，確定該項工作的具體實施方案和工作計劃。我們查閱了大量的國內(nèi)外科技文獻資料，進一步認識了動植物油脂中甘三酯分子2-脂肪酸組分的測定原理和過程，理解了該項標準測定方法的目的和意義。其次，確定甘三酯分子2-脂肪酸組分的測定擬采用的檢測手段。眾所周知，進入二十一世紀以后，科學儀器及實驗技術的發(fā)展使油脂的化學研究不斷深入，利用氣相色譜、液相色譜等現(xiàn)代儀器已經(jīng)能夠準確測定出甘三酯分子2-脂肪酸組分，而且這些測定方法具有靈敏度、精確度高的優(yōu)點，比較而言，氣相色譜的應用更普遍一些。結合我國油脂行業(yè)發(fā)展現(xiàn)狀和我國經(jīng)濟發(fā)展水平，參照國際相關行業(yè)的現(xiàn)狀，本項目擬采用氣相色譜分析方法。第三，確定擬采用或參照的國際標準組織分析方法。我們收集了目前國內(nèi)、國外比較重要的國際標準組織的方法。國外的有：國際標準化組織標準方法（ISO）、國際理論和應用化學家協(xié)會標準方法（IUPAC）、美國油脂化學家協(xié)會標準方法（AOCS）、國際分析化學家協(xié)會標準方法（AOAC）、美國實驗材料協(xié)會標準方法（ASTM）、德國標準組織方法（DGF）及英國標準組織方法（BSI）等。我們對搜集到的相關標準資料進行翻譯、比較、研究和分析，結合國家標準的制訂是為企業(yè)生產(chǎn)、貿(mào)易流通、政府部門監(jiān)督、檢測等提供基礎技術服務的目的，測定步驟要明確的要求，本項目擬等同采用國際標準化組織的分析方法。第四，通過測定樣品驗證標準分析方法的可行性。我們按照國家標準等同采用ISO國際標準的制訂要求，迅速開展實驗室測定，對該標準方法所用的試劑、儀器設備、操作過程、操作條件等方面進行實驗驗證工作。我們收集了2～7個樣品，分別進行7次測定，并進行數(shù)理統(tǒng)計分析。按該標準分析方法操作，平行試驗結果符合雙實驗要求。同時，我們選定2個樣品，作不同實驗室的驗證工作。第五，為了使制定的標準符合我國油脂行業(yè)生產(chǎn)、貿(mào)易的需要，符合油脂行業(yè)發(fā)展的要求，符合質(zhì)檢部門的監(jiān)督、檢測的實際情況，具有較強的操作性，我們向一些高等院校、民營企業(yè)、跨國公司等相關生產(chǎn)和貿(mào)易單位，以及質(zhì)量技術監(jiān)督部門咨詢有關事宜和建議，完成該項標準的《初稿》和編制說明工作。二、《動植物油脂甘三酯分子2-脂肪酸組分的測定》標準的編制原則《動植物油脂甘三酯分子2-脂肪酸組分的測定》標準方法的編制原則是（1）市場化原則。本標準檢測方法的編制過程應符合市場上食用油產(chǎn)品的要求，符合油脂生產(chǎn)企業(yè)、應用企業(yè)發(fā)展的要求，同時滿足科研院所等開發(fā)新產(chǎn)品的要求，滿足市場監(jiān)督、檢測的要求。（2）重要性原則。本標準檢測方法的建立對打擊假冒偽略產(chǎn)品具有一定作用，保護消費者的切身利益，有利于促進市場建立誠信機制，有利于生產(chǎn)企業(yè)的市場競爭，也有利于應用企業(yè)、消費者根據(jù)不同用途明確選擇，促進企業(yè)開發(fā)出更多更好的油脂產(chǎn)品，滿足我國實際生產(chǎn)和生活的需要。（3）自主創(chuàng)新原則。本項標準檢測方法的制訂是在以符合等同采用國際標準要求的前提下，結合我國油脂生產(chǎn)企業(yè)的實際情況，如：柱色譜、薄層色譜和氣相色譜普及情況，總結出簡便、實用的甘三酯分子2-脂肪酸組分的測定方法。(4)國際化原則。該項標準方法的制訂過程，遵循了世界貿(mào)易組織的規(guī)則，積極采用國際標準。該項標準的建立和使用，將促進我國油脂加工行業(yè)的綜合競爭力。本標準的結構、技術要素及表述方法是按照GB/T1.1-2000《標準化工作導則第1部分：標準的結構和編寫規(guī)則》、GB/T20001.4-2001《標準編寫規(guī)則第4部分：化學分析方法》以及GB/T20000.2-2001《標準化工作指南第2部分：采用國際標準的規(guī)則》規(guī)定的要求進行編寫。三、《動植物油脂甘三酯分子2-脂肪酸組分的測定》方法主要內(nèi)容及依據(jù)1、本標準的主要內(nèi)容《動植物油脂甘三酯分子2-脂肪酸組分的測定》國家標準方法主要內(nèi)容包括：封面前言標準主體內(nèi)容：范圍、規(guī)范性引用文件、原理、試劑、儀器、取樣及試樣制備、分析步驟、結果表示、精密度、實驗報告等。附錄A（規(guī)范性附錄）附錄B（資料性附錄）附錄C（資料性附錄）2、《動植物油脂甘三酯分子2-脂肪酸組分的測定》方法原理的確定依據(jù)原理：在中和游離脂肪酸后，用柱色譜凈化試樣。獲得的甘三酯被酶部分水解生成2-單甘酯。用薄層色譜分離單甘酯，并用氣相色譜分析脂肪酸組分。原理依據(jù)是胰脂肪酶對甘三酯分子1，3-脂肪酸有專一性水解功能。3、對《動植物油脂甘三酯分子2-脂肪酸組分的測定》方法的實驗驗證用丹尼斯克純單甘酯樣品作標樣，并按本標準中規(guī)定的薄層色譜分離方法操作，在254nm紫外光下鑒別譜帶，見圖1。圖1中間的黃色部分是薄層板，右側(cè)明亮的部分是點樣的位置，兩個偏暗的黃點就是單甘酯，由此確定單甘酯在薄層色譜上的位置。圖1丹尼斯克單甘酯標樣薄層色譜圖2油脂經(jīng)胰脂肪酶水解后薄層色譜用市售胰脂肪酶水解油脂樣品，采用本標準中規(guī)定的薄層色譜方法分離，在254nm的紫外燈下譜帶見圖2。1-單甘酯的譜帶位置略高于2-單甘酯的譜帶位置。水解試樣與單甘酯標準樣品在紫外光下鑒別譜帶對比見圖3。從右到左譜帶順序依次為單甘酯、甘二酯、脂肪酸和甘三酯。以此為依據(jù)分離2-單甘酯。經(jīng)過中和、柱過濾、水解、薄層色譜分離獲得2-單甘酯，取走2-單甘酯譜帶的硅膠后的薄板在紫外光下的狀態(tài)見圖4。圖3水解后油脂樣品和單甘酯標樣薄層色譜對比圖4分離2-單甘酯后在紫外光下的薄層色譜圖分離的2-單甘酯按國標規(guī)定方法盡快的甲酯化并用氣相色譜分析其脂肪酸組成。為保證甲酯化方法和脂肪酸組成測定方法的精密度，我們用菜籽油進行重復性試驗，試驗結果及數(shù)理統(tǒng)計見表1。選定顯著水平為0.05，單側(cè)檢驗，查表可知n為10時，相應的G值為2.29，大于Grubbs檢驗值，故測定結果無異常值。表1菜籽油甲酯化脂肪酸組成分析結果（m/m）脂肪酸16:016:118:018:118:220:020:118:322:022:124:1校正因子10.990.980.970.970.970.970.960.950.950.9414.9470.1611.75643.60821.2770.7523.5628.2480.52314.6700.49624.9630.1781.75543.53721.2920.7463.5838.3060.53914.5920.51234.9590.1831.75943.56721.2820.7453.5648.2230.57014.6490.49644.9580.2051.76043.56621.3110.7383.5508.2360.52114.6460.51054.9560.2061.75143.53621.2580.7413.5498.2270.52314.7770.47564.9490.1701.76143.51721.2500.7513.5678.2160.52514.8020.49474.950.2131.75943.51421.2290.7423.5738.240.52814.7500.50284.9450.1791.76743.48521.2250.7423.5738.230.53014.8000.49394.9530.1991.75043.50621.2510.7553.5598.1890.52714.8050.507104.9430.2081.75043.47721.2500.7513.5698.2520.54214.7470.511平均值4.9520.1901.75743.53121.2660.7463.5658.2370.53314.7240.500標準差0.006580.018160.005490.044770.036540.005660.010540.045040.016770.077810.01135絕對差0．0110．0290．0100．0770．0450．0090．0180．0690．0370．1320．025G檢驗1．671．601．821．721．231．591．711．532．211．702．20表25種油脂脂肪酸組成和2-脂肪酸組分分析(m/m)脂肪酸C16:0C16:1C18:0C18:1C18:2C20:0C20:1C18:3C22:0C22:1校正因子10.990.980.970.970.970.950.960.950.95茶油脂肪酸8.620.212.1580.927.26-0.620.23--2-脂肪酸6.15-1.8670.5015.67-1.214.61--加菜油脂肪酸4.290.192.3268.8716.580.811.315.230.43-2-脂肪酸4.64-2.7171.2715.020.701.254.40--玉米油脂肪酸13.13-1.7832.6051.150.470.240.64--2-脂肪酸12.94-1.9133.3649.730.520.381.01--花生油脂肪酸11.35-3.6945.1033.341.530.89-2.67-2-脂肪酸9.056-80.5910.35湖北菜脂肪酸3.68-1.7341.2514.78-7.307.76-23.472-脂肪酸8.63-2.2446.4831.18-1.447.71-2.314、對《動植物油脂甘三酯分子2-脂肪酸組分的測定》方法的不同實驗室間驗證我們選定5個樣品，進行兩個實驗室間的驗證，測定結果見表3。表3不同實驗室同時測定相同試樣的2-脂肪酸組分結果（m/m）脂肪酸c16:0c16:1c18:0c18:1c18:2c20:0c20:1c18:3c22:1玉米油A12.94-1.9133.3649.730.520.381.01-B12.39-2.1235.4647.540.480.381.43-絕對差0.55-0.212.102.190.040.000.42-花生油A7.880.292.5848.1032.504.820.123.230.47B7.40-2.5648.6033.104.410.083.170.45絕對差0.480.290.020.500.600.410.040.060.02加菜油A4.94-2.4171.2715.020.701.254.40-B5.23-1.9468.5915.670.571.304.79-絕對差0.29-0.472.680.650.130.050.39-茶油A6.15-1.8670.5015.67-1.214.61-B5.97-1.4368.4915.70-1.244.19-0.18-0.432.010.03-0.030.42-湖菜油A8.63-2.2446.4831.18-1.447.712.31B9.25-2.7447.9228.80-1.788.052.12絕對差0.62-0.501.442.38-0.340.340.19測定結果符合本標準中規(guī)定的當脂肪酸含量<5%（m/m）時，絕對差<0.5%；當脂肪酸含量≥5%（m/m）時，絕對差<3%的再現(xiàn)性要求。四、新舊國家標準的總體對比目前，甘三酯分子2-脂肪酸組成的測定尚無國家標準，本標準的數(shù)據(jù)來源于科學試驗數(shù)據(jù)，實用性強，同時本標準的制定又