第七章-分析數(shù)據(jù)處理與分析方法驗(yàn)證

第七章分析數(shù)據(jù)處理與分析方法驗(yàn)證第一節(jié)誤差與數(shù)據(jù)處理

第二節(jié)含量測(cè)定方法與計(jì)算

第三節(jié)分析方法驗(yàn)證第二節(jié)含量測(cè)定方法與計(jì)算

一、方法選擇二、含量計(jì)算

一、方法選擇

化學(xué)原料藥純度較高。限度嚴(yán)格，如果雜質(zhì)可嚴(yán)格控制，選擇分析方法時(shí)可側(cè)重于方法的準(zhǔn)確性。因此，化學(xué)原料藥的含量測(cè)定方法一般首選容量分析法。

中藥材及其成方制劑成分復(fù)雜，被測(cè)組分一般含量較低，共存組分干擾嚴(yán)重，因此，選擇分析方法時(shí)應(yīng)側(cè)重于方法的專屬性和靈敏度。色譜法具有較高的選擇性和靈敏度，因此是中藥材及其成方制劑中藥效成分含量測(cè)定的首選方法。

化學(xué)藥物制劑種類較多，選擇分析方法時(shí)應(yīng)根據(jù)制劑中被測(cè)組分含量高低、復(fù)方制劑中共存組分影響以及輔料成分的干擾程度進(jìn)行選擇。由于藥物制劑的含量限度較寬（一般為標(biāo)示量的90.0%~110.0%或?yàn)闃?biāo)示量的95.0%~105.0%）可供選擇的方法較多。(一)容量分析法(一)特點(diǎn)與適用范圍(1)方法簡(jiǎn)便易行(2)方法耐用性高(3)測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確(4)方法專屬性差

適用于原料藥含量測(cè)定(二)有關(guān)計(jì)算:1.滴定度與滴定度計(jì)算2.含量計(jì)算

(1)直接滴定法

(2)間接滴定法生成物滴定法剩余量滴定法也稱滴定法:將已知濃度滴定液滴加至被測(cè)藥物溶液中,至滴定終點(diǎn),根據(jù)滴定液的濃度,體積和滴定度,計(jì)算含量

容量分析法二、含量計(jì)算自動(dòng)電位滴定儀每1ml規(guī)定濃度的滴定液所相當(dāng)?shù)谋粶y(cè)藥物的質(zhì)量,mg

1.滴定度每1ml碘滴定液(0.05mol/L)相當(dāng)于8.806mg的C6H8O6

1.滴定度溴酸鉀法測(cè)定異煙肼(C6H7N3O=137.14)的含量,溴酸鉀滴定液濃度為0.01667mol/L(KBrO3為單元)

反應(yīng)式:

每1ml溴酸鉀滴定液(0.01667mol/L)相當(dāng)于3.429mg的異煙肼(C6H7N3O)

滴定度:2.含量測(cè)定直接滴定法

生成物滴定法剩余量滴定法(1)(2)(3)(1)直接滴定法注意掌握滴定反應(yīng)的原理,藥物與滴定劑在反應(yīng)中的摩爾比正確計(jì)算滴定度和百分含量(2)生成物滴定法注意摩爾比的替換藥物與A作用生成B,用滴定液滴定B百分含量計(jì)算方法與直接滴定法相同

(2)生成物滴定法滴定度

葡萄糖酸銻鈉含量測(cè)定:本品約0.3g,加水100ml、鹽酸15ml與碘化鉀試液10ml,暗處放置10分鐘,用硫代硫酸鈉滴定液(0.1mol/L)滴定每1ml硫代硫酸鈉滴定液(0.1mol/L)相當(dāng)于6.088mg銻(Sb)反應(yīng)式:(3)剩余量滴定法(回滴法)加入定過量滴定液A,用滴定液B滴定剩余的A注意:滴定度為滴定液A的滴定度無空白進(jìn)行空白校正(3)剩余量滴定法

司可巴比妥鈉含量測(cè)定:本品約0.1g,加水10ml溶解,精密加溴滴定液(0.05mol/L)25ml,再加鹽酸5ml,放置15分鐘,加碘化鉀試液10ml,用硫代硫酸鈉滴定液(0.1mol/L)滴定,滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正W=0.1022g;硫代硫酸鈉滴定液F=1.038;供試品消耗硫代硫酸鈉滴定液15.73ml;空白23.21ml(3)剩余量滴定法滴定度司可巴比妥鈉M=260.27,與溴摩爾比為1:1(3)剩余量滴定法滴定液A與滴定液B濃度是相當(dāng)?shù)匿宓味ㄒ?0.05mol/L)與硫代硫酸鈉滴定液(0.1mol/L)相當(dāng)

因?yàn)殇?Br2)等摩爾轉(zhuǎn)化為碘(I2),而碘(I2)與硫代硫酸鈉(Na2S2O3)反應(yīng)的摩爾比為1:2,所以溴滴定液與硫代硫酸鈉滴定液的濃度比也是1:2滴定液A與滴定液B經(jīng)濃度校正后的消耗體積(V’=V×F)是相當(dāng)?shù)?二)紫外-可見分光光度法1.特點(diǎn)與適用范圍(1)方法簡(jiǎn)便易行(2)方法靈敏度高(3)結(jié)果準(zhǔn)確度較高(4)方法專屬性較差

制劑含量測(cè)定與定量檢查2.儀器校正和檢定

(1)波長(zhǎng)

(2)吸光度的準(zhǔn)確度

(3)雜散光

3.測(cè)定法

對(duì)照品比較,吸收系數(shù)計(jì)算光譜,比色法基于對(duì)紫外光區(qū)(200~400nm)和可見光區(qū)(400~760nm)單色光吸收特性的分析方法原理:

UV-Vis(1)對(duì)照品比較法原料藥制劑氟康唑片溶出度檢查:取本品(規(guī)格:100mg),鹽酸溶液(9→1000)1000ml為溶出介質(zhì),經(jīng)45分鐘時(shí),取溶液濾過;取續(xù)濾液,在261nmm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度;另取氟康唑?qū)φ掌愤m量,精密稱定,加溶出介質(zhì)溶解并定量稀釋制成每1ml中約含0.1mg的溶液,同法測(cè)定,計(jì)算每片的溶出量溶液濃度

(2)吸收系數(shù)法原料藥制劑溶液濃度

鹽酸氯丙嗪注射液(規(guī)格：xxml:xxmg)的含量測(cè)定：精密量取適量(Vml,相當(dāng)于鹽酸氯丙嗪50mg),置200ml量瓶中,用鹽酸溶液(9

1000)稀釋至刻度,搖勻;精密量取2ml,置100ml量瓶中,用鹽酸溶液稀釋至刻度,搖勻,在254nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度,按吸收系數(shù)()為915計(jì)算

（三）色譜分析法特點(diǎn)與應(yīng)用分類

依據(jù)分離原理：(1)高靈敏度:ng-μg/ml(2)高專屬性:選擇性檢測(cè)(3)高效能與高速度吸附;分配;離子交換;分子排阻色譜法

復(fù)方制劑含量測(cè)定的首選方法依據(jù)分離方式：紙色譜;薄層色譜;柱色譜;氣相色譜;高效液相色譜法

F-IR(三)高效液相色譜法1.儀器(RP-HPLC)(1)色譜柱:ODS最常用;粒徑一般在3-10

m;溫度≯40℃

(2)檢測(cè)器:UV(DAD,PDA);Fluor,ELSD,RID,ECD,MS

(3)流動(dòng)相:

首選甲醇-水(末端波長(zhǎng)檢測(cè):乙腈-水),有機(jī)相≮5%;pH2-8

2.系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

(1)色譜柱的理論板數(shù)(n)

(2)色譜峰的分離度(R)

(3)色譜系統(tǒng)的重復(fù)性(RSD%)

(4)色譜峰的拖尾因子(T)3.測(cè)定法

(1)內(nèi)標(biāo)法

(2)外標(biāo)法不得改變：固定相種類,流動(dòng)相組分,檢測(cè)器類型可以改變：色譜柱內(nèi)徑,長(zhǎng)度,載體粒度流動(dòng)相流速,混合流動(dòng)相各組分的比例柱溫;進(jìn)樣量;檢測(cè)器的靈敏度HPLC2.系統(tǒng)適用性試驗(yàn)分離度(R):用于評(píng)價(jià)組分的分離程度;關(guān)鍵指標(biāo)重復(fù)性:用于評(píng)價(jià)連續(xù)進(jìn)樣系統(tǒng)響應(yīng)的重復(fù)性能

拖尾因子(T):用于評(píng)價(jià)色譜峰的對(duì)稱性理論板數(shù)(n):用于評(píng)價(jià)色譜柱的分離效能n=(tR/

)2=16(tR/W)2;n=5.54(tR/Wh/2)2;RSD≥1.53.測(cè)定法與計(jì)算(2)外標(biāo)法氨酚待因片(I)的含量測(cè)定取本品20片,精密稱定,研細(xì),精密稱取適量,置250ml量瓶中,加水溶解并稀釋至刻度,濾過,取續(xù)濾液10μl進(jìn)樣;另精密稱取磷酸可待因與對(duì)乙酰氨基酚對(duì)照品適量,加水溶解并定量稀釋制成每1ml中約含磷酸可待因0.03mg和對(duì)乙酰氨基酚2mg的溶液,同法測(cè)定(1)內(nèi)標(biāo)法

（二）GC法1.對(duì)GC儀器一般要求載氣為氮?dú)?；色譜柱為填充或毛細(xì)管柱色譜柱的理論板數(shù)：n=5.54(tR/Wh/2)2

2.系統(tǒng)性試驗(yàn)分離度：R=2（tR1–tR2)/(W1+W2);要大于1.5拖尾因子：T=W0.05h/2d1

應(yīng)在0.9～

1.05內(nèi)標(biāo)法加校正因子測(cè)定供試品中主成分含量

3.測(cè)定方法

標(biāo)準(zhǔn)曲線法

外標(biāo)法測(cè)定供試品中主成分含量外標(biāo)一點(diǎn)法應(yīng)用示例：Ch.P(2005)收載的月桂卓酮、維生素E及其片劑、注射劑、甲酚皂溶液等均采用GC法中的內(nèi)標(biāo)法加校正因子測(cè)定含量。返回

第三節(jié)分析方法驗(yàn)證一、準(zhǔn)確度

是指用該方法測(cè)定結(jié)果與真實(shí)值接近的程度，用回收率表示（一）含量測(cè)定方法的準(zhǔn)確度1.原料藥可用已知純度對(duì)照品或樣品進(jìn)行測(cè)定；或與已建準(zhǔn)確度的另一方法測(cè)定的結(jié)果進(jìn)行比較。2.制劑要考察輔料對(duì)回收率的影響。采用在空白輔料中加入原料對(duì)照品的方法作回收率試驗(yàn)，然后計(jì)算RSD。

具體做法：測(cè)定高、中、低三個(gè)濃度，n=3,共9個(gè)數(shù)據(jù)來評(píng)價(jià)回收率的RSD＜2%；用UV和HPLC法時(shí)，一般回收率可達(dá)98%～102%；容量法可達(dá)99.7%～100.3%

（二）數(shù)據(jù)要求

回收率%=（測(cè)定平均值—空白值）/加入量×100%要求制備高、中、低三濃度的樣品，各測(cè)定3次。應(yīng)報(bào)告已知加入量的回收率，或測(cè)定結(jié)果平均值與真實(shí)值之差及其可信限。

畢業(yè)論文示例

發(fā)表論文示例二、精密度

是指在規(guī)定的測(cè)試條件下，同一個(gè)均勻樣品，經(jīng)多次測(cè)定結(jié)果之間的接近程度。

（一）精密度表示方法1.偏差(deviation,d)d=測(cè)得值-平均值=Xi-X

2.標(biāo)準(zhǔn)偏差（standarddeviation,SD或S）

S=[(∑Xi–X)2/(n-1)]1/23.相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差(relativestandarddeviation,RSD)也稱變異系數(shù)(coefficientofvariation,CV)RSD=標(biāo)準(zhǔn)偏差/平均值×100%=S/X×100%（二）重復(fù)性、中間精密度及重現(xiàn)性1.重復(fù)性在相同條件下,由一個(gè)分析人員測(cè)定所得結(jié)果的精密度.2.中間精密度在同一個(gè)實(shí)驗(yàn)室，不同時(shí)間由不同分析人員用不同設(shè)備測(cè)定結(jié)果的精密度。3.重現(xiàn)性在不同實(shí)驗(yàn)室由不同分析人員測(cè)定結(jié)果的精密度。（三）數(shù)據(jù)要求

應(yīng)報(bào)告S或SD、RSD和可信限。用統(tǒng)計(jì)學(xué)的可信性分析(t或f）。

三、專屬性是指在其他成分(如雜質(zhì)、降解產(chǎn)物、輔料等)可能存在下，采用的方法能準(zhǔn)確測(cè)定出被測(cè)物的特性。鑒別反應(yīng)、雜質(zhì)檢查、含量測(cè)定方法，均應(yīng)考察其專屬性。

（一）鑒別試驗(yàn)應(yīng)能與其它共存的物質(zhì)或相似化合物區(qū)分，不含被測(cè)組分的樣品均應(yīng)呈現(xiàn)負(fù)反應(yīng)。（二）雜質(zhì)檢查

作為純度檢查，所采用的分析方法應(yīng)有一定的專屬性，以確保在規(guī)定限度內(nèi)檢出供試品中的相關(guān)雜質(zhì)。在雜質(zhì)可獲得的情況下，可向供試品中加入一定量的雜質(zhì)，證明雜質(zhì)與共存物質(zhì)能得到分離和檢出，并具適當(dāng)?shù)臏?zhǔn)確度和精密度。（三）含量測(cè)定

含量測(cè)定的目的是得到供試品中被分析物的含量或效價(jià)的準(zhǔn)確結(jié)果。在雜質(zhì)可獲得的情況下，可向供試品中加入一定量的雜質(zhì)或輔料，考察測(cè)定結(jié)果是否受干擾，并可與未加雜質(zhì)和輔料的供試品比較測(cè)定結(jié)果。

是指試樣中被測(cè)物能被檢測(cè)出的最低濃度或量，是限度檢驗(yàn)指標(biāo)。它無需測(cè)定，只要指出高于或低于該規(guī)定的濃度或量即可。（一）常用的方法

1.直觀法（非儀器分析目視法）用已知濃度被測(cè)物，試驗(yàn)出能被可靠地檢測(cè)出的最低濃度或量。2.信噪比法（儀器分析方法）

UV法：LOD=f.3S空=C樣/A樣×

3S空

Flu法：LOD=f.3S空=C樣/(F樣-F空)×

3S空

GC和HPLC法：

LOD=S/N=2或3

四、檢測(cè)限（limitofdetection,

LOD)

五、定量限（limitofquantitation,

LOQ)

是指樣品中被測(cè)物能被定量測(cè)定的最低量，其測(cè)定結(jié)果應(yīng)具一定準(zhǔn)確度和精密度。雜質(zhì)和降解產(chǎn)物進(jìn)行定量測(cè)定時(shí)，要求

LOQ.常用信噪比法確定定量限，一般以S/N=10時(shí)相應(yīng)的濃度進(jìn)行測(cè)定。

六、線性

是指在設(shè)定的范圍內(nèi)，測(cè)試結(jié)果與試樣中被測(cè)物濃度直接呈正比關(guān)系的程度。

UV法：首先制備一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)系列，濃度點(diǎn)n=5;A=0.3～.0.7

建立回歸方程C=aA+b;r＞0.9999。HPLC法：制備一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)系列，濃度點(diǎn)n=5～7;以C對(duì)h或A或與內(nèi)標(biāo)物的峰面積之比，建立回歸方程r＞0.9999。七、范圍

是指達(dá)到一定精密度、準(zhǔn)確度和線性、測(cè)試方法適用的高低限度或量的區(qū)間。

原料藥和制劑含量測(cè)定：范圍應(yīng)為測(cè)試濃度的80%-～

120%。

制劑含量均勻度檢查：范圍應(yīng)為測(cè)試濃度的70%-～

130%。

溶出度或釋放度中的溶出量測(cè)定：范圍應(yīng)為限度的±20%。八、耐用性耐用性系指在測(cè)定條件有小的變動(dòng)時(shí),測(cè)定結(jié)果不受影響的承受程度;體現(xiàn)測(cè)定條件的允許變動(dòng)范圍HPLC法典型因素有:流動(dòng)相的組成和pH值及流速,不同廠牌或不同批號(hào)的同類型色譜柱,柱溫等GC法典型因素有:不同廠牌或批號(hào)的色譜柱,固定相,不同類型的擔(dān)體,柱溫,進(jìn)樣口和檢測(cè)器溫度等

九、驗(yàn)證內(nèi)容的選擇

驗(yàn)證內(nèi)容選擇的一般原則:非定量分析方法

如鑒別,雜質(zhì)的限度檢查法:

驗(yàn)證“專屬性”,“檢測(cè)限”和“耐用性”定量分析方法

如原料藥或制劑的含量測(cè)定及含量均勻度,溶出度或釋放度的測(cè)定方法:

除“檢測(cè)限”和“定量限”外,其余均驗(yàn)證微量定量分析方法

如雜質(zhì)的定量測(cè)定方法:

除“檢測(cè)限”視情況而定外,其余均驗(yàn)證九、驗(yàn)證內(nèi)容的選擇

驗(yàn)證內(nèi)容分析項(xiàng)目鑒別試驗(yàn)元素或雜質(zhì)檢查含量測(cè)定及溶出量測(cè)定限度定量準(zhǔn)確度

++精密度重復(fù)性

++中間精密度

++專屬性++++檢測(cè)限++

定量限

+

線性

++范圍

++耐用性++++練習(xí)與思考[A型題]

1．藥品的鑒別是證明A．未知藥物的真?zhèn)蜝．已知藥物的真?zhèn)蜟．已知藥物的療效D．藥物的純度E．藥物的穩(wěn)定性2．相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差表示的應(yīng)是A．準(zhǔn)確度B．回收率C．精密度D．純凈度E．限度3．用移液管量取的25ml溶液，應(yīng)記成A．25mlB．25.0mlC．25.00mlD．25.000mlE．25±1ml4．以下三個(gè)數(shù)字0.5362、0.0014、0.25之和應(yīng)為A．0.79B．0.788C．0.787D．0.7876E．0.85．表示兩變量指標(biāo)A與C之間線性相關(guān)程度常用A．相關(guān)規(guī)律B．比例常數(shù)C．相關(guān)常數(shù)D．相關(guān)系數(shù)E．精密度6．減小偶然誤差的方法是A．做空白試驗(yàn)B．做對(duì)照實(shí)驗(yàn)C．做回收試驗(yàn)D．增加平行測(cè)定次數(shù)E．選用多種測(cè)定方法[B型題]

1～4A．1.23B．1.22C．2.54D．2.53E．2.511．1.22522．2.53513．2.53484．2.5068ACDE

5～8A．空白試驗(yàn)B．對(duì)照試驗(yàn)C．回收試驗(yàn)D．鑒別試驗(yàn)