免疫組化的基本原理操作流程及注意事項

免疫組織化學(xué)的概念底物抗原一抗酶免疫組化原理根本原理：抗原抗體反響即讓抗原與抗體特異性結(jié)合，再通過化學(xué)反響使標(biāo)記抗體的顯色劑(熒光素、酶、金屬離子、同位素)顯色來確定組織細(xì)胞內(nèi)抗原(多肽和蛋白質(zhì))對其進(jìn)行定位、定性及定量的研究.免疫組織化學(xué)技術(shù)的開展歷史1940年，Coons免疫熒光技術(shù)，冰凍切片1974年，Taylor石蠟組織免疫組化技術(shù)20世紀(jì)90年代，Avrameas建立酶標(biāo)技術(shù)，即辣根過氧化物酶標(biāo)記特點：特異性強

敏感性高

定位準(zhǔn)確、形態(tài)與功能相結(jié)合

多克隆抗體〔PcAb)：利用抗原免疫動物后所獲得的免疫血清中所提取的免疫球蛋白。1890年抗毒素的出現(xiàn)，標(biāo)志著第一代抗體－多克隆抗體的產(chǎn)生。它的特異性相對低于McAb,但親和力高。單克隆抗體〔McAb):通過雜交瘤技術(shù)制備出的只針對一種抗原決定簇的抗體。1975年抗綿羊紅細(xì)胞抗體的出現(xiàn)，標(biāo)志著第二代抗體－單克隆抗體的產(chǎn)生。它特異性及純度都比較高，但產(chǎn)量較低。免疫組化圖片其他方法圖片〔WB法〕常用的免疫組織化學(xué)技術(shù)方法免疫熒光技術(shù)〔免疫熒光法〕免疫酶技術(shù)〔酶標(biāo)抗體法、橋法、ABC法等〕免疫金屬技術(shù)〔免疫鐵蛋白法、免疫金染色法等〕免疫熒光法直接法：用熒光素〔FITC、TRITC等〕標(biāo)記的特異性抗體直接與相應(yīng)的抗原結(jié)合，檢測抗原。優(yōu)點：簡單，時間短，特異性強。

缺點：靈敏度低，所需抗體量大

應(yīng)用：腎穿熒光素抗體抗原間接法先用特異性的抗體1與標(biāo)本上的抗原反響，再用熒光素標(biāo)記的特異性抗體2〔間接熒光抗體〕與特異性抗體1相結(jié)合形成復(fù)合物。熒光素抗體1抗原抗體2補體法用特異性的抗體和補體的混合液與標(biāo)本上的抗原反響，補體就結(jié)合在抗原抗體復(fù)合物上，在用抗補體的熒光抗體與之結(jié)合。雙重免疫熒光法在同一個標(biāo)本上檢測兩種不同抗原。即用兩種不同抗體上分別標(biāo)記不同顏色的熒光素，反響后每一種顏色表示一種抗原。免疫酶法原理與免疫熒光法根本相同，免疫酶法是將酶以共價鍵的形式結(jié)合在抗體上，制成酶標(biāo)抗體，再借助酶對底物有特異行催化作用，生成有色的不溶性產(chǎn)物或者具有一定電子密度的顆粒，用于光鏡或者電鏡顯示。能用于免疫組化技術(shù)的酶主要有3種：辣根過氧化物酶〔HRP〕最常用、最實用堿性磷酸酶〔AKP〕能防止內(nèi)源性干擾葡萄糖氧化酶〔GOD〕其形成的色素容易擴散，且分子量大容易聚集免疫酶法分類直接法用酶標(biāo)記的特異性抗體直接與標(biāo)本中抗原反響結(jié)合，再與酶的底物作用產(chǎn)生有色產(chǎn)物，沉積在抗原抗體反響的部位，即可以對抗原進(jìn)行定性、定位甚至定量研究。加底物酶一抗抗原間接法先用特異性抗體〔一抗〕與標(biāo)本中相應(yīng)抗原反響，再用特異性酶標(biāo)抗體〔二抗〕與結(jié)合在抗原上的一抗反響，加底物顯色。注意動物種屬關(guān)系：比方標(biāo)本是人組織，一抗要用其它動物抗人的抗體如鼠抗人，二抗就要為兔抗鼠或者羊抗鼠。優(yōu)點：用一種酶標(biāo)抗體就可以與多種特異性一抗配合而檢查多種抗原，敏感性也大大加強。酶橋法用化學(xué)交聯(lián)法將酶與抗體分子結(jié)合的技術(shù)改為酶與酶抗體免疫反響而結(jié)合的方法。防止了由于化學(xué)反響過程中對酶活性和抗體效價的不良影響。PAP法將酶和抗酶抗體制成復(fù)合物〔PAP〕取代酶橋法中的抗酶抗體和結(jié)合的酶，縮短一步。APAAP法利用橋抗體將AKP連接在第一抗體的結(jié)合部位，而AKP和抗AKP被制成復(fù)合物〔APAAP〕。免疫金銀法〔IGSS〕免疫金法用膠體金標(biāo)記的間接抗體或A蛋白與特異性抗體結(jié)合，在光鏡下就可見紅色反響物出現(xiàn)。要求抗體濃度高，結(jié)果也不敏感。免疫金銀法在前法的根底上加含銀的顯影液，使金離子周圍形成很多沉淀，在光鏡下就可以看到棕黑色顆粒。從而提高敏感性，抗體濃度比前法也有一定下降。親和免疫組織化學(xué)技術(shù)〔affinityimmunohistochemistry〕生物素〔維生素H，Biotin〕首先是從雞蛋黃中別離出來的，廣泛存在于動、植物中。分子量小約為244k，與卵蛋白有極強的親和力，比抗原抗體的親和力高100萬倍！卵白素〔Avidin〕雞蛋白中的一種堿性蛋白，性質(zhì)穩(wěn)定，與其它物質(zhì)〔如熒光素和酶〕具有很高的親和力。當(dāng)與生物素結(jié)合后更加穩(wěn)定，在很大pH范圍類對許多蛋白酶都有耐受能力。過氧化物酶O〔peroxidase)可以使DAB顯色。Envision法原理：用多聚螯合酶〔AP或者HRP〕標(biāo)記二抗IgG，再與一抗結(jié)合。因為多聚螯合物上有大量的AP或者HRP分子，所以它比傳統(tǒng)方法更加敏感，放大倍數(shù)更大〔比ABC法、SP法高幾十倍〕。多聚物在人體內(nèi)不存在，因此減少了非特異性，降低背景。免疫組化操作步驟：〔以DAKO試劑盒為例〕免疫組化質(zhì)量控制實驗前：

包括標(biāo)本固定、脫水、切片、抗體選擇、人員素質(zhì)、實驗室條件等等。實驗中：

各個關(guān)鍵指標(biāo)的控制如抗原修復(fù)、一二抗孵育時間及溫度、抗體滴加、顯色控制、對照等等。實驗后：

專家對結(jié)果的評判，室間質(zhì)評，CAP教育等等。固定標(biāo)本的固定和組織處理固定液、固定時間：10%中性福爾馬林；固定時間6-48H，細(xì)針

穿刺標(biāo)本大于1H組織處理條件：浸蠟、烤片溫度不能高于65℃固定：固定是為了保持細(xì)胞、組織的原有形態(tài)和結(jié)構(gòu)。從免疫組化技術(shù)的角度，固定的作用不僅是使細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)凝固，而是要1>盡量減少或終止外源性酶和內(nèi)源性酶的反響2>防止細(xì)胞的自溶，以免使抗原擴散至組織間質(zhì)3>以保持組織的固有形態(tài)和結(jié)構(gòu)4>保持組織或細(xì)胞的抗原性，不但要使抗原不導(dǎo)致失活，而且不使抗原發(fā)生彌散的現(xiàn)象這樣才能在免疫組化染色時，不產(chǎn)生過深的背景，影響陽性結(jié)果的判斷。

實踐說明：固定時間過短、過長都會會導(dǎo)致陽性信號減弱或消失。標(biāo)本固定的時間：常用中性甲醛的滲透速度是2mm/h，隨著時間延長速度會逐漸減慢，增加濃度反而會降低滲透速度。一般手術(shù)標(biāo)本用中性甲醛固定的時間以3～24h為佳。小組織固定時間大于3h，大組織固定時間應(yīng)大于18h?？乖迯?fù)的重要性：

組織在用甲醛固定的過程中所形成的醛鍵可封閉抗原的決定族。甲醛在保存進(jìn)程中會形成羥甲基，也可封閉抗原決定族。在組織固定過程中，甲醛與蛋白質(zhì)發(fā)生交聯(lián)，形成醛交聯(lián)蛋白，這種化合物封閉了抗原，使之無法表達(dá)出來。所以在用石蠟切片做免疫組化時進(jìn)行抗原修復(fù)暴露抗原是十分有必要的?？乖迯?fù)的幾種方式：熱修復(fù)〔高壓法、微波法、水浴法〕酶消化〔胃蛋白酶、胰蛋白酶〕CD68、Vim、EGFR、CollagenIV等目前抗原修復(fù)最突出和最頑固的問題是修復(fù)不夠各種熱修復(fù)方法染色強度比較高壓法>水浴法>微波法抗原修復(fù)液常用的有枸櫞酸緩沖液〔pH6.0〕、EDTA緩沖液〔pH8.0～10.0〕高壓修復(fù)具有壓力穩(wěn)定、受熱均勻、陽性檢出率和陽性強度高、背景著色少等優(yōu)點.pH8.0—pH9.0的EDTA-Tris修復(fù)液修復(fù)4min胞核胞漿胞膜染色陽性均較強且不易脫片分析中每一種新抗體在應(yīng)用于臨床之前必須進(jìn)行

實驗驗證嚴(yán)格執(zhí)行實驗室的SOP日常質(zhì)控：抗原修復(fù)液的PH、抗原修復(fù)溫

度等實驗條件的質(zhì)控實驗對照：陽性、陰性組織對照及陰性試

劑對照抗體Received接收所有免疫組化試劑接收時均應(yīng)標(biāo)明接收日期，并在?免疫組化試劑登記表?上登記。Storage儲存所有試劑均應(yīng)在廠家指定或建議的溫度下保存，儲存試劑的冰箱應(yīng)每天檢查并記錄溫度。Usage使用所有試劑使用時均應(yīng)標(biāo)明開封日期，試劑應(yīng)保證在有效期內(nèi)使用，過期試劑應(yīng)丟棄不用，并在?免疫組化試劑登記表?的“過期棄用時間〞中注明。Lable試劑標(biāo)簽試劑和溶液的標(biāo)簽應(yīng)包括以下要素：內(nèi)容及質(zhì)量、濃度或效價；儲存要求；實驗室配制的日期；有效期。以上要素應(yīng)記錄在?試劑配制記錄表?中?？贵w存放新購進(jìn)的濃縮型干粉樣抗體需分成假設(shè)干份小劑量保存，防止反復(fù)凍融或開啟造成抗體效價降低或污染。分裝的抗體需標(biāo)明名稱、批號、分裝日期、有效期。小劑量的濃縮抗體那么按照說明書的存儲條件存放。緩沖液〔Buffer〕

每一批新購進(jìn)或新配制的緩沖液〔包括修復(fù)液〕都要使用PH儀認(rèn)真檢測其PH值，檢測結(jié)果要記錄在?緩沖液校準(zhǔn)表?中，緩沖液要定期檢查溶液的PH值〔至少每周一次〕。特別是在日常質(zhì)量控制中的某些抗體染色強度減弱原因不明，那么必須重新檢測緩沖液的PH值。PH值不正確的緩沖液應(yīng)棄去不用，重新配制合格的緩沖液，并在?緩沖液校準(zhǔn)表?相應(yīng)日期欄中注明其PH值及“棄用〞字樣。免疫組化抗體的實驗方法驗證

免疫組化實驗室將某種抗體用于病人的診斷之前，應(yīng)對該抗體進(jìn)行實驗驗證。對于一個新的抗體，應(yīng)該摸索其染色條件，保證有足夠的實驗批次來檢測其敏感性和特異性。驗證實驗1、通過比較實驗確定抗體滴度、抗原修復(fù)的方法2、孵育時間以及緩沖液的類型、PH值等最適宜的實驗條件，3、結(jié)果的可重復(fù)性4、同時通過屢次的重復(fù)性檢測來確定該試劑的敏感性和特異性。這對于文獻(xiàn)報道較少的抗體尤其重要。通過實驗確立最正確的抗體滴度、抗原修復(fù)條件以及其它輔助試劑的類型、濃度?？贵w的滴度參考廠家推薦的抗體滴度并在前后各加設(shè)定一個實驗滴度，例如廠家推薦滴度為1：200：那我們的驗證實驗滴度就設(shè)為A1：100、B1：200、C1：400通過驗證至少三個滴度梯度來觀察陽性細(xì)胞染色強度及非特異性染色，確后確定最正確滴度。IHCanalysisforPCBPR277X2101study送檢22個冰凍皮膚組織20個石蠟包埋組織合計21個病例，每個病例分別送檢untreated、treated合計42個蠟塊另送檢三個正常皮膚組織蠟塊，做陽性對照由上海諾華CNIBR提供。ReceiveantibodyandsamplesAnti-DSC1antibodyProducedinrabbitCat.No:HPA012891(Sigma)Lotnumber:A31773Anti-DSC2antibodyProducedinrabbitCat.No:HPA011911(Sigma)Lotnumber:R03475Anti-FLGantibodyProducedinrabbitCat.No:HPA030189(Sigma)Lotnumber:R28868Anti-TSLPantibodyProducedinrabbitCat.No:LS-B614(Lifespan)Lotnumber:LS13610RabbitisotypecontrolantibodyProducedinrabbitCat.No:AB-105-CLotnumber:UnknownAnti-Claudin-1antibodyProducedinrabbitCat.No:519000(LifeTechnologies)Lotnumber:985527AHumantissueblocks32021-08-282021-08-3122frozensamplesand20blocksamplesTitrevalidationFirstvalidationAntibodyConcentrationExperimenttitrePrimaryantibody,IgGDSC-10.575ug/ml1:2001:4001:8001:400FLG0.76ug/ml1:7501:15001:30001:1500DSC-20.3ug/ml1:501:1001:2001:100TSLP0.4ug/ml1:12501:25001:50001:2500Claudin-10.9ug/ml1:1501:3001:6001:300TitrevalidationSecondvalidationAntibodyConcentrationExperimenttitrePrimaryantibody,IgGDSC-10.575ug/ml1:8001:16001:32001:1600FLG0.76ug/ml1:30001:30001:30001:3000DSC-20.3ug/ml1:501:1001:2001:100TSLP0.4ug/ml1:5001:10001:20001:1000Claudin-10.9ug/ml1:6001:6001:6001:600ResultsoffirstvalidationAntibodyExperimenttitrePrimaryantibody,IgGDSC-11:200Positivestaininglocationisspecific,butnon-specificstainingcanbeobserved.Furtherdilutionissuggested1:400Positivestaininglocationisspecific,butnon-specificstainingcanbeobserved.Furtherdilutionissuggested1:800Positivestaininglocationisspecific,butnon-specificstainingcanbeobserved.Furtherdilutionissuggested1:400Nonon-specificstainingisobserved.FLG1:750Positivestaininglocationisspecific,butnon-specificstainingcanbeobserved.1:1500Positivestaininglocationisspecific,butnon-specificstainingcanbeobserved.1:3000Positivestaininglocationisspecific,andnonon-specificstainingisobserved.Cancontinuewiththestabilityvalidation1:1500Nonon-specificstainingisobserved.DSC-21:50Positivestaininglocationisnotspecific，otherblocksamplesissuggestedtobeusedforanothertry.1:100Positivestaininglocationisnotspecific，otherblocksamplesissuggestedtobeusedforanothertry.1:200Positivestaininglocationisnotspecific，otherblocksamplesissuggestedtobeusedforanothertry.1:100Nonon-specificstainingisobserved.TSLP1:1250Positivestainingisweek，titreissuggestedtobeadjusted.1:2500Positivestainingisweek，titreissuggestedtobeadjusted.1:5000Positivestainingisweek，titreissuggestedtobeadjusted.1:2500Nonon-specificstainingisobserved.Claudin-11:150Positivestaininglocationisspecific,butnon-specificstainingcanbeobserved.Furtherdilutionissuggested1:300Positivestaininglocationisspecific,butnon-specificstainingcanbeobserved.Furtherdilutionissuggested1:600Positivestaininglocationisspecific,andnonon-specificstainingisobserved.Cancontinuewiththestabilityvalidation1:300Nonon-specificstainingisobserved.StartwithclinicalsampleFrom2021-09-11,HEstaining,IHCstainingforDCS-1andFLGisperformed.Thestainedslidesisscheduledtobescorednextweek.那么選取十個不同個體的病例，〔特殊病種可酌情減少個體病例〕進(jìn)行檢測驗證。工作液：3-5個病例乳腺癌：ERPRHER240個病例免疫組化驗證實驗的過程必須詳實地記錄，操作步驟應(yīng)記錄在?免疫組化抗體驗證實驗記錄表?中。最后由病理主任或指定的病理醫(yī)生應(yīng)對驗證?免疫組化抗體滴度及驗證條件確定表?所有實驗室使用抗體驗證結(jié)束后統(tǒng)計其抗體廠家、克隆號、實驗滴度、抗原修復(fù)方法、實驗組織類型、陽性率等填寫在?免疫組化驗證實驗抗體一覽表?中。驗證報告批次驗證疫組化和特殊染色實驗室每購進(jìn)一批新抗體或特染試劑應(yīng)用適當(dāng)?shù)目刂品椒ㄅc舊抗體或試劑進(jìn)行實驗并比較實驗結(jié)果適當(dāng)調(diào)整抗體的稀釋度，以確保染色強度不發(fā)生太大改變。比較的結(jié)果及抗體稀釋度的改變需經(jīng)病理主任或指定的病理醫(yī)生觀察確認(rèn)和審批，并記錄在?批次抗體比較結(jié)果?中。新抗體才可以投入實驗室常規(guī)使用。對照的重要性陰性對照是用確定不含有待測抗原的組織作為陰性對照組織。陽性對照是對照組織中含有的抗原?？瞻讓φ胀ǔＳ肞BS代替一抗做對照。我們在日常工作中設(shè)置陽性對照最關(guān)鍵，通常是用闌尾加扁桃體和腸癌來做陽性對照組織，因為這三種組織中含有多種組織成分如上皮、淋巴組織、平滑肌、間質(zhì)、神經(jīng)、血管、間皮等，可以滿足大局部需要。另外一些可以自設(shè)對照組織。最好是做成“春卷〞或者組織芯片作為對照。扁桃體Tonsil,應(yīng)該包括上皮用于高分子Cytokaratin和cyclinD1,淋巴組織用于不同的白血球陽性對照結(jié)腸組織，作為cytokeratin20(結(jié)腸上皮),chromogranin(內(nèi)分泌細(xì)胞),calretinin(ganglioncells)陽性對照甲狀腺組織前列腺組織乳腺癌表達(dá)c-erbB2的組織胸腺瘤Thymoma,淋巴細(xì)胞豐富(B型胸腺瘤),含有豐富的不成熟T細(xì)胞,作為TdT,CD1,CD99的標(biāo)志.胸腺瘤比正常成人胸腺好是因為前者含有規(guī)那么的實體組織,而后者有許多散在脂肪(adipose)細(xì)胞因此胸腺實質(zhì)可能在某些切面看不到.腦組織,用腦切除或尸檢材料肺組織,肝,使用HCC手術(shù)標(biāo)本,選取肝硬化局部并且HBV陽性的標(biāo)本.子宮肌層myometrium,可對ER,PR提供非常好的對照,因為染色通常是中度到弱,因此這個組織可以作為一個好的免疫組化敏感性指標(biāo).子宮肌層用于代替正常乳腺作為激素受體的對照是因為后者散在的纖維組織和正常的腺泡會產(chǎn)生多變的染色結(jié)果.人胎盤絨毛組織人胚胎羊膜作為包裹“春卷〞組織(從胎盤外表剝離出)，可以額外提供CA-125的陽性對照。實驗室外部的質(zhì)量評估CAP-MK評估實驗室所用免疫組化試劑、方法的質(zhì)量、穩(wěn)定性及缺乏之處，通過與參評的外部實驗室的比對提供改進(jìn)工作的依據(jù)分析后免疫組化報告報告指南a、所有的免疫組化染色資料不管對診斷重要與否都必須報告b、報告還應(yīng)該包括標(biāo)本的類型及所用試劑，如抗體的克隆號等c、免疫組化報告要包括所有的染色結(jié)果，并解釋所有的染色信息，如染色強度、面積及亞細(xì)胞分布即染色定位?，F(xiàn)行染色強度的報告標(biāo)準(zhǔn)：強染色-4X或10X視野可見明顯的陽性染色；弱染色-只在40X視野可見染色信號；染色陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)，以0-4+計數(shù)：除ER、PR、HER2、P53、Ki67外其他抗體適用0：即陰性，無陽性染色細(xì)胞存在；1+：陽性染色細(xì)胞1-25%；2+：陽性染色細(xì)胞26-50%；3+：陽性染色細(xì)胞51-75%；4+：陽性染色細(xì)胞76-100%。HER2對乳腺癌患者適用：0：無陽性染色細(xì)胞，為陰性；1+：＜10%的浸潤性癌細(xì)胞出現(xiàn)弱的一致性的完整的細(xì)胞膜染色，或任何比例弱的、不完整的細(xì)胞膜染色，為陰性；2+：≥10%的浸潤性癌細(xì)胞不一致性完整的、弱的細(xì)胞膜染色，或≤30%的細(xì)胞強的、完整的細(xì)胞膜染色，為不確定；3+：＞30%的浸潤性癌細(xì)胞一致性的強的完整的細(xì)胞膜染色，為陽性。胃癌HER20：無陽性染色細(xì)胞，為陰性；1+：著色隱約可見；2+：弱-中等著色3+：強著色活檢標(biāo)本：≥

5個癌細(xì)胞手術(shù)標(biāo)本：≥

10%的癌細(xì)胞腫瘤分類：腸型約30%

混合型約15%

彌散型約5%

印戒細(xì)胞癌多為陰性腫瘤部位：賁門、胃食管交界癌約30%，全胃癌約15%P53、Ki67適用：0：即陰性，無陽性染色細(xì)胞存在；1+：陽性染色細(xì)胞＜5%；2+：陽性染色細(xì)胞5-9%；3+：陽性染色細(xì)胞10-49%；4+：陽性染色細(xì)胞≥50%。以上分級標(biāo)準(zhǔn)參考CAPImmunohistochemistySurveyMK中的計分系統(tǒng)P53Ki67免疫組化的臨床應(yīng)用a、疾病診斷與鑒別診斷

b、預(yù)后判斷

c、指導(dǎo)治療

應(yīng)用原那么

a：HE形態(tài)學(xué)為根底b：應(yīng)用抗體做輔助診斷時盡可能應(yīng)用抗體組合防止錯誤診斷c：注意人為的陷阱d：抗體組合要合理，在解釋結(jié)果時，要對每一種抗體的染色結(jié)果做出合理、科學(xué)的解釋e：免疫組化結(jié)果與HE形態(tài)學(xué)相矛盾時，應(yīng)結(jié)合形態(tài)學(xué)結(jié)果綜合判斷，不能只應(yīng)用免疫組化做診斷疾病的診斷與鑒別診斷確定細(xì)胞分化CK：大多數(shù)上皮分化的細(xì)胞、肌上皮分化的細(xì)胞、纖維母及肌纖維母細(xì)胞等Vimentin：大多數(shù)間葉分化的細(xì)胞、少局部上皮分化的細(xì)胞等LCA：淋巴造血細(xì)胞S100：神經(jīng)嵴分化的細(xì)胞、局部上皮細(xì)胞器官特異性抗體

TG：甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞TTF-1:甲狀腺、肺泡上皮PSA：前列腺Heppar-1:肝細(xì)胞GCDFP-15：乳腺SP-A&B：肺泡上皮病變組織細(xì)胞中某些成分的增加或缺失協(xié)助確定疾病的性質(zhì)肌上皮細(xì)胞：P63、MHC、SMA等基內(nèi)幕胞：34βE12、P63、CK5/6等細(xì)胞抗原表達(dá)的喪失：如T細(xì)胞P53、Ki67、Bcl-2等表達(dá)的異常，協(xié)助確

定某些病變的性質(zhì)FL3:Ki67RFH:Ki67FL1:Ki67Follicularlymphoma〔Bcl-2immunostaining〕未知原發(fā)部位轉(zhuǎn)移癌的診斷CK：有用的上皮性標(biāo)記

但可表達(dá)于以下腫瘤

肉瘤-SS、ES、MHF

生殖細(xì)胞腫瘤-胚胎性癌、絨毛膜癌

黑色素瘤-特別是轉(zhuǎn)移性

淋巴瘤CK7/CK20CK7+/CK20+CK7+/CK20-CK7-/CK20+C