矮牽牛組織培養(yǎng)開題報(bào)告

PAGE6PAGE1植物組織培養(yǎng)開題報(bào)告姓名：鄭欣所在院系：園林科學(xué)與工程系學(xué)科專業(yè)：園林技術(shù)導(dǎo)師姓名：田華英開題時(shí)間：2014年11月論文工作計(jì)劃簡述（開題報(bào)告內(nèi)容）1、本論文課題國內(nèi)外概況和文獻(xiàn)綜述：矮牽牛,又名碧冬茄、靈芝牡丹,屬茄科矮牽牛屬的多年生草本植物.矮牽牛花大而色彩豐富,是裝飾花壇、街道的理想花卉,廣泛地應(yīng)用于城市及園林綠化,是世界上最普及,銷售量最大的花卉之一[1].近年來矮牽牛在組織培養(yǎng)方面的研究發(fā)展很快,現(xiàn)將國內(nèi)外研究概況分述如下。1.外植體的選擇根據(jù)植物細(xì)胞全能性，理論上任何活組織在適宜的條件下都能發(fā)育成完整的植株。但是，在不同生長狀況下、發(fā)育階段、生長環(huán)境和不同部位的外植體存在一定的生理生化差異，因此選擇不同的外植體課影響組織培養(yǎng)的形態(tài)發(fā)生。分別以葉片、莖尖、莖段、種子、花蕾、花藥等作外植體獲得再生植株[3-8],但從分化結(jié)果來看,莖尖作外植體最好,幼芽分化所需時(shí)間短，分化出來的幼芽健壯；其次為莖段，葉片不但產(chǎn)生愈傷組織少，而且產(chǎn)生幼苗所需時(shí)間長。在莖尖和莖段試驗(yàn)中，前者無論在生長勢或分化率方面都優(yōu)于后者.由于莖尖數(shù)量有限，而葉片培養(yǎng)時(shí)間長，因此以莖段（包括莖尖）作為外植體是矮牽牛組培的最佳選擇。2.培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件的選擇在基本培養(yǎng)基的選擇上，主要用MS和1/2MS,其中MS主要用來培養(yǎng)愈傷組織及繼代增殖,1/2MS主要用于生根培養(yǎng).也有用NH培養(yǎng)基[6]和1/4MS培養(yǎng)基[9]對矮牽牛進(jìn)行組培的.針對不同的要求，可以改變基本培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成分及其含量。目前為止,大部分組織培養(yǎng)研究者都用6-BA作為主要激素[4,6,10-11],至于使用量,不同的品種、不同的材料和不同的研究者得到了不同的結(jié)論.大部分研究者用BA或6-BA或NAA組合來誘導(dǎo)愈傷組織的產(chǎn)生，而且取得了良好的效果。一般BA在1.0-3.2mg/L之間，NAA在0.1-0.2mg/L之間都能獲得大量的愈傷組織，最常用的是BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L。也有用6-BA與IBA組合取得較好效果的。培養(yǎng)條件的選擇上，目前普遍使用的條件為：PH值5.8，光照10-12h，溫度20-28度，光照強(qiáng)度1000-2000lx。組培苗移栽技術(shù)組培苗移栽一般經(jīng)過三個(gè)步驟：首先，當(dāng)根長至1cm以上，苗高約4-5cm時(shí)在自然條件下打開瓶口開始煉苗，煉苗時(shí)間約2-3d或7-8d，然后把苗取出，用溫水洗干凈根部粘附的培養(yǎng)基，移栽至消過毒的無水基質(zhì)中，適當(dāng)遮陰并控制環(huán)境溫度：10-20d后即可移栽大田或上盆。雖然矮牽牛組織培養(yǎng)已經(jīng)初步建立了快繁體系,為市場幼苗的需求做出了一定貢獻(xiàn),尚有許多問題值得繼續(xù)研究.如取材污染率高,組織培養(yǎng)適應(yīng)期長,工廠化生產(chǎn)成本高等問題制約了矮牽牛組培苗工業(yè)化生產(chǎn)。2、本論文課題的理論和實(shí)際應(yīng)用意義：基礎(chǔ)理論：1）植物細(xì)胞全能性

2）細(xì)胞分化、脫分化與再分化

3）器官發(fā)生和胚狀體發(fā)生實(shí)際意義：垂吊矮牽牛大面積栽培具有地被效果，景觀瑰麗、悅目，具有很好的市場價(jià)值。植物組織培養(yǎng)以其繁殖系數(shù)大、繁殖周期短、有利保持親本性狀、成本較低、可周年進(jìn)行生產(chǎn)等優(yōu)點(diǎn),為在較短時(shí)間內(nèi)大量生產(chǎn)花卉植物,滿足市場需求提供了可能.應(yīng)用組織培養(yǎng)技術(shù)對矮牽牛進(jìn)行快速無性繁殖,不僅可以保持其優(yōu)良性狀,使花色純化,在短期內(nèi)生產(chǎn)出大量整齊、均勻的健壯種苗,還可以進(jìn)行周年生產(chǎn),滿足市場需求.3、論文的基本內(nèi)容、結(jié)構(gòu)框架以及要突破的難點(diǎn)：一、儀器及用品：試劑瓶、電子天平、燒杯、量筒、移液管、玻璃棒、容量瓶、培養(yǎng)皿、PH計(jì)、記號筆、高壓滅菌鍋、超凈臺(tái)二、配置培養(yǎng)基（1）MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L（2）MS+6-BA1mg/L+NAA0.1mg/L（3）MS+6-BA1.5mg/L+NAA0.1mg/L（4）壯苗培養(yǎng)基：MS（5）生根培養(yǎng)基：MS+IBA0.5mg/L上述培養(yǎng)基均為100ML固體培養(yǎng)基，2.5%蔗糖，0.85%瓊脂，PH5.8三、材料與方法1.取材、消毒與接種取垂吊矮牽牛的幼嫩葉片及帶頂芽的莖段，用自來水沖洗干凈，再用無菌水沖洗2-3遍，在超凈工作臺(tái)上用75%酒精浸泡30S，再用10%次氯酸鈉溶液浸泡9min，用無菌水沖洗3次，用消毒濾紙吸干表面水分，將幼嫩葉片切成0.5*0.5左右大小，與帶頂芽的莖段一起分別接種于（1）-（3）號培養(yǎng)基中培養(yǎng)，光照10-12h，溫度20-28度，光照強(qiáng)度1400-1600lx快速繁殖將已分化出芽的愈傷組織分割切小，轉(zhuǎn)接入（1）號培養(yǎng)基中，可以獲得大量的叢生芽。3.生根與移栽將帶有大量叢生芽的愈傷組織轉(zhuǎn)入不含激素的MS培養(yǎng)基中，叢生芽不再增殖，而是起到壯苗的作用，以利生根。當(dāng)試管苗長到2cm左右時(shí)，切下轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中。將生根的苗打開封口膜在室內(nèi)煉苗1-2天，小心取出苗，轉(zhuǎn)泥炭土栽培。注意事項(xiàng)及難點(diǎn)：1）滅菌條件的度量,矮牽牛包被短毛，滅菌困難，易污染。2）培養(yǎng)條件的控制。3）干擾因素的排除。4、論文計(jì)劃及進(jìn)度：實(shí)驗(yàn)第一周，配置愈傷組織誘導(dǎo)所需的（1）-（3）三個(gè)梯度培養(yǎng)基。實(shí)驗(yàn)第二周，進(jìn)行接種。實(shí)驗(yàn)第三周，將愈傷組織轉(zhuǎn)接（1）號培養(yǎng)基，獲取叢生芽。并配置4號MS培養(yǎng)基。實(shí)驗(yàn)第四周，將帶有大量叢生芽的愈傷組織轉(zhuǎn)接入4號培養(yǎng)基，進(jìn)行壯苗培養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)第五周，將試管苗轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基，進(jìn)行生根培養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)第六周，進(jìn)行煉苗以及移栽。實(shí)驗(yàn)期間定期觀察培養(yǎng)基凝固情況、是否長菌、愈傷組織生長情況，及時(shí)處理褐化、玻璃化等外植體。并做好觀察記錄，需記錄的信息如下表日期培養(yǎng)箱條件觀察結(jié)果處理事項(xiàng)備注5、主要參考文獻(xiàn)：[1]瞿素萍.矮牽牛的組織培養(yǎng)研究.西南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2001,23(05):4472448[3]王賢榮.早櫻種系的分類及其觀賞價(jià)值.南京林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版,2000,24(06):44246[4]謝利鎖.野生早櫻嫩枝扦插繁殖技術(shù)研究.林業(yè)科技開發(fā),2002,16(02):20222[5]李繼華.扦插的原理和應(yīng)用.上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社,1987:31233[6]王振師,周麗華,曾雷.緋寒櫻的扦插繁殖.中南林學(xué)院學(xué),2005,25(03):82284[7]孟新法,周維燕.吲哚丁酸酸對蘋果矮化砧離體快繁生根的影響.北京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),1982,(02):25227[8]DumanoGH,AygunAA,GunesNT,etal.Effectoftiming,IBAandPutrescineonrootingandshootinginPyruselaeagrifoliapallsoftwoodcuttings.HortSic,1999,69(11):1237[9]林伯年,內(nèi)昭作(日),沈德緒.園藝植物繁育學(xué)[M].上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社,1994:177[10]SageeO.InvolvementofrootingfactorsandfreeIAAintherootabilityofcitrusspeciesstemcuttings.HortSci,1992,51(34):1872195