酶標分析儀檢定規(guī)程

1酶標分析儀檢定規(guī)程本規(guī)程適用于酶標分析儀的首次檢定、后續(xù)檢定和使用中檢驗。酶標分析儀型式評價和樣機試驗中有關計量性能試驗可參照執(zhí)行。酶標分析儀(以下簡稱儀器)是依據(jù)酶標記的免疫復合物與酶的相應底物能夠產(chǎn)生顯色反應，顯色程度與被檢測樣品中待測抗體(或抗原)的含量相關，根據(jù)顯色物吸光度值確定待測物質(zhì)含是?不同待測顯色物質(zhì)有其各自的特征吸收譜線，并遵守郎伯-比爾(Lambert-Bee人定律，對待測物質(zhì)進行定量分析的儀器。bert-Beer定律的表達式如下：式中：A——物質(zhì)的吸光度；T—物質(zhì)的透射比；a—物責的吸光系數(shù)；c——物質(zhì)的濃度。儀器主要甫光源系統(tǒng)、單色器系統(tǒng)、樣品室、檢測器等組成。儀器類別I——單波長/雙波長、多通道；Ⅱ——單波長、單通道；Ⅲ——波長庫續(xù)可調(diào)式、單通道/多通道。3計量性能要求儀器的計量性能要求如表1所示。儀器類別定性性/nm誤差吸光度重復性/%靈敏度通道差異I士0.005士3士1.5Ⅱ士1.5士0.03Ⅲ士0.034通用技術要求4.1外觀與初步檢查24.1.2儀器應平穩(wěn)置于水平無震動的工作臺上。各調(diào)節(jié)旋鈕、按鍵和開關均能正常工儀器在不接地的狀態(tài)下，試驗電壓500V時，電源進線與殼體之間的絕緣電阻不小儀器檢定時環(huán)境條件要求如表2所示。表2環(huán)境條件要求溫度濕度電壓(220士22)V光線振動噪聲磁場電場儀器檢定用設備如表3所示。表3儀器檢定用設備交流電壓表萬用表(4位半數(shù)字)2(45～65)Hz,0.5級3試驗電壓500V,1.0級453有證標準物質(zhì)證書中峰值波長標稱值為(405,450,492(或490),620(或630)±2)nm的標準干涉濾光片①,或在儀器使用波長范圍內(nèi)均勻選取的4塊標準濾光片。5.1.3.2光譜中性濾光片吸光度標稱值分別為0.2,0.5,1.0,1.5(不確定度≤0.01)2。5.1.3.3酶標分析儀用靈敏度溶液標準物質(zhì)(不確定度≤5%)。表4檢定項目檢定項目首次檢定后續(xù)檢定外觀檢查十十十十十十十 吸光度示值誤差十十十吸光度重復性+十十靈敏度十+通道差異十十十手2經(jīng)過維修后可能對儀器有較大影響時，其后續(xù)檢定按首次檢定進5.3檢定方法5.3.1外觀與初步檢查按4.1的要求進行。檢定前儀器應預熱20min。5.3.2示值穩(wěn)定性的檢定選用492nm波長或儀器特有的專一波長，將吸光度標稱值1.0的光譜中性濾光片，平放在微孔酶標板的空板架上，以空氣為參比，測量并記錄儀器的初始示值，5min后記錄儀器示值一次，10min后再次記錄儀器示值。求出后兩次吸光度示值的最大值，各類儀器按公式(1)計算示值穩(wěn)定性r:5.3.3波長示值誤差和波長重復性的檢定5.3.3.1對Ⅲ類儀器，用峰值波長為405,450,492,620nm的4片標準干涉濾光片或在儀器使用波長范圍內(nèi)均勻選取的4塊標準濾光片，分別置于儀器出光孔前或平放在微孔酶標板的某一位置(標準干涉濾光片平面需與入射光束垂直),自短波向長波逐點測出濾光片的波長-------吸光度示值(例如：測量峰值波長405nm標準干涉濾光片時，將波長調(diào)到低于標準波長20nm即385nm,然后，以1nm的改變幅度測量至高于標準4波長20nm即425nm),求出相應的峰值波長λ;。重復測量3次，取其平均值。測得波長平均值與標準波長之差為波長示值誤差，按公式(2)計算波長示值誤差△λ,其最大值與最小值之差為波長重復性δ。用同樣的方法檢定其他3點。儀器波長示值誤差和波長重復性結(jié)果的報告，應以每個波長(405,450,492,620nm)或儀器特有的專一波長下，通過測量、計算得到的波長示值誤差和波長重復性給出。干涉濾光片在各標稱波長下的透射比(干涉濾光片平面需與入射光束垂直),繪制波長-AA5.3.4.2對于吸收池固定的儀器，先用空吸收池調(diào)整儀器零點，再將光譜中性濾光片放入樣品室中，連續(xù)測量3次，記錄儀器示值，并計算平均值。5.3.4.3吸光度示值誤差△A按公式(5)計算：A,——吸光度標準值。5儀器吸光度示值誤差結(jié)果的報告，以每個波長(405,450,492,620nm)或儀器特有的專一波長下，通過測量、計算得到的吸光度示值誤差最大值給出。5.3.5吸光度重復性的檢定選用450nm波長或儀器特有的專一波長，將吸光度標稱值為0.5或1.0的光譜中性濾光片平放在微孔酶標板的空板架上，以空氣為參比，于固定的某一孔位重復測量6次，記錄儀器示值，并計算平均值，按公式(6)計算RSD值，以實驗結(jié)果的相對標準偏差值(RSD值)表示儀器的吸光度重復性：x——n次測量結(jié)果的吸光度平均值；5.3.6靈敏度的檢定選用4506波長或儀器特有的專一波長，使用量程適合并經(jīng)檢定合格的A級加樣器，在未包被搶原或抗體的微孔酶標板的某一凡中加入350μL濃度值為5mg/L的酶標分析儀用來觸度溶液標準物質(zhì)，測量吸光度值。5.3.7通道差異的檢定對I、山類儀器，選用450nn波長或儀器特有的專一波長，將服光度標稱值為1.0的光譜中性濾光片平放在微孔酶標板的空板架上，先后置于多全通道的相應位置(例如：對于8通道儀器可從A1～H1或A2～N2作為起始位置),以空氣為參比，測量并記錄每一通道的至少6次吸光度值(例如A通道可測量A1~46或A2～A7),多個通道的差異結(jié)果報告用全部測量數(shù)據(jù)的極差值表示，按公式(1)、計算通道差異δa:式中：Am——多個通道中測量結(jié)果的吸光度最大值；5.3.8絕緣電阻的檢定用500V兆歐表，測量儀器電源進線端與機殼或接地端子)間的絕緣電阻。5.4檢定結(jié)果的處理METR5.4.1以上檢定的各項數(shù)據(jù)均需記錄在檢定記錄紙上，其中有關項目的結(jié)果應填寫完整或注明在檢定證書或檢定結(jié)果通知書上。5.4.2按本規(guī)程檢定合格的儀器，發(fā)給檢定證書；不合格的儀器，發(fā)給檢定結(jié)果通知書，并注明不合格項目的數(shù)據(jù)。5.5檢定周期6附錄A酶標儀靈敏度溶液標準物質(zhì)制備方法酶標儀靈敏度溶液標準物質(zhì)采用重鉻酸鉀純物質(zhì)配制成質(zhì)量濃度為5mg/L的溶液標準物質(zhì)，以0.05mol/L硫酸為基體。A,10.05mol/L硫酸溶液的配制在500ml.燒杯中加入400ml.蒸餾水，用移液管吸取2.7ml.濃硫酸加入燒杯中攪拌均勻后放入1000ml.容量瓶中，用蒸餾水稀釋至刻度線，搖勻備用。A.2含鉻量5mg/L重鉻酸鉀溶液標準物質(zhì)的配制A.2.1在分析天平上準確稱取0.2829g重鉻酸鉀，置于100mL燒杯中，用0.05mof/1,硫酸溶液溶解后，移入500mL,容量瓶中，用少量0.05mol/L硫酸溶液洗燒杯若干次.洗液放入容量瓶中，用0.05mof/L.硫酸溶液稀釋至刻度線，搖勻備用，此溶液濃度為A.2.2用移液管吸取質(zhì)量濃度為200mg/L的重鉻酸鉀溶液2.5mL放入100ml.容量瓶中、用0.05mol/I.硫酸溶液稀釋至刻度線，搖勻，此溶液質(zhì)量濃度為5mg/L,即檢定酶標儀靈敏度的溶液標準物質(zhì)。7檢定記錄格式標準器證書號不確定度(或準確度