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分子生物學試題及答案

一、名詞解釋

1．cDNA與cccDNA：cDNA是由mRNA通過反轉錄酶合成的雙鏈DNA；cccDNA是游離于染色體之外的質粒雙鏈閉合環(huán)形DNA。

2．標準折疊單位：蛋白質二級結構單元α－螺旋與β－折疊通過各種連接多肽可以組成特殊幾何排列的結構塊，此種確定的折疊類型通常稱為超二級結構。幾乎所有的三級結構都可以用這些折疊類型，乃至他們的組合型來予以描述，因此又將其稱為標準折疊單位。3．CAP：環(huán)腺苷酸（cAMP）受體蛋白CRP（cAMPreceptorprotein），cAMP與CRP結合后所形成的復合物稱激活蛋白CAP（cAMPactivatedprotein）

4．回文序列：DNA片段上的一段所具有的反向互補序列，常是限制性酶切位點。

5．micRNA：互補干擾RNA或稱反義RNA，與mRNA序列互補，可抑制mRNA的翻譯。

6．核酶：具有催化活性的RNA，在RNA的剪接加工過程中起到自我催化的作用。

7．模體：蛋白質分子空間結構中存在著某些立體形狀和拓撲結構頗為類似的局部區(qū)域

8．信號肽：在蛋白質合成過程中N端有15~36個氨基酸殘基的肽段，引導蛋白質的跨膜。

9．弱化子：在操縱區(qū)與結構基因之間的一段可以終止轉錄作用的核苷酸序列。

10．魔斑：當細菌生長過程中，遇到氨基酸全面缺乏時，細菌將會產生一個應急反應，停止全部基因的表達。產生這一應急反應的信號是鳥苷四磷酸(ppGpp)和鳥苷五磷酸（pppGpp）。PpGpp與pppGpp的作用不只是一個或幾個操縱子，而是影響一大批，所以稱他們是超級調控子或稱為魔斑。

11．上游啟動子元件：是指對啟動子的活性起到一種調節(jié)作用的DNA序列，-10區(qū)的TATA、-35區(qū)的TGACA及增強子，弱化子等。

12．DNA探針：是帶有標記的一段已知序列DNA，用以檢測未知序列、篩選目的基因等方面廣泛應用。

13．SD序列：是核糖體與mRNA結合序列，對翻譯起到調控作用。14．單克隆抗體：只針對單一抗原決定簇起作用的抗體。

15．考斯質粒：是經過人工構建的一種外源DNA載體，保留噬菌體兩端的COS區(qū)，與質粒連接構成。

16．藍-白斑篩選：含LacZ基因（編碼β半乳糖苷酶）該酶能分解生色底物X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷)產生藍色，從而使菌株變藍。當外源DNA插入后，LacZ基因不能表達，菌株呈白色，以此來篩選重組細菌。稱之為藍-白斑篩選。

17．順式作用元件：在DNA中一段特殊的堿基序列，對基因的表達起到調控作用的基因元件。

18．Klenow酶：DNA聚合酶I大片段，只是從DNA聚合酶I全酶中去除了5’→3’外切酶活性

19．錨定PCR：用于擴增已知一端序列的目的DNA。在未知序列一端加上一段多聚dG的尾巴，然后分別用多聚dC和已知的序列作為引物進行PCR擴增。

20．融合蛋白：真核蛋白的基因與外源基因連接，同時表達翻譯出的原基因蛋白與外源蛋白結合在一起所組成的蛋白質。蛋白質的生物合成(一)名詞解釋1．翻譯(translation)：以mRNA為模板，氨酰-tRNA為原料直接供體，在多種蛋白質因子和酶的參與下，在核糖體上將mRNA分子上的核苷酸順序表達為有特定氨基酸順序的蛋白質的過程。2．密碼子(codon)：mRNA中堿基順序與蛋白質中氨基酸順序的對應關系是通過密碼實現(xiàn)的，mRNA中每三個相鄰的堿基決定一個氨基酸，這三個相鄰的堿基稱為一個密碼子。3．密碼的簡并性(degeneracy)：—個氨基酸具有兩個以上密碼子的現(xiàn)象。4．同義密碼子(synonymcodon)：為同—種氨基酸編碼的各個密碼子，稱為同義密碼了。5．變偶假說(wobblehypothesis)：指反密碼子的前兩個堿基(3’-端)按照標準與密碼子的前兩個堿基(5’-端)配對，而反密碼子中的第三個堿墓則有某種程度的變動，使其有可能與幾種不同的堿基配對。6．移碼突變(frame-shiftmutation)：在mRNA中，若插入或刪去一個核苷酸，就會使讀碼發(fā)錯誤，稱為移碼，由于移碼而造成的突變、稱移碼突變。7，同功受體(isoacceptor)：轉運同一種氨基酸的幾種tRNA稱為同功受體。8．反密碼子(anticodon)：指tRNA反密碼子環(huán)中的三個核苷酸的序列，在蛋白質合成過程中通過堿基配對，識別并結合到mRNA的特殊密碼上。9．多核糖體(polysome)：mRNA同時與若干個核糖體結合形成的念珠狀結構，稱為多核糖體。核酸的生物合成(一)名詞解釋1．中心法則(centraldogma)：生物體遺傳信息流動途徑。最初由Crick(1958)提出，經后人的不斷補充和修改，現(xiàn)包括反轉錄和RNA復制等內容。2．半保留復制(簡稱復制)（semiconservativereplication)：親代雙鏈DNA以每條鏈為模板，按堿基配對原則各合成一條互補鏈，這樣一條親代DNA雙螺旋，形成兩條完全相同的子代DNA螺旋，子代DNA分子中都有一條合成的“新”鏈和一條來自親代的舊鏈，稱為半保留復制。3．DNA聚合酶(DNApolymerase)：指以脫氧核苷三磷酸為底物，按5’→3’方向合成DNA的一類酶，反應條件：4種脫氧核苷三磷酸、Mg+、模板、引物。DNA聚合酶是多功能酶，除具有聚合作用外，還具有其它功能，不同DNA聚合酶所具有的功能不同。4．解旋酶(helicase)：是一類通過水解ATP提供能量，使DNA雙螺旋兩條鏈分開的酶，每解開一對堿基，水解2分子ATP。5．拓撲異構酶(topoisomerase)：是一類引起DNA拓撲異構反應的酶，分為兩類：類型I的酶能使DNA的一條鏈發(fā)生斷裂和再連接，反應無需供給能量，類型Ⅱ的酶能使DNA的兩條鏈同時發(fā)生斷裂和再連接，當它引入超螺旋時，需要由ATP供給能量。6．單鏈DNA結合蛋白(single-strand

bindingprotein,SSB)：是一類特異性和單鏈區(qū)DNA結合的蛋白質。它的功能在于穩(wěn)定DNA解開的單鏈，阻止復性和保護單鏈部分不被核酸酶降解。7．DNA連接酶(DNAligase)：是專門催化雙鏈DNA中缺口共價連接的酶，不能催化兩條游離的單鏈DNA鏈間形成磷酸二酯鍵。反應需要能量。8．引物酶及引發(fā)體(primase＆primosome)：以DNA為模板，以核糖核苷酸為底物，在DNA合成中，催化形成RNA引物的酶稱為引物酶及引物體。大腸桿菌的引物酶單獨沒有活性，只有與其它蛋白質結合在一起，形成一個復合體，即引發(fā)體才有生物活性。9．復制叉(replicationfork)：復制中的DNA分子，末復制的部分是親代雙螺旋，而復制好的部分是分開的，由兩個子代雙螺旋組成，復制正在進行的部分呈丫狀叫做復制叉。10．復制眼θ結構：在一段DNA上，正在復制的部分形成眼狀結構。復制眼在環(huán)狀DNA上形成的結構與字母θ相象，所以叫θ結構。11．前導鏈(1eadingstrand)：在DNA復制過程中，以親代鏈(3’→5’為模板時，子代鏈的合成(5’→3’)是連續(xù)的．這條能連續(xù)合成的鏈稱前導鏈。12．岡崎片段(Okazakifragment)、后隨鏈(1aggingstrand)：在DNA復制過程中，以親代鏈(5’→3’)為模板時，子代鏈的合成不能以3’→5’方向進行，而是按5’→3’方向合成出許多小片段，因為是岡崎等人研究發(fā)現(xiàn)，因此稱岡崎片段。由許多岡崎片段連接而成的子代鏈稱為后隨鏈。13．半不連續(xù)復制(Semidiscontinuousreplication)：在DNA復制過程中，一條鏈的合成是連續(xù)的，另一條鏈的合成是不連續(xù)的，所以叫做半不連續(xù)復制。14．逆轉錄(reversetranscription)：以RNA為模板合成DNA的過程。15．逆轉錄酶(reversetranseriptase)：催化以RNA為模板合成DNA的逆轉錄過程的酶。Temin(1960)首次從勞氏肉瘤病毒中發(fā)現(xiàn)。逆轉錄酶具有多種酶活性：依賴RNA的DNA聚合酶活性；依賴DNA的DNA聚合酶活性，RNA水解酶活性，DNA合成方向5’→3’。合成時需要引物與模板。16．突變(mutation)：基因組DNA順序上的任何一種改變都叫做突變。分點突變和結構畸變。17．點突變(Pointmutation)：是指一個或幾個堿基對被置換(replacement)，這種置換又分兩種形式：轉換(transition)一--指用一個嘌呤堿置換另一個嘌呤堿，一個嘧啶堿置換另一個嘧啶堿；顛換(transversion)一--指用嘌呤堿置換嘧啶堿或用嘧啶堿置換嘌呤堿。18．結構畸變：基因中的缺口、或插入(insertion)或缺失(deletion)某些堿基造成移碼突變使DNA的模板鏈失去功能。19．誘變劑(mutagen)：使基因組發(fā)生突變的物理、化學、生物因素叫誘變劑。20．修復(repair)：除去DNA上的損傷，恢復DNA的正常結構和功能是生物機體的一種保護功能。21．光裂合酶修復(又稱光復活)(photoreactivation)：可見光將光裂合酶激活，它分解DNA上由紫外線照射而形成的嘧啶二聚體，使它們恢復成兩個單獨的嘧啶堿。22．切除修復(excisionrepair)：在一系列酶的作用下，將DNA分子中受損傷部分切除，以互補鏈為模板，合成出空缺的部分，使DNA恢復正常結構的過程。23．重組修復(recombinationrepair)：DNA在有損傷的情況下也可以復制，復制時子代鏈躍過損傷部位并留下缺口，通過分子間重組，從完整的另一條母鏈上將相應的核苷酸序列片段移至子鏈缺口處，然后用再合成的多核苷酸的序列補上母鏈的空缺，此過程稱重組修復。24．誘導修復和應急反應(inductionrepairandSOSresponse)(SOS修復)：由于DNA受到損傷或復制系統(tǒng)受到抑制所誘導引起的一系列復雜的應急效應，稱為應急反應。SOS反應主要包括兩個方面：DNA損傷修復(SOS修復或稱誘導修復)和誘變效應。SOS修復是一種易出差錯的修復過程，雖能修復DNA的損傷而避免死亡。但卻帶來高的變異率。25．DNA重組(recombination)：DNA重組是指在真核生物減數(shù)分裂過程中，細菌細胞的轉化中、病毒轉導中等發(fā)生的DNA片段的交換或插入。26．基因工程(又稱基因重組技術)(gene/geneticengineering)：是將外源基因經過剪切加工，再插入到一個具有自我復制能力的載體DNA中，將新組合的DNA轉移到一個寄主細胞中，外源基因就可以隨著寄主細胞的分裂進行繁殖，寄主細胞也借此獲得外源基因所攜帶的新特性。27．轉錄(transcription)：由依賴于DNA的RNA聚合酶催化，以DNA的一條鏈的一定區(qū)段為模板，按照堿基配對原則，合成一條與DNA鏈互補的RNA鏈的過程。28．模板鏈(templatestrand)[又稱負(-)鏈，反意義鏈(antisensestrand)]：轉錄過程中用作模板的這條DNA鏈，稱模板鏈。29．非模板鏈(nontemplatestrand)[又稱正(+)鏈，編碼鏈(codingstrand)，有意義鏈(sensestrand)]：與模板鏈互補的那條DNA鏈，稱非模板鏈。30．不對稱轉錄(asymmetrictranscription)：因為RNA的轉錄只在DNA的任一條鏈上進行，所以把RNA的合成叫做不對稱轉錄。31．啟動子(promoter)：DNA鏈上能指示RNA轉錄起始的DNA序列稱啟動子。32．轉錄單位(transcriptionunit)：RNA的轉錄只在DNA的一個片段上進行，這段DNA序列叫轉錄單位。33．內含子(intron)：真核生物基因中，不為蛋白質編碼的、在mRNA加工過程中消失的DNA序列，稱內含子。34．外顯子(exon)：真核生物基因中，在mRNA上出現(xiàn)并代表蛋白質的DNA序列，叫外顯子。35．轉錄加工(post-transcriptionalprocessing)：細菌中很多RNA分子和幾乎全部真核生物的RNA在合成后都需要不同程度的加工，才能形成成熟的RNA分子，這個過程叫轉錄后加工。36．核內不均一RNA(hnRNA)：是真核生物細胞核內的mRNA前體分子，分子量較大，并且不均一，含有許多內含子。37．RNA的復制(RNAreplication)：某些病毒RNA既可以做為模板合成病毒蛋白質又可在RNA復制酶(RNAreplicase)的催化下，以自身RNA為模板，合成互補的RNA新鏈，合成方向5'→3’，這一過程叫RNA復制。

二、填空

1．DNA的物理圖譜是DNA分子的（限制性內切酶酶解）片段的排列順序。

2．RNA酶的剪切分為（自體催化）、（異體催化）兩種類型。

3．原核生物中有三種起始因子分別是（IF-1）、（IF-2）和（IF-3）。4．蛋白質的跨膜需要（信號肽）的引導，蛋白伴侶的作用是（輔助肽鏈折疊成天然構象的蛋白質）。

5．啟動子中的元件通常可以分為兩種：（核心啟動子元件）和（上游啟動子元件）。

6．分子生物學的研究內容主要包含（結構分子生物學）、（基因表達與調控）、（DNA重組技術）三部

7．證明DNA是遺傳物質的兩個關鍵性實驗是（肺炎球菌感染小鼠）、（T2噬菌體感染大腸桿菌）這兩個實驗中主要的論點證據(jù)是：（生物體吸收的外源DNA改變了其遺傳潛能）。

8．hnRNA與mRNA之間的差別主要有兩點：（hnRNA在轉變?yōu)閙RNA的過程中經過剪接，）、

（mRNA的5′末端被加上一個m7pGppp帽子，在mRNA3′末端多了一個多聚腺苷酸(polyA)尾巴）。

9．蛋白質多亞基形式的優(yōu)點是（亞基對DNA的利用來說是一種經濟的方法）、（可以減少蛋白質合成過程中隨機的錯誤對蛋白質活性的影響）、（活性能夠非常有效和迅速地被打開和被關閉）。

10．蛋白質折疊機制首先成核理論的主要內容包括（成核）、（結構充實）、（最后重排）。

11．半乳糖對細菌有雙重作用；一方面（可以作為碳源供細胞生長）；另一方面（它又是細胞壁的成分）。所以需要一個不依賴于cAMP—CRP的啟動子S2進行本底水平的永久型合成；同時需要一個依賴于cAMP—CRP的啟動子S1對高水平合成進行調節(jié)。有G時轉錄從（S2）開始，無G時轉錄從（S1）開始12．DNA重組技術也稱為（基因克隆）或（分子克?。Ｗ罱K目的是（把一個生物體中的遺傳信息DNA轉入另一個生物體）。典型的DNA重組實驗通常包含以下幾個步驟：

①提取供體生物的目的基因（或稱外源基因），酶接連接到另一DNA分子上（克隆載體），形成一個新的重組DNA分子。

②將這個重組DNA分子轉入受體細胞并在受體細胞中復制保存，這個過程稱為轉化。

③對那些吸收了重組DNA的受體細胞進行篩選和鑒定。

④對含有重組DNA的細胞進行大量培養(yǎng)，檢測外援基因是否表達。13、質粒的復制類型有兩種：受到宿主細胞蛋白質合成的嚴格控制的稱為（嚴緊型質粒），不受宿主細胞蛋白質合成的嚴格控制稱為（松弛型質粒）。

14．PCR的反應體系要具有以下條件：

a、被分離的目的基因兩條鏈各一端序列相互補的DNA引物（約20個堿基左右）。

b、具有熱穩(wěn)定性的酶如：TagDNA聚合酶。

c、dNTP

d、作為模板的目的DNA序列

15．PCR的基本反應過程包括：（變性）、（退火）、（延伸）三個階段。

16、轉基因動物的基本過程通常包括：

①將克隆的外源基因導入到一個受精卵或胚胎干細胞的細胞核中；②接種后的受精卵或胚胎干細胞移植到雌性的子宮；

③完成胚胎發(fā)育，生長為后代并帶有外源基因；

④利用這些能產生外源蛋白的動物作為種畜，培育新的純合系。

17．雜交瘤細胞系的產生是由（脾B）細胞與（骨髓瘤）細胞雜交產生的，由于（脾細胞）可以利用次黃嘌呤，（骨細胞）提供細胞分裂功能，所以能在HAT培養(yǎng)基中生長。

18．隨著研究的深入第一代抗體稱為（多克隆抗體）、第二代（單克隆抗體）、第三代（基因工程抗體）。19．目前對昆蟲病毒的基因工程改造主要集中于桿狀病毒，表現(xiàn)在引入（外源毒蛋白基因）；（擾亂昆蟲正常生活周期的基因）；（對病毒基因進行修飾）。

20．哺乳類RNA聚合酶Ⅱ啟動子中常見的元件TATA、GC、CAAT所對應的反式作用蛋白因子分別是（TFIID）、（SP-1）和（CTF/NF1）。21．RNA聚合酶Ⅱ的基本轉錄因子有、TFⅡ-A、TFⅡ-B、TFII-D、TFⅡ-E他們的結合順序是：（D、A、B、E）。其中TFII-D的功能是（與TATA盒結合）。

22．與DNA結合的轉錄因子大多以二聚體形式起作用，轉錄因子與DNA結合的功能域常見有以下幾種（螺旋-轉角-螺旋）、（鋅指模體）、（堿性-亮氨酸拉鏈模體）。

23．限制性內切酶的切割方式有三種類型分別是（在對稱軸5'側切割產生5'粘端）、（在對稱軸3'側切割產生3'粘端）（在對稱軸處切割產生平段）。

24．質粒DNA具有三種不同的構型分別是：（SC構型）、（oc構型）、（L構型）。在電泳中最前面的是（SC構型）。

25．外源基因表達系統(tǒng)，主要有（大腸桿菌）、（酵母）、（昆蟲）和（哺乳類細胞表）。

26．轉基因動物常用的方法有：（逆轉錄病毒感染法）、（DNA顯微注射法）、（胚胎干細胞法）。1．蛋白質的生物合成是以__mRNA為模板，以__

氨酰-tRNA__為原料直接供體，以__核糖體__為合成楊所。2．生物界共有_64__個密碼子，其中__61_個為氨基酸編碼，起始密碼子為_AUG_；終止密碼子為_UAA_、UAG_、_UGA__。3．原核生物的起始tRNA以_tRNAf_表示，真核生物的起始tRNA以tRNAi_表示，延伸中的甲硫氨酰tRNA以_tRNAm__表示。4．植物細胞中蛋白質生物合成可在____核糖體___、_線粒體____和__葉綠體___三種細胞器內進行。5．延長因子T由Tu和Ts兩個亞基組成，Tu為對熱___不穩(wěn)定___蛋白質，Ts為對熱__穩(wěn)定_蛋白質。6．原核生物中的釋放因子有三種，其中RF-1識別終止密碼子_UAA_、_UAG__；RF-2識別_UAA_、_UGA_；真核中的釋放因子只有_RF_一種。7．氨酰-tRNA合成酶對___氨基酸__和相應的__tRNA__有高度的選擇性。8．原核細胞的起始氨基酸是__甲酰甲硫氨酸___，起始氨酰-tRNA是___甲酰甲硫氨酰-tRNA___。9．原核細胞核糖體的__小___亞基上的___16SrRNA___協(xié)助辨認起始密碼子。l0．每形成一個肽鍵要消耗__4_個高能磷酸鍵，但在合成起始時還需多消耗__1___個高能磷酸鍵。11．肽基轉移酶在蛋白質生物合成中的作用是催化___肽鍵__形成和_肽酰-tRNA___的水解。12．肽鏈合成終止時，__終止因子__進人“A”位，識別出_終止密碼子_，同時終止因子使_肽基轉移酶__的催化作用轉變?yōu)開水解作用。13．原核生物的核糖體由__30S___小亞基和_50S__大亞基組成，真核生物核糖體由_40S__小亞基和__60S___大亞基組成。14.

蛋白質中可進行磷酸化修飾的氨基酸殘基主要為__Ser___、__Thr___、___Tyr____。(三)填空題1．Meselson-Stahl的DNA半保留復制證實試驗中，區(qū)別不同DNA用__同位素示蹤__方法。分離不同DNA用_超速離心__方法，測定DNA含量用__紫外分光光度_方法，2．DNA聚合酶I(E．coli)的生物功能有_聚合作用___、__5’→3’外切酶作用__和_3’→5’外切酶__作用。用蛋白水解酶作用DNA聚合酶I，可將其分為大、小兩個片段，其中__大___片段叫Klenow片段，具有__5’→3’聚合酶作用__和__3’→5’外切酶____作用，另外一個片段具有__5’→3’外切酶__活性。3．在E．coli中，使DNA鏈延長的主要聚合酶是_DNA聚合酶Ⅲ__，它由_7__亞基組成。DNA聚合酶Ⅱ主要負責DNA的_修復_作用。4．真核生物DNA聚合酶有__DNA聚合酶α_____，___DNA聚合酶β_，__DNA聚合酶γ____，__DNA聚合酶δ___。其中在DNA復制中起主要作用的是___DNA聚合酶α____和___DNA聚合酶σ__。5．解旋酶的作用是___使DNA雙螺旋打開____，反應需要ATP_提供能量，結合在后隨鏈模板上的解旋酶，移動方向__5’→3’____，結合在前導鏈的rep蛋白，移動方向___3’→5’____。6．在DNA復制過程中，改變DNA螺旋程度的酶叫__拓撲異構酶___。7．SSB的中文名稱___單鏈DNA結合蛋白____，功能特點是___使單鏈保持伸長狀態(tài)____。8．DNA連接酶只能催化_雙__鏈DNA中的缺口形成3’,5’-磷酸二酯鍵，不能催化兩條游離的單鏈間形成3’,5’-磷酸二酯鍵，真核生物DNA連接酶以_ATP_作為能源，大腸桿菌則以NAD+作為能源，DNA連接酶在DNA_復制_、___修復_、_重組__中起作用。9．DNA生物合成的起始，需要一段___RNA____為引物，引物由__引物_____酶催化完成，該酶需與—些特殊___蛋白質____結合形成___引物體____復合物才有活性。10．DNA生物合成的方向是5’→3’，岡奇片段合成方向是5’→3’。11．由逆轉錄酶所催化的核酸合成是以_RNA__為模板，以__三磷酸脫氧核苷酸(dNTP)__為底物，產物是__與RNA互補的DNA鏈__。12．DNA突變主要分為__點突變_____和__結構畸變_____兩大類。13．誘變劑大致分為__物理誘變劑_____、_化學誘變劑______、__生物誘變劑_____三種類型。14．RNA生物合成中，RNA聚合酶的活性需要__DNA_____模板，原料是__ATP__、__GTP__、__UTP_、___CTP。15．大腸桿菌RNA聚合酶為多亞基酶，亞基組成α2ββ’δ_，稱為__全__酶，其中_α2ββ’__亞基組成稱為核心酶，功能__合成RNA鏈__；σ亞基的功能__σ保證RNA聚合酶對啟動子的特異識別。16．用于RNA生物合成的DNA模板鏈稱為_反意義鏈__或__負鏈___。17．RNA聚合酶沿DNA模板3’→5’方向移動，RNA合成方向5’→3’___。18．真核生物RNA聚合酶共三種RNA聚合酶I、RNA聚合酶Ⅱ、RNA聚合酶Ⅲ_，它們分別催化_rRNA__、mRNA__和tRNA5SrRNA__的生物合成。19．某DNA雙螺旋中，單鏈5’…ATCGCTCGA…3’為有意義鏈，若轉錄mRNA，其中堿其排列順序為5’…__AUCGCUCGA___…3’。20；能形成DNA--RNA雜交分子的生物合成過程有__轉錄_____、___逆轉錄____。形成的分子基礎是__堿基互補配對_____。21．DNA復制中，___前導__鏈的合成是___連續(xù)__的，合成的方向和復制叉移動方向相同；_后隨_鏈的合成是___不連續(xù)____的，合成的方向與復制叉方向相反。22．一條單鏈DNA(+)的堿基組成A2l％、G29％，復制后，RNA聚合酶催化轉錄的產物的堿基組成是_A21％、G29％、U21％、C29％_。23．RNA聚合酶中能識別DNA模板上特定起始信號序列的亞基是__因子__，該序列部位稱__啟動子部位_。24．在細菌細胞中，獨立于染色體之外的遺傳因子叫質粒。它是一種_環(huán)_狀雙鏈DNA，在基因工程中，它做為_基因載體_。25．hnRNA加工過程中，在mRNA上出現(xiàn)并代表蛋白質的DNA序列叫外顯子。不在mR—NA上出現(xiàn)，不代表蛋白質的DNA序列叫內含子_。(四)選擇題1．蛋白質生物合成的方向是(④)。①從C→N端②定點雙向進行③從N端、C端同時進行④從N→C端2．不能合成蛋白質的細胞器是(③)。①線粒體②葉綠體③高爾基體④核糖體3．真核生物的延伸因子是(④)。①EF—Tu②EF一2③EF--G④EF一14．真核生物的釋放因子是(①)。①RF②RF一1③RF一2④RF一35．能與tRNA反密碼子中的I堿基配對的是(④)。①A、G②C、U③U④U、C、A6．蛋白質合成所需能量來自(③)。①ATP②GTP③ATP、GTP④GTP7．tRNA的作用是(②)。①將一個氨基酸連接到另一個氨基酸上②把氨基酸帶到mRNA位置上③將mRNA接到核糖體上④增加氨基酸的有效濃度8．關于核糖體的移位，敘述正確的是(③)。①空載tRNA的脫落發(fā)生在“A”位上②核糖體沿mRNA的3’→5’方向相對移動③核糖體沿mRNA的5’→3’方向相對移動④核糖體在mRNA上一次移動的距離相當于二個核苷酸的長度9．在蛋白質合成中，下列哪一步不需要消耗高能磷酸鍵(①)。①肽基轉移酶形成肽鍵②氨酰一tRNA與核糖體的“A，’位點結合③核糖體沿mRNA移動④fMet—tRNAf與mRNA的起始密碼子結合以及與大、小亞基的結合10．在真核細胞中肽鏈合成的終止原因是(④)。①已達到mRNA分子的盡頭②具有特異的tRNA識別終止密碼子③終止密碼子本身具有酯酶作用，可水解肽酰與tRNA之是的酯鍵④終止密碼子被終止因子(RF)所識別11．蛋白質生物合成中的終止密碼是(①④⑤)。①UAA②UAU③UAC④UAG⑤UGA12．根據(jù)擺動假說，當tRNA反密碼子第1位堿基是I時，能夠識別哪幾種密碼子(①②⑤)①A②C③G④T⑤U13．下列哪些因子是真核生物蛋白質合成的起始因子(③④⑤)。①IF1②IF2③eIF2④eIF4⑤elF4A蛋白質生物合成具有下列哪些特征(①②③⑤)。①氨基酸必須活化②需要消耗能量③每延長一個氨基酸必須經過進位、轉肽、移位、稅落四個步驟④合成肽鏈由C端向N端不斷延長⑤新生肽鏈需加工才能成為活性蛋白質15．下列哪些內容屬于蛋白質合成后的加工、修飾(②③④⑤)。①切除內含子，連接外顯子②切除信號肽③切除N-端Met④形成二硫鍵⑤氨的側鏈修飾16．蛋白質生物合成過程中，下列哪些步驟需要消耗能量(①②③⑤)。①氨基酸分子的活化②70S起始復合物的形成③氨酰tRNA進入核糖體A位④肽鍵形成⑤核糖體移位17．原核生物的肽鏈延伸過程有下列哪些物質參與(①②③⑤)。①肽基轉移酶②鳥苷三磷酸③mRNA④甲酰甲硫氨酰-tRNA⑤EF-Tu、EF-Ts、EF-G18.Shine-Dalgarno順序(SD-順序)是指:(①)①在mRNA分子的起始碼上游8-13個核苷酸處的順序②在DNA分子上轉錄起始點前8-13個核苷酸處的順序③16srRNA3'端富含嘧啶的互補順序④啟動基因的順序特征⑤以上都正確19.

在研究蛋白合成中,可利用嘌呤霉素,這是因為它:(②)①使大小亞基解聚②使肽鏈提前釋放③抑制氨基酰-tRNA合成酶活性④防止多核糖體形成⑤以上都正確20.

氨基酸活化酶：(④)①活化氨基酸的氨基②利用GTP作為活化氨基酸的能量來源③催化在tRNA的5’磷酸與相應氨基酸間形成酯鍵④每一種酶特異地作用于一種氨基酸及相應的tRNA⑤以上都不正確(四)選擇題1．DNA以半保留方式復制，如果一個具有放射性標記的雙鏈DNA分子，在無放射性標記的環(huán)境中經過兩輪復制。其產物分子的放射性情況如何(①)。①其中一半沒有放射性②都有放射性③半數(shù)分子的兩條鏈都有放射性④都不含放射性2．關于DNA指導下的RNA合成的下列論述除了哪一項都是正確的(②)。①只有存在DNA時，RNA聚合酶才能催化磷酸二酯鍵的形成。②在合成過程中，RNA聚合酶需要一個引物。③RNA鏈的延長方向是5’→3’。④在多數(shù)情況下，只有一條DNA鏈作為模板。3．下列關于DNA和RNA聚合酶的論述哪一種是正確的(④):①RNA聚合酶用核苷二磷酸而不是核苷三磷酸來合成多核苷酸鏈②RNA聚合酶需要引物，并在生長的多核苷酸鏈的5’端加上核苷酸③DNA聚合酶能在核苷酸鏈的兩端加上核苷酸④所有RNA和DNA聚合酶只能在生長的多核苷酸鏈的3’端加上核苷酸。4．修補胸腺嘧啶有數(shù)種方法，其中之一是用DNA連接酶、DNA聚合酶等催化進行，試問這些酶按下列哪種順序發(fā)揮作用(③)：①DNA連接酶→DNA聚合酶→核酸內切酶②DNA聚合酶→核酸內切酶→DNA連接酶③核酸內切酶→DNA聚合酶→DNA連接酶④核酸內切酶→DNA連接酶→DNA聚合酶5．DNA聚合酶在分類時屬于六大酶類中的哪一種(①)。①合成酶類②轉移酶類③裂解酶類④氧化還原酶類6．催化真核生物mRNA生物合成的RNA聚合酶Ⅱ對α--鵝膏蕈堿(③)。①不敏感②敏感③高度敏感④低度敏感7．DNA復制中RNA引物的主要作用是(①)。①引導合成岡奇片段②作為合成岡奇片段的模板③為DNA合成原料dNTP提供附著點④激活DNA聚合酶8．下列關于單鏈結合蛋白的描述哪個是錯誤的(④)。①與單鏈DNA結合防止堿基重新配對②保護復制中單鏈DNA不被核酸酶降解③與單鏈DNA結合，降低雙鏈DNATm值④以上都不對9．紫外線對DNA的損傷主要是(②)。①引起堿基置換②形成嘧啶二聚體③導致堿基缺失④發(fā)生堿基插入l0．有關轉錄的錯誤描述是(③)。①只有在DNA存在時，RNA聚合酶方可催化RNA②需要NTP做原料③RNA鏈的延伸方向是3’→5’④RNA的堿基需要與DNA互補11．關于逆轉錄作用的錯誤敘述是(③)。①以RNA為模板合成DNA②需要一個具有3’-OH末端的引物③以5’→3’方向合成，也能3’→5’方向合成④以dNTP為底物12．體內參與甲基化反應的直接甲基供體是(②)。①Met②S—腺苷甲硫氨酸③甲酰甲硫氨酸④Met-tRNA13．關于大腸桿菌DNA聚合酶I的下列論述哪些是正確的(①②③)。①它是一個金屬酶②它能從3’-OH端逐步水解單股DNA鏈③它在雙螺旋區(qū)有5’→3’核酸酶活性④它需要DNA模板上的游離5’-OH；14．試將下列DNA復制的有關步驟按正確的順序排列(②→①→③→⑤→④)。①DNA指導的RNA聚合酶合成RNA引物②解旋蛋白打開DNA雙鏈③DNA指導的DNA聚合酶合成的DNA互補鏈④DNA連接酶連接DNA片段⑤核酸內切酶切除RNA引物15．下列關于核不均一RNA(hnRNA)的論述哪些是正確的(①③⑤)。①它們的壽命比大多數(shù)細胞液的RNA為短②在3’端有一個多聚腺苷酸(polyA)長尾，是由DNA編碼的③它們存在于細胞核的核仁外周部分④鏈內核苷酸不發(fā)生甲基化反應⑤有大約四分之三成份將被切除棹，以形成mRNA16．DNA復制的精確性遠高于RNA的合成，這是因為(②④)。①新合成的DNA鏈與模板鏈形成了雙螺旋結構，而RNA鏈不能②DNA聚合酶有3'→5'外切酶活力，而RNA聚合酶無相應活力③脫氧核苷酸之間的氫鍵配對精確性高于脫氧核苷酸與核苷酸之間的配對④DNA聚合酶有5’→3’外切酶活力，RNA聚合酶無此活性17．有關逆轉錄酶的論述哪些是正確的(①②④)。①具有依賴于RNA的DNA聚合酶活性②具有依賴于DNA的DNA聚合酶活性③不具備5’→3’或3’→5’核酸外切酶活性④催化合成反應時，需要模板及3’-OH引物18．下列哪幾種突變最可能是致命的(③④)。①腺嘌呤取代胞嘧啶②胞嘧啶取代尿嘧啶③缺失三個核苷酸④插入二個核苷酸19．Crick于1958年提出的中心法則包括(①③⑤)。①DNA復制②RNA復制③轉錄④逆轉錄⑤翻譯20．DNA生物合成中需要以下哪些酶參與(①②③④⑤)。①引物酶②解旋酶③解鏈酶④DNA連接酶⑤DNA聚合酶21．RNA聚合酶的核心酶由以下哪些亞基組成(①③④)。①α②σ③β④β’⑤δ22．RNA生物合成的終止需要以下哪些成分(①②)。①終止子②ρ因子③δ因子④dnaβ蛋白⑤α亞基23．RNA與DNA生物合成相同的是(②④⑤)。①需RNA引物②以3’→5’方向DNA為模板③兩條模板鏈同時合成④新鏈生成方向5’→3’⑤形成3’,5’-磷酸二酯鍵24．DNA的切除修復需要以下哪幾種酶參與(②③④)①光裂合酶②核酸內切酶③DNA聚合酶I④DNA連接酶⑤RNA聚合酶25．目的基因的制備方法有(③④⑤)①DNA復制②RNA轉錄③mRNA逆轉錄④化學合成法⑤限制性內切酶切取26．真核細胞mRNA的加工修飾包括以下內容(①②④⑤)。①切除內含子，連接外顯子②5’端接上“帽子”③3’端接上CCA④3’端添加多聚(A)尾⑤堿基甲基化27.指導合成蛋白質的結構基因大多數(shù)是(①)①單考貝順序

②中度重復順序

③高度重復順序

④回文順序⑤以上都正確28.下面哪些因素可防止DNA上的一個點突變表現(xiàn)在蛋白質的一級結構?(⑤)①DNA的修復作用

②密碼的簡并性

③校正tRNA的作用④核糖體對mRNA的校正

⑤以上都正確29.紫外線照射對DNA分子的損傷主要是(④)①堿基替換②磷酸酯鍵斷裂③堿基丟失④形成共價連接的嘧啶二聚體⑤堿基插入30.能編碼多肽鏈的最小DNA單位是(⑤)①順反子②操縱子③啟動子④復制子⑤轉錄子(五)是非題1．DNA不僅決定遺傳性狀，而且還直接表現(xiàn)遺傳性狀。(×)2．密碼子在mRNA上的閱讀方向為5’→3’。(√)3．每—種氨基酸都有兩種以上密碼子。(×)4．一種tRNA只能識別一種密碼子。(×)5．線粒體和葉綠體的核糖體的亞基組成與原核生物類似。(√)6．大腸桿菌的核糖體的小亞基必須在大亞基存在時，才能與mRNA結合。(×)7．大腸桿菌的核糖體的大亞基必須在小亞存在時，才能與mRNA結合。(√)8．在大腸桿菌中，一種氨基酸只對應于一種氨酰-tRNA合成酶。(√)9．氨基酸活化時，在氨酰-tRNA合成酶的催化下，由ATP供能，消耗—個高能磷酸鍵。(×)10．線粒體和葉綠體內的蛋白質生物合成起始與原核生物相同。(√)11．每種氨基酸只能有一種特定的tRNA與之對應。(×)12．AUG既可作為fMet-tRNAf和Met-tRNAi的密碼子，又可作為肽鏈內部Met的密碼子。(√)13．構成密碼子和反密碼子的堿基都只是A、U、C、G。(×)14．核糖體大小亞基的結合和分離與Mg2+，的濃度有關。(√)15．核糖體的活性中心“A”位和“P”位都主要在大亞基上。(×)16.E.coli中，DnaA與復制起始區(qū)DNA結合，決定復制的起始。(√)1．大腸桿菌DNA生物合成中，DNA聚合酶I主要起聚合作用。(×)2．原核生物DNA的合成是單點起始，真核生物為多點起始。(√)3．DNA生物合成不需要核糖核苷酸。(×)4．以一條親代DNA(3’→5’)為模板時，子代鏈合成方向5’→3’，以另一條親代DNA鏈5’→3’)為模板時，子代鏈合成方向3’→5’。(×)5．在DNA生物合成中，半保留復制與半不連續(xù)復制指相同概念。(×)6．在DNA合成終止階段由DNA聚合酶Ⅱ切除引物。(×)7．目前發(fā)現(xiàn)的逆轉錄酶大部分來自于病毒粒子。(√)8．依賴DNA的RNA聚合酶由緊密結合的α2ββ’σ亞基組成，其中σ因子具有識別起始部位和催化RNA合成的功能。(×)9．RNA的生物合成不需要引物。(√)10．大腸桿菌的mRNA在翻譯蛋白質之前不需要加工。(√)11．DNA聚合酶I切除引物RNA屬3’→5’外切酶作用，切除錯配的核苷酸屬5’→3’外切酶作用。(×)12．岡崎片段的合成需要RNA引物。(√)線形DAN復制后，先導鏈引物切除后，無法延伸，故DNA鏈的一股鏈縮短13．轉錄時，RNA聚合酶的核心酶沿模板DNA向其5’端移動。(√)14．RNA不能做為遺傳物質。(√)15．以單鏈DNA為遺傳載體的病毒，DNA合成時一般要經過雙鏈的中間階段。(√)16．亞硝酸做為一種有效誘變劑，是因為它直接作用于DNA，使堿基中的氨基氧化生成羰(酮)基，造成堿基配對錯誤。(√)17．大腸桿菌DNA聚合酶Ⅲ只起聚合作用，不能校對錯配堿基。(×)18．RNA也能以自身為模板合成一條互補的RNA鏈。(√)19．真核生物的各種RNA都必須經過剪切、修飾才能成熟。(√)20.真核基因外顯子是指保留在成熟RNA中的相對應的序列，不管它是否被翻譯。(×)

三、簡答

1．分別說出5種以上RNA的功能？

轉運RNAtRNA轉運氨基酸；核蛋白體RNArRNA核蛋白體組成成；信使RNAmRNA蛋白質合成模板；不均一核RNAhnRNA成熟mRNA的前體；小核RNAsnRNA參與hnRNA的剪接；小胞漿RNAscRNA/7SL-RNA蛋白質內質網(wǎng)定位合成的信號識別體的組成成分；反義RNAanRNA/micRNA對基因的表達起調節(jié)作用；核酶RibozymeRNA有酶活性的RNA

2．原核生物與真核生物啟動子的主要差別？

原核生物

TTGACA---TATAAT------起始位點

-35-10

真核生物

增強子---GC---CAAT----TATAA—5mGpp—起始位點

-110-70-25

3．對天然質粒的人工構建主要表現(xiàn)在哪些方面？

天然質粒往往存在著缺陷，因而不適合用作基因工程的載體，必須對之進行改造構建：

a、加入合適的選擇標記基因，如兩個以上，易于用作選擇,通常是抗生素基因。

b、增加或減少合適的酶切位點，便于重組。

c、縮短長度，切去不必要的片段，提高導入效率，增加裝載量。

d、改變復制子，變嚴緊為松弛，變少拷貝為多拷貝。

e、根據(jù)基因工程的特殊要求加裝特殊的基因元件

4．舉例說明差示篩選組織特異cDNA的方法？

制備兩種細胞群體，目的基因在其中一種細胞中表達或高表達，在另一種細胞中不表達或低表達，然后通過雜交對比找到目的基因。例如：在腫瘤發(fā)生和發(fā)展過程中，腫瘤細胞會呈現(xiàn)與正常細胞表達水平不同的mRNA，因此，可以通過差示雜交篩選出與腫瘤相關的基因。也可利用誘導的方法，篩選出誘導表達的基因。

5．雜交瘤細胞系的產生與篩選？

脾B細胞+骨髓瘤細胞，加聚乙二醇（PEG）促進細胞融合，HAT培養(yǎng)基中培養(yǎng)（內含次黃嘌呤、氨基蝶呤、T）生長出來的脾B-骨髓瘤融合細胞繼續(xù)擴大培養(yǎng)。

細胞融合物中包含：

脾-脾融合細胞：不能生長，脾細胞不能體外培養(yǎng)。

骨-骨融合細胞：不能利用次黃嘌呤，但可通過第二途徑利用葉酸還原酶合成嘌呤。氨基蝶呤對葉酸還原酶有抑制作用，故不能生長骨-脾融合細胞：在HAT中能生長，脾細胞可以利用次黃嘌呤，骨細胞提供細胞分裂功能。

6、利用雙脫氧末端終止法（Sanger法）測定DNA一級結構的原理與方法？

原理是采用核苷酸鏈終止劑—2，，3，-雙脫氧核苷酸終止DNA的延長。由于它缺少形成3/5/磷酸二脂鍵所需要的3-OH，一旦參入到DNA鏈中，此DNA鏈就不能進一步延長。根據(jù)堿基配對原則，每當DNA聚合酶需要dNMP參入到正常延長的DNA鏈中時，就有兩種可能性，一是參入ddNTP,結果導致脫氧核苷酸鏈延長的終止；二是參入dNTP,使DNA鏈仍可繼續(xù)延長，直至參入下一個ddNTP。根據(jù)這一方法，就可得到一組以ddNTP結尾的長短不一的DNA片段。

方法是分成四組分別為ddAMP、ddGMP、ddCMP、ddTMP反應后，聚丙烯酰胺凝膠電泳按泳帶可讀出DNA序列。

7、激活蛋白（CAP）對轉錄的正調控作用？

環(huán)腺苷酸（cAMP）受體蛋白CRP（cAMPreceptorprotein），cAMP與CRP結合后所形成的復合物稱激活蛋白CAP（cAMPactivatedprotein）。當大腸桿菌生長在缺乏葡萄糖的培養(yǎng)基中時，CAP合成量增加，CAP具有激活乳糖（Lac）等啟動子的功能。一些依賴于CRP的啟動子缺乏一般啟動子所具有的典型的-35區(qū)序列特征（TTGACA）。因此RNA聚合酶難以與其結合。

CAP的存在（功能）：能顯著提高酶與啟動子結合常數(shù)。主要表現(xiàn)以下二方面：

①CAP通過改變啟動子的構象以及與酶的相互作用幫助酶分子正確定向,以便與-10區(qū)結合，起到取代-35區(qū)功能的作用。

②CAP還能抑制RNA聚合酶與DNA中其它位點的結合，從而提高與其特定啟動子結合的概率。

8、典型的DNA重組實驗通常包括哪些步驟？

a、提取供體生物的目的基因（或稱外源基因），酶接連接到另一DNA分子上（克隆載體），形成一個新的重組DNA分子。

b、將這個重組DNA分子轉入受體細胞并在受體細胞中復制保存，這個過程稱為轉化。

c、對那些吸收了重組DNA的受體細胞進行篩選和鑒定。

d、對含有重組DNA的細胞進行大量培養(yǎng)，檢測外援基因是否表達。9、基因文庫的構建對重組子的篩選舉出3種方法并簡述過程。

抗生素抗性篩選、抗性的插入失活、蘭-白斑篩選或PCR篩選、差式篩選、DNA探針

多數(shù)克隆載體均帶有抗生素抗性基因（抗氨芐青霉素、四環(huán)素）。當質粒轉入大腸桿菌中后，該菌便獲得抗性，沒有轉入的不具有抗性。但不能區(qū)分是否已重組。

在含有兩個抗性基因的載體中，如果外源DNA片段插入其中一個基因并導致該基因失活，就可用兩個分別含不同藥物的平板對照篩選陽性重組子。如pUC質粒含LacZ基因（編碼β半乳糖苷酶）該酶能分解生色底物X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷)產生藍色，從而使菌株變藍。當外源DNA插入后，LacZ基因不能表達，菌株呈白色，以此來篩選重組細菌。

10、說明通過胚胎干細胞獲得轉基因動物的基本過程？

胚胎干細胞（embryonicstemcell,ES）：是胚胎發(fā)育期的胚細胞，可以人工培養(yǎng)增殖并具有分化成其它類型細胞的功能。

ES細胞的培養(yǎng)：

分離胚泡的內層細胞團進行培養(yǎng)。ES在無飼養(yǎng)層中培養(yǎng)時會分化為肌細胞、N細胞等多種功能細胞，在含有成纖維細胞中培養(yǎng)時ES將保持分化功能。

可以對ES進行基因操作，不影響它的分化功能可以定點整合，解決了隨機整合的問題。向胚胎干細胞導入外源基因，然后植入到待孕雌鼠子宮，發(fā)育成幼鼠，雜交獲得純合鼠。1．參與蛋白質生物合成體系的組分有哪些?它們具有什么功能?①mRNA：蛋白質合成的模板；②tRNA：蛋白質合成的氨基酸運載工具；③核糖體：蛋白質合成的場所；④輔助因子：(a)起始因子—--參與蛋白質合成起始復合物形成；(b)延長因子—--肽鏈的延伸作用；(c)釋放因子一--終止肽鏈合成并從核糖體上釋放出來。2．遺傳密碼是如何破譯的?提示：三個突破性工作(1)體外翻譯系統(tǒng)的建立；(2)核糖體結合技術；(3)核酸的人工合成。3．遺傳密碼有什么特點?(1)密碼無標點：從起始密碼始到終止密碼止，需連續(xù)閱讀，不可中斷。增加或刪除某個核苷酸會發(fā)生移碼突變。(2)密碼不重疊：組成一個密碼的三個核苷酸只代表一個氨基酸，只使用一次，不重疊使用。(3)密碼的簡并性：在密碼子表中，除Met、Trp各對應一個密碼外，其余氨基酸均有兩個以上的密碼，對保持生物遺傳的穩(wěn)定性具有重要意義。(4)變偶假說：密碼的專一性主要由頭兩位堿基決定，第三位堿基重要性不大，故在與反密碼子的相互作用中具有一定靈活性。(5)通用性及例外：地球上的一切生物都使用同一套遺傳密碼，但近年來已發(fā)現(xiàn)某些個別例外現(xiàn)象，如某些哺乳動物線粒體中的UGA不是終止密碼而是色氨酸密碼子。(6)起始密碼子AUG，同時也代表Met，終止密碼子UAA、UAG、UGA使用頻率不同。4．簡述三種RNA在蛋白質生物合成中的作用。(1)mRNA：DNA的遺傳信息通過轉錄作用傳遞給mRNA，mRNA作為蛋白質合成模板，傳遞遺傳信息，指導蛋白質合成。(2)tRNA：蛋白質合成中氨基酸運載工具，tRNA的反密碼子與mRNA上的密碼子相互作用，使分子中的遺傳信息轉換成蛋白質的氨基酸順序是遺傳信息的轉換器。(3)rRNA核糖體的組分，在形成核糖體的結構和功能上起重要作用，它與核糖體中蛋白質以及其它輔助因子一起提供了翻譯過程所需的全部酶活性。5．簡述核糖體的活性中心的二位點模型及三位點模型的內容。(1)二位點模型A位：氨酰-tRNA進入并結合的部位；P位：起始氨酰-tRNA或正在延伸的肽基-tRNA結合部位，也是無載的tRNA從核糖體上離開的部位。(2)三位點模型大腸桿菌上的70S核糖體上除A位和P位外，還存在第三個結合tRNA的位點，稱為E位，它特異地結合無負載的tRNA及無負載的tRNA最后從核糖體上離開的位點。6．氨基酸在蛋白質合成過程中是怎樣被活化的?催化氨基酸活化的酶稱氨酰-tRNA合成酶，形成氨酰-tRNA，反應分兩步進行：(1)活化需Mg2+和Mn2+，由ATP供能，由合成酶催化，生成氨基酸-AMP-酶復合物。，(2)轉移在合成酶催化下將氨基酸從氨基酸—AMP—酶復合物上轉移到相應的tRNA上，形成氨酰-tRNA。7．簡述蛋白質生物合成過程。蛋白質合成可分四個步驟，以大腸桿菌為例：(1)氨基酸的活化：游離的氨基酸必須經過活化以獲得能量才能參與蛋白質合成，由氨酰-tRNA合成酶催化，消耗1分子ATP，形成氨酰-tRNA。(2)肽鏈合成的起始：由起始因子參與，mRNA與30S小亞基、50S大亞基及起始甲酰甲硫氨酰-tRNA(fMet-tRNAt)形成70S起始復合物，整個過程需GTP水解提供能量。(3)肽鏈的延長：起始復合物形成后肽鏈即開始延長。首先氨酰-tRNA結合到核糖體的A位，然后，由肽酰轉移酶催化與P位的起始氨基酸或肽?；纬呻逆I，tRNAf或空載tRNA仍留在P位．最后核糖體沿mRNA5’→3’方向移動一個密碼子距離，A位上的延長一個氨基酸單位的肽酰-tRNA轉移到P位，全部過程需延伸因子EF-Tu、EF-Ts，能量由GTP提供。(4)肽鏈合成終止，當核糖體移至終止密碼UAA、UAG或UGA時，終止因子RF-1、RF-2識別終止密碼，并使肽酰轉移酶活性轉為水解作用，將P位肽酰-tRNA水解，釋放肽鏈，合成終止。8．蛋白質合成中如何保證其翻譯的正確性?提示：(1)氨基酸與tRNA的專一結合，保證了tRNA攜帶正確的氨基酸；(2)攜帶氨基酸的tRNA對mRNA的識別，mRNA上的密碼子與tRNA上的反密碼子的相互識別，保證了遺傳信息準確無誤地轉譯；(3)起始因子及延長因子的作用，起始因子保證了只有起始氨酰-tRNA能進入核糖體P位與起始密碼子結合，延伸因子的高度專一性，保證了起始tRNA攜帶的fMet不進入肽鏈內部；(4)核糖體三位點模型的E位與A位的相互影響，可以防止不正確的氨酰-tRNA進入A位，從而提高翻譯的正確性；(5)校正作用：氨酰-tRNA合成酶和tRNA的校正作用；對占據(jù)核糖體A位的氨酰-tRNA的校對；變異校對即基因內校對與基因間校對等多種校正作用可以保證翻譯的正確。9．原核細胞和真核細胞在合成蛋白質的起始過程有什么區(qū)別。(1)起始因子不同：原核為IF-1，IF-2，IF-2，真核起始因子達十幾種。(2)起始氨酰-tRNA不同：原核為fMet-tRNAf，真核Met-tRNAi(3)核糖體不同：原核為70S核粒體，可分為30S和50S兩種亞基，真核為80S核糖體，分40S和60S兩種亞基10．蛋白質合成后的加工修飾有哪些內容?提示：(1)水解修飾；(2)肽鍵中氨基酸殘基側鏈的修飾；(3)二硫鍵的形成；(4)輔基的連接及亞基的聚合。11．蛋白質的高級結構是怎樣形成的?提示：蛋白質的高級結構是由氨基酸的順序決定的，不同的蛋白質有不同的氨基酸順序，各自按一定的方式折疊而成該蛋白質的高級結構。折疊是在自然條件下自發(fā)進行的，在生理條件下，它是熱力學上最穩(wěn)定的形式，同時離不開環(huán)境因素對它的影響。對于具有四級結構的蛋白質，其亞基可以由一個基因編碼的相同肽鏈組成，也可以由不同肽鏈組成，不同肽鏈可以通過一條肽鏈加工剪切形成，或由幾個不同單順反子mRNA翻譯，或由多順反子mRNA翻譯合成。12．真核細胞與原核細胞核糖體組成有什么不同?如何證明核糖體是蛋白質的合成場所?原核細胞：70S核糖體由30S和50S兩個亞基組成；真核細胞：80S核糖體由40S和60S兩個亞基組成。利用放射性同位素標記法，通過核糖體的分離證明之。13.

已知一種突變的噬菌體蛋白是由于單個核苷酸插入引起的移碼突變的，將正常的蛋白質和突變體蛋白質用胰蛋白酶消化后，進行指紋圖分析。結果發(fā)現(xiàn)只有一個肽段的差異，測得其基酸順序如下：

正常肽段Met-Val-Cys-Val-Arg

突變體肽段Met-Ala-Met-Arg

（1）什么核苷酸插入到什么地方導致了氨基酸順序的改變？

（2）推導出編碼正常肽段和突變體肽段的核苷酸序列.提示：有關氨基酸的簡并密碼分別為

Val:GUUGUCGUAGUGArg:CGUCGCCGACGAGAAGG

Cys:UGUUGCAla:GCUGCCGCACGC提示：(1)在正常肽段的第一個Val的密碼GUA的G后插入了一個C；(2)

正常肽段的核苷酸序列為：AUGGUAUGCGU…CG…；突變體肽段的核苷酸序列為：AUGGCUAUGCGU。試列表比較核酸與蛋白質的結構。

核酸蛋白質

DNARNA一級結構核苷酸序列AGTTCT或AGUUCU的排列順序3，，5，-磷酸二酯鍵氨基酸排列順序、肽鍵二級結構

雙螺旋主要是氫鍵，堿基堆積力配對（莖-環(huán)結構）（同左）

有規(guī)則重復的構象、氫鍵三級結構

超螺旋

RNA空間構象

一條肽鏈的空間構象范德華力氫鍵疏水作用鹽橋二硫鍵等四級結構

多條肽鏈或不同蛋白）15.試比較原核生物與真核生物的翻譯。原核生物與真核生物的翻譯比較如下：僅述真核生物的，原核生物與此相反。（1）.起始Met不需甲?；唬?）.無SD序列，但需要一個掃描過程；（3）.tRNA先于mRNA與核糖體小亞基結合；（4）.起始因子比較多；（5）.只一個終止釋放因子。1．試述Meselson和Stahl關于DNA半保留復制的證明實驗。提示：①將E．coli放入以15NH4Cl為唯一氮源的培養(yǎng)基中連續(xù)培養(yǎng)十幾代，使所有DNA分子標記上15N；②將15N標記的E．coli再放入普通的14N培養(yǎng)基中培養(yǎng)，在細胞生長一代、二代、…、n代的時間間隔內采樣；③采用氯化銫密度梯度離心分離DNA，并用紫外照相技術檢測DNA所在位置；④結果如下：其結果確切地證明DNA以半保留方式復制。2．描述大腸桿菌DNA聚合酶I在DNA生物合成過程中的作用。E．coliDNA聚合酶I是多功能酶，具有：①DNA聚合酶活性，能按模板要求，以5’→3’方向合成DNA，在DNA復制中，常用以填補引物切除后留下的空隙；②5'→3’外切酶活性，DNA復制后期，用于切除RNA引物；③3'→5’外切酶活性，用以校對復制的正確性，當出現(xiàn)錯配堿基時，切除錯配堿基直到正確配對為止；DNA聚合酶I不是DNA復制和校正中的主要聚合酶，它功能主要是修復。3．試述DNA復制過程，總結DNA復制的基本規(guī)律。以E．coli為例，DNA復制過程分三個階段；①起始：從DNA上控制復制起始的序列即起始點開始復制，形成復制叉，復制方向多為雙向，也可以是單向，若以雙向進行復制，兩個方向的復制速度不一定相同。由于DNA聚合酶不能從無到有合成新鏈，所以DNA