醫(yī)學知識一單個核細胞

第十四章

免疫細胞的分離及其表面標志檢測技術(shù)免疫細胞的分離外周血單個核細胞分離淋巴細胞的分離T細胞和B細胞的分離T細胞亞群的分離外周血單個核細胞分離外周血單個核細胞（peripheralmononuclearcells,PMNC）包括淋巴細胞和單核細胞（monocyte）。Ficoll分離液法主要用于分離外周血中的單個核細胞，是一種單次差速密度梯度離心的分離法。細胞分選和基本原理不同細胞密度不同不同細胞表面生物學特性不同不同細胞表面分化抗原不同不同細胞密度不同人的紅細胞密度為1.093

粒細胞密度為1.092

單個核細胞（淋巴細胞和單核細胞）的密度為1.076-1.090不同細胞密度不同用1.077±0.001的分層液可將細胞分離

密度梯度離心(Ficoll)離心淋巴細胞分離（去單核細胞）貼壁粘附法吸附柱過濾法磁鐵吸引法Percoll

分離液法（連續(xù)密度梯度離心）E花環(huán)沉降法尼龍毛柱分離法T細胞和B細胞的分離T細胞亞群的分離親和板結(jié)合分離法磁性微球分離法熒光激活細胞分離儀分離法細胞表面分化抗原（CD抗原）適用于T、B細胞的分離已知CD抗原細胞亞群的分離未知CD抗原細胞亞群的分離（陰性分選）磁珠大小可以選擇大小免疫磁珠分離細胞的特點比較

比較項目大磁珠小磁珠對細胞的影響對細胞造成機械壓力，影響其生物學活性，不利于分離后培養(yǎng)。對細胞溫和，不影響分離細胞的后續(xù)培養(yǎng)。對流式細胞儀的影響阻塞流式細胞儀的噴嘴，影響散射光?？芍苯由狭魇郊毎麅x檢測，不影響散射光。分離條件要求技術(shù)簡單，分離可在試管中完成。需要很強的磁場來分離細胞。收率得率高。得率不高。純度純度低。純度高。分離時間分離速度快。分離速度慢。分離成本成本低。需要很強的磁場來分離細胞，需要一次性的分離柱，不能在普通試管進行。

免疫磁珠法細胞分選過程免疫磁珠細胞分選裝置全自動細胞分選系統(tǒng)熒光激活細胞分離儀分離法

流式細胞分析儀淋巴細胞標志及亞群分類常用于鑒定和檢測淋巴細胞表面標志是簇分化抗原（Clusterofdifferentiation，CD）。

T細胞表面標志及其亞群CD3+CD4+CD8-輔助性T細胞（helpTcell,Th）CD3+CD4-CD8+細胞毒性T細胞（cytotoxicTcell,TcorCTL）CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞（regulatoryTcell,TrorTreg）B細胞表面標志

SmIg、Fc受體、補體受體、EB病毒受體，部分CD分子是B細胞的重要表面標志，其中以SmIg為B細胞所特有，是鑒定B細胞可靠的指標。CD19/CD5分子：可將B細胞區(qū)分為B1細胞和B2細胞，B1細胞為CD19和CD5雙陽性，而B2細胞僅為CD19陽性，B2細胞為通常所指的B細胞。NK細胞表面標志人類NK細胞表面標志主要以CD16、CD56來認定，臨床上將CD3-CD56+CD16+淋巴細胞認定為NK細胞。T細胞及NK細胞抗原提呈類細胞免疫細胞表面標志的檢測抗體致敏細胞花環(huán)法免疫細胞化學法免疫熒光法流式細胞分析法淋巴細胞表面標志檢測的臨床意義淋巴細胞表面標志檢測是評價免疫功