標(biāo)準(zhǔn)解讀

《GB/T 19915.4-2005 豬鏈球菌2型三重PCR檢測(cè)方法》是中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)發(fā)布的一項(xiàng)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，旨在為豬鏈球菌2型的檢測(cè)提供一個(gè)統(tǒng)一、準(zhǔn)確、高效的技術(shù)手段。這份標(biāo)準(zhǔn)詳細(xì)規(guī)定了使用聚合酶鏈反應(yīng)（Polymerase Chain Reaction, PCR）技術(shù)，尤其是三重PCR方法，來(lái)識(shí)別和鑒定豬鏈球菌2型的具體操作流程、試劑要求、質(zhì)量控制以及結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)。

標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)容概覽：

  1. 范圍：明確了本標(biāo)準(zhǔn)適用于豬組織樣本、臨床樣本以及其他相關(guān)樣本中豬鏈球菌2型的檢測(cè)。

  2. 規(guī)范性引用文件：列出了實(shí)施該標(biāo)準(zhǔn)時(shí)需要參考的其他相關(guān)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)或國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)，確保檢測(cè)過(guò)程的一致性和準(zhǔn)確性。

  3. 術(shù)語(yǔ)和定義：對(duì)涉及的專(zhuān)業(yè)術(shù)語(yǔ)進(jìn)行了解釋?zhuān)瑤椭x者理解標(biāo)準(zhǔn)中的具體要求。

  4. 試劑與材料：詳細(xì)描述了進(jìn)行三重PCR檢測(cè)所需的各類(lèi)化學(xué)試劑、引物序列、DNA模板制備所需的材料及其質(zhì)量要求，確保實(shí)驗(yàn)的重現(xiàn)性。

  5. 儀器設(shè)備：列舉了實(shí)施PCR檢測(cè)所必需的儀器設(shè)備，如PCR擴(kuò)增儀、離心機(jī)、電泳設(shè)備等，并對(duì)其性能指標(biāo)提出具體要求。

  6. 樣本采集與處理：提供了樣本采集、保存、前處理的方法步驟，確保樣本質(zhì)量滿(mǎn)足檢測(cè)要求，避免污染和降解。

  7. PCR反應(yīng)體系與條件：詳細(xì)說(shuō)明了三重PCR反應(yīng)的混合物組成、反應(yīng)體積、循環(huán)參數(shù)等關(guān)鍵信息，這是實(shí)現(xiàn)特異性擴(kuò)增的基礎(chǔ)。

  8. 操作步驟：從DNA提取、PCR反應(yīng)準(zhǔn)備到擴(kuò)增、產(chǎn)物檢測(cè)（通常包括凝膠電泳分析），每一步驟均有詳細(xì)的操作指導(dǎo)。

  9. 結(jié)果判斷：制定了基于PCR產(chǎn)物大小或特異性條帶出現(xiàn)與否的結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)，以區(qū)分豬鏈球菌2型及可能的其他類(lèi)型或非目標(biāo)微生物。

  10. 質(zhì)量控制：強(qiáng)調(diào)了實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的質(zhì)量控制措施，包括陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照的設(shè)置，以及如何監(jiān)控和減少假陽(yáng)性和假陰性結(jié)果的產(chǎn)生。

  11. 安全要求：提醒操作人員遵循實(shí)驗(yàn)室生物安全規(guī)程，特別是在處理潛在感染性樣本時(shí)。


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  • 2005-09-27 頒布
  • 2005-11-01 實(shí)施
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ICS07.100.30C53中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T：19915.4—2005豬鏈球菌2型三重PCR檢測(cè)方法MethodofdetectingStreptococcussuistype2bytriple-PCR2005-09-27發(fā)布2005-11-01實(shí)施中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局發(fā)布中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)

GB/T19915.4—2005豬鏈球菌2型是鏈球菌屬的成員，其致病菌株可致豬鏈球菌病,引起豬敗血癥、腦膜炎等。人可通過(guò)傷口感染該苗.并導(dǎo)致死亡。為了區(qū)別正常豬所攜帶的豬鏈球菌2型無(wú)毒苗林與發(fā)病豬分離的致病菌林，特制定本標(biāo)準(zhǔn)。本標(biāo)準(zhǔn)是采用現(xiàn)代分子生物學(xué)診斷技術(shù)制定的。本標(biāo)準(zhǔn)由農(nóng)業(yè)部畜牧獸醫(yī)局提出。本標(biāo)準(zhǔn)由全國(guó)動(dòng)物防疫標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：陸承平、姚火春、范紅結(jié)、何孔旺、

GB/T19915.4—2005豬鏈球菌2型三重PCR檢測(cè)方法范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了豬鏈球菌2型英膜基因(cp.2）、溶菌酶釋放蛋白基因(mrp)和or/2這三個(gè)毒力基因的三重PCR檢測(cè)技術(shù)。本標(biāo)準(zhǔn)適用于由豬鏈球菌2型致病基因和致病菌株的檢測(cè)范性引用文件下列文件中的條款通過(guò)本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件.其隨后所有的修改單(不包括勒誤的內(nèi)容)或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn).然而，鼓勵(lì)根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。GB/T6682—1992分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法3術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)豬鏈球菌2型Sirepiococcussuistype2豬鏈球菌是屬于鏈球菌屬的一種細(xì)菌,根據(jù)其英膜多糖抗原的差異,可分為1～34及1/2共35個(gè)血清型。豬鏈球菌2型是豬鏈球菌的一個(gè)血清型,不僅對(duì)豬致病性很強(qiáng)，而且可以感染特定的人群.是一種重要的人畜共患病病原菌。側(cè)定方法4.1方法提要挑取可疑細(xì)菌培養(yǎng)物菌落，加入PCR反應(yīng)管中,進(jìn)行PCR擴(kuò)增.瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)PCR產(chǎn)物.與標(biāo)準(zhǔn)分子量標(biāo)記比較，來(lái)確定擴(kuò)增產(chǎn)物的大小。4.2試劑和材料除另有規(guī)定,所用試劑均為分析純，水為符合GB/T6682-1992的滅菌雙蒸水。4.2.1CDs2、"rp和or/2的上下游引物，按合成說(shuō)明書(shū)使用。4.2.2TagDNA聚合酶。4.2.3瓊脂糖：電泳級(jí)。4.2.4溴化乙鍵。4.2.5分子量標(biāo)記：DL-2000.4.2.6TE緩沖液：10mmol/LTris-HCI(pH8.0),1mmol/LEDTA(pH8.0)4.2.710×PCR緩沖液：100mmol/L.KCl,160mmol/L（NH,)SO,,20mmol/LMgSO,,200mmol/LTris-HCl(pH8.8).1%TritonX-100,1mg/mLBSA4.2.8電泳緩沖液：242gTris堿，57.1mL冰乙酸,100mL0.5mol/LEDTA(pH8.0)，加蒸水至1000mL.使用時(shí)10倍稀釋。4.2.9加樣緩沖液:0.25%溴酚藍(lán).40%蔗糖4.2.10陽(yáng)性對(duì)照豬鏈球

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