糖化血紅蛋白檢測(cè)的SOP

糖化血紅蛋白檢測(cè)的SOP【目的】：用于評(píng)定糖尿病的控制程度【該SOP變動(dòng)程序】：本標(biāo)準(zhǔn)操作程序的改動(dòng)可有任一使用本sop的工作人員提出，并報(bào)告經(jīng)下述人員批準(zhǔn)簽字：專業(yè)主管、質(zhì)控主管、科主任?！緳z驗(yàn)的適用證】：本試驗(yàn)適用于糖尿病病人【儀器與試劑】1.儀器：離子交換層析柱2.試劑：2.1陽(yáng)離子交換樹脂緩沖液：PH6.9，8mg/dl;2.2GHB溶血試劑：氰化鉀（含表面活性劑）10Mm；2.3GHB標(biāo)準(zhǔn)液：凍干2.4血清分離器：40枚【操作程序】實(shí)驗(yàn)溫度：21-24C測(cè)定波長(zhǎng)：415nm1、操作方法（1）收集靜脈血、加入EDTA抗凝。（2）根據(jù)樣品數(shù)取試管若干，分別吸取400μl溶血?jiǎng)┘尤敫髟嚬苤?。?）分別吸取80μl標(biāo)準(zhǔn)或樣本放入上述各試管中，混合均勻。（4）放置5～10min，則制成了血紅蛋白樣本A3。2、糖化血紅蛋白的制備及測(cè)定（1）根據(jù)樣品的數(shù)量，取干凈的試管若干，分別吸取3.0ml陽(yáng)離子樹脂，放入各管中。（2）向上述試管中分別加入已預(yù)備的100μl血紅蛋白樣本（A3）。將層析柱插入試管中，使得橡皮塞高于液面至少1cm。（3）充分搖蕩試管混合5～10min（最好使用渦旋搖蕩器，如果沒(méi)有則需劇烈搖蕩20min。（4）然后慢慢推動(dòng)層析柱進(jìn)入試管，直到糖化血紅蛋白提取完全。（5）上清液倒入另一支試管或直接倒入比色杯進(jìn)行比色。（6）以蒸餾水作空白在415nm調(diào)零。（7）讀取并記錄標(biāo)準(zhǔn)，樣品吸光度值。3、總血紅蛋白測(cè)定（1）根據(jù)樣品數(shù)量取試管若干，分別加入5.0ml蒸餾水。（2）加入20μl血紅蛋白樣本（A3）?；旌暇鶆?。（3）以蒸餾水作空白在415nm調(diào)零。（4）讀取并記錄各管吸光度值。4、參考值范圍及報(bào)告單糖化血紅蛋白GHB（%）=糖化血紅蛋白吸光度/總血紅蛋白吸光度×10（正常值范圍4.0%～6%）。【糖化血紅蛋白測(cè)定注意事項(xiàng)】1.樹脂緩沖液在使用前至少振搖10次加以混勻，每加5管反應(yīng)搖勻一次；2.全血標(biāo)本的血紅蛋白大于18g/dl時(shí)，應(yīng)將標(biāo)本用蒸餾水按1：1稀釋，結(jié)果乘以2；3.請(qǐng)勿使用塑料試管4.請(qǐng)使用13X100mm玻璃試管，以免因試管太小，血清分離器無(wú)法插入或因試管內(nèi)勁太大，上清液無(wú)法進(jìn)入血清分離器?！颈O(jiān)測(cè)意義】糖化血紅蛋白的特點(diǎn)決定了它在糖尿病監(jiān)測(cè)中有很大的意義：（1）與血糖值相平行。血糖越高，糖化血紅蛋白就越高，所以能反映血糖控制水平。（2）生成緩慢。由于血糖是不斷波動(dòng)的，每次抽血只能反映當(dāng)時(shí)的血糖水平，而糖化血紅蛋白則是逐漸生成的，短暫的血糖升高不會(huì)引起糖化血紅蛋白的升高；反過(guò)來(lái)，短暫的血糖降低也不會(huì)造成糖化血紅蛋白的下降。由于吃飯不影響其測(cè)定，故可以在餐后進(jìn)行測(cè)定。（3）一旦生成就不易分解。糖化血紅蛋白相當(dāng)穩(wěn)定，不易分解，所以它雖然不能反映短期內(nèi)的血糖波動(dòng)，卻能很好地反映較長(zhǎng)時(shí)間的血糖控制程度，糖化血紅蛋白能反映采血前2個(gè)月之內(nèi)的平均血糖水平。（4）較少受血紅蛋白水平的影響。糖化血紅蛋白是指其在總血紅蛋白中的比例，所以不受血紅蛋白水平的影響?！九R床意義】1是糖尿病患者血糖總體控制情況的指標(biāo)2有