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文檔簡(jiǎn)介
ICS
05
DB23黑
龍
江
省
佳
木
斯
市
地
方
標(biāo)
準(zhǔn)
稻瘟病菌無毒基因檢測(cè)
PCR
佳木斯市市場(chǎng)監(jiān)督管理局 發(fā)
布
1.1-2020
2023
稻瘟病菌無毒基因檢測(cè)
Magnaporthe
本文件適用于黑龍江省佳木斯地區(qū)水稻稻瘟病菌無毒基因
AVR-Co39
19495.2
3.2
3.3
提取稻瘟病菌菌絲
片段大小的序列來判斷樣品是否攜帶該無毒基因。
NanoDrop
2000
干燥的稻瘟病菌絲
0.05
0.1
10%
0.5
8.0
8.0
2475
dd
6682
19495.2
0.1
65
700
μL
65
15
10
600
24
10
10
500
1.5
24
10
10
300
1.5
900
10
10
2.5
2.4
μL100
0.2
μL
0.2
μM0.3
μM
20-
100
ngdd
20.1
2.5U/μL0.3
75
100
NanoDrop
2000
100
8.2
ddH
8.2.2
8.2.3
將離心管置于
儀中，反應(yīng)程序?yàn)椋?5
預(yù)變性
95
變性
30
55
61
℃退
30
72
延伸
30
60
（每對(duì)引物的退火溫度及延伸時(shí)間參見附錄
29
個(gè)循環(huán)，72
200
0.5
0.5
50
50
2.5
20
0.5
μL
130
0.5
1.0
8.4
25
無毒基因引物序列
5′-3
℃）Avr1-Co39CTCTGAACAACTAAGCAACA4055CAACCTGGACTCTTATTGATCAvr-PiaTTATTGCTACCACCTTCCTC3055GTAGTAACTGAGTTGGCGTT
CCTCGGCTTCTTGTATATTACT3055TAAATCGTGCGCTTTCAGATAvr-PikCTGCACACATCAACAGTCTT3056TCACAGTTAAGGCAACGTAGAvr-Pita1*GTTTCCGCCTTTATTGGTTT56AATCCCATCCCATTCGTAACAvr-Pita2*TTCTCTAACCTGCCACGATA3055CCTCCATTCCAACACTAACGAvr-Piz-tGATCAAAT
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