非洲豬瘟流行的現(xiàn)狀 與防治措施

摘要非洲豬瘟是全世界養(yǎng)豬業(yè)所面臨的共同問題，該病自上世紀(jì)二十年代開始，到目前為止仍未研究出有效的預(yù)防措施。病程短、致死率高、難治愈和康復(fù)豬仍帶毒等特征增加了其防控的難度，目前全世界對非洲豬瘟的防控手段較為局限，只能在發(fā)生疫情后立即對病豬群體進行撲殺，以控制其蔓延，這給養(yǎng)殖戶造成極大的經(jīng)濟損失。自2018年我國發(fā)生疫情后，養(yǎng)殖行業(yè)尤其是生豬養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展前景低迷，阻礙整體養(yǎng)殖行業(yè)的快速發(fā)展，人民對豬肉制品的需求得不到滿足，日常生活受到影響。本文主要從非洲豬瘟的起源發(fā)展、病原學(xué)、流行病學(xué)、診斷技術(shù)和防控措施幾方面對非洲豬瘟進行簡單概述，希望對我國的疫情防控與根除提供有效的參考。關(guān)鍵詞：非洲豬瘟；非洲豬瘟病毒；實驗室診斷；防治措施

目錄TOC\o"1-3"\h\u7320引言 引言2018年八月我國首例非洲豬瘟疫情發(fā)生，在此后短短幾月內(nèi)迅速蔓延至我國的各個省市，一時間非洲豬瘟成為了熱門話題，豬肉的價格也在此次疫情中迅速上漲[1]。由于疫情發(fā)生進行大量的焚燒撲殺以及生豬跨區(qū)域運輸受限，供應(yīng)鏈中斷，市場豬肉供應(yīng)減少，供需失衡，豬肉價格猛增，同時，盡管我國相關(guān)部門在疫情初期就對網(wǎng)上的一些不實言論進行了辟謠，并解釋的非洲豬瘟不是人畜共患病，但是民眾仍心有余悸，這也導(dǎo)致了疫區(qū)周邊的養(yǎng)殖區(qū)生豬積壓在欄內(nèi)，更加劇了豬肉市場的供求不平衡。2019年由于非洲豬瘟疾病廣受關(guān)注，導(dǎo)致非洲豬瘟疫苗的研發(fā)也越來越熱門，一些無質(zhì)量保證的疫苗流入市場，致使非洲豬瘟的防控局面被破壞，同時造成了許多非洲豬瘟病毒的變異株出現(xiàn)，給我國對抗非洲豬瘟的問題上增加了難度[2]。1非洲豬瘟的病原學(xué)分析1.1基本組成非洲豬瘟病毒是非洲豬瘟病毒科非洲豬瘟病毒屬里的唯一成[3，該病毒有許多基因型，其中散布在中、西非的屬于I型非洲豬瘟病毒，于上世紀(jì)五十年代末傳入歐洲，現(xiàn)在意大利是其基因型的主要分布地區(qū)；俄羅斯和東歐的病毒主要是II型。非洲豬瘟病毒是雙鏈DNA病毒，其遺傳物質(zhì)是尾端閉合的單分子線狀，整個基因組包含可以編碼近兩百種蛋白質(zhì)的遺傳信息[1]。P72蛋白是構(gòu)成其病毒體的主要蛋白之一，主要存在于衣殼表面，能夠刺激機體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生免疫物質(zhì)。通常在病毒感染的晚期表達。此外，它還能夠與感染豬的血清發(fā)生反應(yīng)，這一特性通常用于各類血清學(xué)檢測技術(shù)中。非洲豬瘟病毒表面具有囊膜包被，所以有較強的外界適應(yīng)能力，可在分泌物和環(huán)境中長期存活。非洲豬瘟病毒粒子是由囊膜、衣殼、內(nèi)膜、內(nèi)核心殼、含病毒基因組DNA的擬核五部分組成[4]。1.2生命周期非洲豬瘟病毒的生命周期可以分為5個階段，分別是病毒吸附、入侵機體、病毒復(fù)制、包裝和出芽[5]。病毒入侵后，最先感染單核巨噬細胞，病毒通過胞吞進入細胞，并進行早期核糖RNA的轉(zhuǎn)錄，目前，非洲豬瘟病毒早期在核內(nèi)復(fù)制的遺傳物質(zhì)被轉(zhuǎn)運到細胞質(zhì)進行復(fù)制加工同時進行病毒粒子的包裝，最后通過出芽生殖的方式形成囊膜這一觀點受到大眾認(rèn)同。1.3免疫逃逸機體在長時間的進化過程中逐步形成了一定的抵抗外來病原入侵的能力，這一能力稱為機體的固有免疫機制。根據(jù)物競天擇，適者生存的規(guī)則，病原體通過改變形態(tài)和結(jié)構(gòu)或合成某些生物代謝物質(zhì)，對宿主的免疫應(yīng)答產(chǎn)生抑制影響，從而入侵感染目標(biāo)細胞，完成病毒的定殖目的，這一生理過程就是免疫逃逸。免疫逃逸機制可以簡單的分成三個類型：a.抗原突變。病毒簡單的結(jié)構(gòu)組成可以持續(xù)性的進行抗原的突變，從而逃避宿主細胞的天然免疫應(yīng)答。b.持續(xù)感染。病原體可以在宿主細胞內(nèi)持續(xù)的存在，平時不會致病也不會被細胞自身的免疫反應(yīng)清除。c.免疫抑制[6]。非洲豬瘟疾病早在上世紀(jì)已經(jīng)出現(xiàn)，但直至現(xiàn)在，全球仍沒有安全有效的疫苗來對抗這一疾病，造成這一問題的主要原因就是非洲豬瘟病毒粒子復(fù)雜的免疫逃避機制。非洲豬瘟病毒能夠合成許多與免疫逃逸機制相關(guān)的蛋白，通過調(diào)節(jié)宿主相關(guān)細胞活動或相關(guān)蛋白合成從而避免被宿主的固有免疫應(yīng)答清除。目前研究對非洲豬瘟病毒的免疫逃逸機制還沒有足夠清晰的了解，但有學(xué)者推測[7]，非洲豬瘟病毒主要通過調(diào)節(jié)細胞內(nèi)具有抗病毒能力的分泌蛋白、影響宿主細胞的炎癥反應(yīng)、調(diào)節(jié)宿主細胞程序性死亡進程、合成蛋白抑制宿主細胞自噬，并影響宿主的蛋白合成等方面進行免疫逃逸。除此以外，非洲豬瘟還可可以影響宿主細胞的抗原呈遞過程以及宿主的細胞和體液免疫過程。但是目前我們對病毒具體的免疫逃避原理及相關(guān)結(jié)構(gòu)的作用仍不清楚，這還需要我們科研人員的繼續(xù)探索。2非洲豬瘟的診斷方法2.1臨床診斷2.1.1臨床特征非洲豬瘟發(fā)病早期臨床特征不明顯，易與其他疾病混淆，不易區(qū)分，當(dāng)出現(xiàn)明顯臨床癥狀時，機體已經(jīng)存在大量病毒。非洲豬瘟主要表現(xiàn)為高熱(42℃)、嘔吐、腹瀉便秘，甚至出現(xiàn)便血，發(fā)病豬極度虛弱，常趴臥，體表呈紅、紫或藍色，以耳、鼻、腹部和臀部最為明顯，呼吸困難，孕期感染后會出現(xiàn)流產(chǎn)[8]。根據(jù)特征表現(xiàn)，把該病分為四個類型。最急性型和急性型死亡率極高，通常發(fā)病即死亡。其中最急性型多表現(xiàn)急性死亡且無其他臨床癥狀。急性型出現(xiàn)典型臨床癥狀，體溫升高達42℃，精神持續(xù)低迷，食欲和飲欲不高，部分可出現(xiàn)絕食，耳、前肢腹部及后肢皮膚出血，眼、鼻內(nèi)常流出粘稠的膿性分泌物，并伴有臭味，便秘甚至是便血，呼吸困難甚至出現(xiàn)神經(jīng)癥狀。亞急性型的死亡率較低，但發(fā)病過程較長，體溫變化無明顯可循的規(guī)律，但常高于40℃，呼吸困難，有濕咳表現(xiàn)，關(guān)節(jié)出現(xiàn)腫脹和疼痛，通過治療后可康復(fù)或轉(zhuǎn)為慢性型，康復(fù)后的豬仍能帶毒。慢性型表現(xiàn)呼吸不暢，幼畜常表現(xiàn)發(fā)育緩慢，關(guān)節(jié)腫大，皮膚潰瘍壞死，發(fā)病后病情輕緩，病豬能存活數(shù)月，但不易康復(fù)，通常將慢性病豬進行淘汰。2.1.2剖檢病變我國非洲豬瘟疫病發(fā)生早期對病豬進行剖檢后總結(jié)出以下病變特征：脾臟顯著增大，一般可增大至正常的6倍，質(zhì)地脆，顏色發(fā)暗；淋巴結(jié)水腫增大出血，其中以胃腸和腎臟的淋巴結(jié)表現(xiàn)最為典型；各器官出現(xiàn)充血出血，心外膜、膀胱、腎臟表面出現(xiàn)點狀瘀血，肺部充血和瘀血，氣管內(nèi)有泡沫樣粘液，伴隨心包積液和腹水發(fā)生。2.2實驗室診斷2.2.1動物接種試驗非洲豬瘟與豬瘟的臨床癥狀十分相似，為更好的區(qū)分這兩種疾病，通常采用動物接種的實驗方式，將病毒接種于豬瘟的易感豬群和免疫豬群兩組做對照，若均不出現(xiàn)癥狀則可斷定該病毒不是豬瘟病毒和非洲豬瘟病毒，若兩組均出現(xiàn)癥狀則該病毒為非洲豬瘟病毒，若只有一組出現(xiàn)癥狀且該組為易感豬群則可判定為豬瘟病毒[8]。這一方法雖然理論上簡便直觀但是由于疫病的突發(fā)性和復(fù)雜性，具體的實用價值并不高。2.2.2聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)PCR技術(shù)適用于非洲豬瘟病毒任何毒力的毒株檢測，且對于感染時期沒有要求，同時該技術(shù)還可以檢測多種樣本種類，如病豬全血、組織、骨髓等。世界衛(wèi)生組織推薦的常規(guī)PCR技術(shù)主要是用于擴增B646L基因的高度保守區(qū)域。曾少靈對VP73蛋白進行引物設(shè)計并創(chuàng)立的檢測非洲豬瘟病毒的PCR技術(shù)和世界衛(wèi)生組織推薦使用的相比，在特異性相當(dāng)?shù)那闆r下，靈敏度高出至少100倍。PCR技術(shù)敏感性高、特異性強，是現(xiàn)在應(yīng)用最廣泛的非洲豬瘟實驗室診斷方法，對于各種毒株均能很好的檢測，所以可用于非疫區(qū)國家的出入境檢疫或疫情檢測方面。2.2.3實時熒光定量PCR該技術(shù)與常規(guī)PCR實驗原理基本相同，僅是在其反應(yīng)體系的基礎(chǔ)上多添加了熒光基團，從而克服了常規(guī)PCR僅能對終點產(chǎn)物進行分析的缺點。通過儀器對熒光基團光信號的收集并轉(zhuǎn)化為標(biāo)準(zhǔn)曲線，從而對PCR反應(yīng)進程和起始模板量進行實時的監(jiān)測。該技術(shù)主要分為染料法和探針法。該方法對于整個實驗進程均能控制和觀測，實驗結(jié)果數(shù)值化和圖像化，更為直觀，同時特異性高于常規(guī)PCR，更加的靈敏和穩(wěn)定，此外熒光定量大多采用三復(fù)孔，從而提高的實驗結(jié)果的可信度，排除偶然性[10]，同時可以降低電泳產(chǎn)物分析帶來的污染。王華青等人對非洲豬瘟疑似病豬的淋巴結(jié)、全血等進行了實時熒光定量PCR，結(jié)果顯示這些組織均能檢測到非洲豬瘟病毒的擴增曲線，這說明該方法可以用于對非洲豬瘟的分子流行病學(xué)檢測。2.2.4紅細胞吸附試驗紅細胞吸附試驗是非洲豬瘟的常用確診方法，該試驗方法是利用非洲豬瘟病毒感染后的白細胞能夠與其紅細胞發(fā)生吸附反應(yīng)，呈現(xiàn)玫瑰花環(huán)形狀的特性進行的，絕大多數(shù)毒株都能產(chǎn)生紅細胞吸附現(xiàn)象，尤其是以從非、歐兩地分離出來的毒株最為典型[21]但這一觀點在上世紀(jì)被Tubiash等人的發(fā)現(xiàn)改變了，他們發(fā)現(xiàn)了不能產(chǎn)生吸附現(xiàn)象的毒株故對紅細胞吸附試驗呈陰性的毒株需進一步做聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)或熒光抗體試驗從而更有可信度[11]。由于紅細胞吸附試驗對環(huán)境要求較高，且觀察時間長短與病料中的病毒含量相關(guān)，實用性較差，通常應(yīng)用范圍不廣。2.2.5熒光抗體試驗熒光抗體試驗是通過對能夠與感染豬涂片中的抗原特異性結(jié)合的非洲豬瘟的二抗進行異硫氰酸熒光素進行標(biāo)記，通過熒光對抗原進行檢測，該方法可以準(zhǔn)確區(qū)分非洲豬瘟病毒和其他病毒，并可用于疑似感染的豬群進行抗原檢測，但該試驗方法容易在亞急性型或慢性型非洲豬瘟的檢測中出現(xiàn)敏感性降低的問題，從而容易出現(xiàn)假陰性結(jié)果，所以該方法通常用于抗原檢測的輔助檢測，如對紅細胞吸附試驗結(jié)果的進一步驗證。2.2.6酶聯(lián)免疫吸附實驗酶聯(lián)免疫吸附實驗是非洲豬瘟血清學(xué)診斷中最常用的方法，它是對豬的血清和組織液進行檢測，這種方法可以用于大批次的豬群進行篩查，適用于較低或中等毒力的病毒檢測，是I.T.O指定的官方診斷方法之一，目前被廣泛應(yīng)用的ELISA試驗分為競爭法和間接法兩種，競爭法是通過包被后的非洲豬瘟病毒中，某些蛋白與病毒抗體產(chǎn)生反應(yīng)，體系中的氧化物酶標(biāo)記物也能與非洲豬瘟病毒反應(yīng)，兩者形成競爭關(guān)系，通過氧化物酶標(biāo)記物的顏色顯示來實現(xiàn)抗體的檢測，其中陽性樣本的顏色反應(yīng)較淺，吸光度低，且阻斷效率與抗體效價呈負相關(guān)。間接法是通過單克隆抗體捕捉非洲豬瘟病毒粒子的這一特性，將病毒的VP73蛋白單克隆抗體包被在酶標(biāo)板上，利用抗體和病毒粒子的特異性結(jié)合從而可以根據(jù)顯色判斷非洲豬瘟病毒存在與否，目前該方法最低可以檢測到的VP73蛋白質(zhì)量濃度為0.05mg/L?，F(xiàn)行的廣泛使用的試劑盒除了VP72蛋白外還有VP73蛋白和p54蛋白。但是對于亞急性型和慢性型病例的脂肪樣本，由于感染組織中的抗原抗體復(fù)合物阻斷了抗原與蛋白的交互作用，抗原ELISA方法的敏感度降低，需使用其他的檢測技術(shù)進行進一步的結(jié)果確認(rèn)。3非洲豬瘟的防治措施3.1疫苗目前由于人類對非洲豬瘟病毒認(rèn)識不夠全面，對其免疫過程不清楚，以及非洲豬瘟病毒不能使機體產(chǎn)生中和抗體等問題，國際上對于非洲豬瘟病毒疫苗的研制與否存在較大爭議，有人認(rèn)為疫苗研制成功后勢必會對其他防控措施的重視程度造成影響，且非洲豬瘟病毒即使在完全保護狀態(tài)下仍不能避免強毒株的感染，反而會造成更大范圍的蔓延和更高的經(jīng)濟損失[12]。此外，弱毒疫苗的使用可能會導(dǎo)致變異毒株的產(chǎn)生。但是由于我國的生豬養(yǎng)殖特點和國際貿(mào)易一體化進程的推進，疫苗的研制還是很有必要的。3.1.1滅活疫苗雖然滅活疫苗是大部分疾病最開始的疫苗研究的首選，但目前對于非洲豬瘟并沒有有效的滅活疫苗[13]。據(jù)研究推測，滅活疫苗沒有保護作用的原因可能是由于非洲豬瘟病毒內(nèi)病毒顆粒和外病毒顆粒表面蛋白差異。3.1.2減毒活疫苗減毒活疫苗是將原有毒株在適宜的環(huán)境中傳代培養(yǎng)，從子代毒株中挑選出毒力較弱的病毒制成疫苗。減毒活疫苗是各類疾病疫苗研制的首要選擇?，F(xiàn)有的疫苗類型根據(jù)其原有毒株的來源分為天然分離的減毒活疫苗和基因重組減毒活疫苗。據(jù)研究[14]，現(xiàn)有的減毒活疫苗僅對同源的病毒有保護作用。此外，減毒活疫苗接種后會有在宿主體內(nèi)恢復(fù)毒力的風(fēng)險，所以生物安全性較差。3.1.3基因缺失疫苗基因缺失疫苗是利用生物技術(shù)清除強毒株內(nèi)管控毒力的基因片段，使其喪失毒力。同時利用刺激機體產(chǎn)生抗體的特性，從而達到保護機體的目的的技術(shù)手段。目前由于非洲豬瘟病毒基因組龐大，所以基因缺失疫苗領(lǐng)域龐大且存在有許多空白。目前國際上研究較多的是MGF和CD2v兩種基因的缺失疫苗。張艷艷[15]等人對該兩種基因均進行了試驗，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，單缺失CD2v基因的病毒仍具有很強的毒性，只缺失MGF基因的雖然毒力降低，但高劑量時仍能引起豬的體溫升高；而同時將兩個基因都剪切后,病毒的毒力大大減弱，接種后發(fā)熱癥狀得到顯著改善。目前基因缺失疫苗被證實對具有同源性基因的毒株均有保護作用?；蛉笔б呙绲陌踩砸彩且呙缗R床應(yīng)用與否的重要指標(biāo)。在這方面的研究也需要我們廣泛關(guān)注。3.2消毒技術(shù)消毒技術(shù)是通過物理或化學(xué)方法，在保證病原微生物的免疫原性的基礎(chǔ)上消除病原微生物的感染毒性。由于目前還未有針對非洲豬瘟病毒的有效疫苗，所以主要依靠消毒檢測的方式及時發(fā)現(xiàn)病毒并消滅，防止病毒大肆蔓延。目前的消毒方法主要分化學(xué)、物理和生物消毒法以及生態(tài)修復(fù)法。3.2.1物理消毒法高溫消毒法和紫外消毒法是應(yīng)用較為廣泛的兩種物理消毒技術(shù)，紫外消毒法主要是利用紫外線能夠破壞病毒的核酸從而殺死病原體。紫外線消毒法是目前最常用的方式之一，但是紫外線波長短，穿透力弱，且對人體有損傷作用，甚至可以致癌，所以用紫外線消毒時應(yīng)嚴(yán)格控制人員進入消毒區(qū)域；由于非洲豬瘟病毒耐低溫不耐高溫的這一特性，高溫消毒法被廣泛應(yīng)用于感染豬群的清除，如焚燒病死豬體，Mazur等根據(jù)數(shù)據(jù)統(tǒng)計預(yù)測非洲豬瘟病毒在零下二十?dāng)z氏度能夠存活的時間至少是353天；在四攝氏度可至少存活35天；二十三攝氏度則大約能夠存活十四天左右。在火焰溫度下非洲豬瘟病毒粒子可瞬間被滅活[16]。除了以上兩種常見的物理消毒法外，1983年γ射線被證實了具有消滅病毒微生物的作用[38]，且γ射線與紫外線相比具有穿透力強、滅活速度快且不會對病毒的免疫原性和反應(yīng)原型產(chǎn)生影響的優(yōu)點。3.2.2化學(xué)消毒法化學(xué)消毒劑中醛類和鹵素化學(xué)消毒劑對大多數(shù)的病毒都起作用，其消毒效果比較普遍，他們的作用方式是a.醛類化學(xué)消毒劑破壞病毒囊膜結(jié)構(gòu)，與DNA作用干擾病毒粒子的基本代謝反應(yīng)。b.鹵素消毒劑通過氧化蛋白質(zhì)，中斷氧化磷酸化過程的原理來達到消毒的目的，具有很強的抗有機物能力。但是醛類消毒劑有致癌、致呼吸道過敏的缺點，而鹵素消毒劑沒有很好的穩(wěn)定性。除了以上兩種消毒劑外，據(jù)研究結(jié)果顯示，多聚甲醛、戊二醛、次氯酸、過氧化物和苯酚等均對非洲豬瘟病毒作用效果明顯。3.2.3生物消毒劑理論上，生物消毒劑對囊膜病毒作用明顯，但是由于具有消毒作用的天然活性物質(zhì)數(shù)量較少，故而不能進行大規(guī)模的應(yīng)用。消毒技術(shù)不僅在疾病發(fā)生前期對疾病進行預(yù)防方面具有很高的價值，對于疫病發(fā)生中期防止進一步蔓延和疫病發(fā)生后期的復(fù)產(chǎn)工作均有很好的保障，所以做好消毒工作對于養(yǎng)殖有巨大意義，目前我國的消毒技術(shù)防控主要面臨的問題有a.科學(xué)養(yǎng)殖觀念不強。由于近幾年生豬養(yǎng)殖行業(yè)蒸蒸日上導(dǎo)致許多小型養(yǎng)殖戶紛紛加入進來，從而導(dǎo)致的養(yǎng)殖行業(yè)的參差不齊，許多基層養(yǎng)殖戶過度追求利益，無限縮小成本導(dǎo)致消毒問題無法解決，疫病復(fù)發(fā)頻出；b.消毒劑使用。消毒劑量和使用不規(guī)范也導(dǎo)致消毒不夠徹底，同時多種消毒劑混合使用等錯誤手段，不僅起不到消毒的作用，部分消毒劑反應(yīng)還會引起中毒事件；c.存放問題。消毒劑的存放問題也是不能忽視的重要因素，大多數(shù)的消毒劑需放置在陰涼通風(fēng)處，避免陽光直射。不同消毒劑之間存在差異?？偨Y(jié)目前我國的生豬市場趨向平穩(wěn)，非洲豬瘟疫情得到了初步的控制，對其病毒的認(rèn)識也更加清晰和完善，同時加上國家和民眾對非洲豬瘟相關(guān)研究的大力支持和持續(xù)關(guān)注，越來越多的優(yōu)秀科研人員加入到研究隊伍中來，此外科學(xué)飼養(yǎng)的觀念逐步出現(xiàn)在大眾的視野并為他們所接受，民眾經(jīng)濟來源多樣化的發(fā)展以及我國養(yǎng)殖行業(yè)的不斷壯大和規(guī)范，使得以前的小戶型養(yǎng)殖逐漸退出舞臺，越來越多的大規(guī)模養(yǎng)殖企業(yè)崛起，同時隨著民眾思維觀念的改變，以及養(yǎng)殖環(huán)境的改善，越來越多的人消除了對養(yǎng)殖方面的臟亂差的偏見，愈來愈多的高學(xué)歷人才加入到養(yǎng)殖隊伍，這更進一步促進了規(guī)?；涂茖W(xué)養(yǎng)殖的進程。此外，受此次疫情的影響，我國的許多養(yǎng)殖短板暴露出來，未來幾年內(nèi)突發(fā)疫病的應(yīng)急響應(yīng)措施和相關(guān)部門的聯(lián)動只會越來越好，應(yīng)對突發(fā)的大型疫情也會越來越得心應(yīng)手。日常的疾病和預(yù)防工作在此次疫情中更加被證實了其重要性。從嚴(yán)格控制傳染源和傳播途徑兩方面是能夠?qū)⒁咔閺氐浊宄?，這一點在西班牙