SNT 1699.2-2006豬流行性腹瀉病毒直接免疫熒光試驗操作規(guī)程

中華人民共和國出入境檢驗檢疫行業(yè)標準豬流行性腹瀉病毒直接免疫熒光試驗操作規(guī)程2006-01-26發(fā)布國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局ISN/T1699分為三部分：—豬流行性腹瀉微量血清中和試驗操作規(guī)程；—-豬流行性腹瀉病毒直接免疫熒光試驗操作規(guī)程；——豬流行性腹瀉間接斑點酶聯(lián)免疫吸附試驗操作規(guī)程。本部分為SN/T1699的第2部分。本部分的附錄A為規(guī)范性附錄。本部分由國家認證認可監(jiān)督管理委員會提出并歸口。本部分起草單位：中華人民共和國廣東出入境檢驗檢疫局。本部分系首次發(fā)布的出入境檢驗檢疫行業(yè)標準。豬流行性腹瀉病毒直接免疫熒光試驗操作規(guī)程SN/T1699的本部分規(guī)定了豬流行性腹瀉病毒直接免疫熒光試驗的操作方法。本部分適用于豬流行性腹瀉的診斷。下列文件中的條款通過SN/T1699的本部分的引用而成為本部分的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單(不包括勘誤的內(nèi)容)或修訂版均不適用于本部分，然而，鼓勵根據(jù)本部分達成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本下列縮略語適用于SN/T1699的本部分。4儀器設備5試驗材料5.10.01mol/LpH7.2磷酸鹽緩沖液(PBS)配制方法見A.1.1,或按診斷試劑說明書配制。5.2甘油緩沖鹽水5.30.2%伊文思藍溶液配制方法見A.1.3,或按診斷試劑說明書配制。5.4熒光抗體本部分使用水符合GB/T6822中二級水的規(guī)格。5.6被檢樣品5.7陽性樣本指定單位提供。5.8陰性樣本指定單位提供。26.1標本的制作將取得的病死豬的空腸樣本，放于潔凈培養(yǎng)皿中，加入少量PBS液，用眼科剪子剖開腸管在PBS液6.1.1腸上皮細胞洗脫物涂片6.1.2腸組織冰凍切片切片標本。6.2染色按熒光抗體說明書標定的工作效價，用0.2%伊文思藍稀釋熒光抗體。將稀釋后的熒光抗體直接滴加到固定的腸上皮細胞洗脫物涂片標本及腸管切片標本土，以覆蓋滿為宜。放濕盒中于37℃溫箱感作30min,6.4封固7結(jié)果判定鏡檢判定時，應注意熒光物質(zhì)的部位及顏色，觀察標本細胞漿，細胞漿外或胞核內(nèi)的熒光不能判為陽性。用異硫氰酸熒光黃標記的熒光抗體，在熒光顯微鏡下發(fā)出耗綠色熒光，凡呈暗綠色或黃色的熒細胞漿內(nèi)見有彌漫性或顆粒性亮綠色的熒光時，判定為陽性細胞漿內(nèi)未見有彌漫性或顆粒性亮綠色的熒光時，判為陰性。(規(guī)范性附錄)試劑配制與器材處理A.1試劑配制磷酸氫二鈉(Na?HPO?·12H,O)8.70g磷酸二氫鈉(NaH?PO?·2H,O)0.89g氯化鈉(NaCl)22.80g以上試劑應選用分析純，將上述成分溶解于適量蒸餾水中，最后定容至3000mL,103kPa20minA.1.30.2%伊文思藍溶液稱取0.2g