血、尿液尿素氮（BUN）測定 血、尿液肌酐（Cr）測定

血、尿液尿素氮（BUN）測定實驗原理VitrosBUN/UREA試劑是一種干燥，多涂層的，在透明的聚合物支撐基片上涂有分析成份的化學干片。將一滴患者樣品滴于干片上，分布層會使之均勻地分布。水和非蛋白質(zhì)成份進入下面的試劑層，與尿素酶反應生成氨。半透膜只允許氨進入呈色反應層，與指示劑發(fā)生反應。經(jīng)過一段固定的孵育時間后，通過測定呈色劑的反射強度可間接求出尿素氮的含量。測定方式：比色法波長：670nm測試時間和溫度：37℃約５分鐘反應過程：尿素酶非蛋白質(zhì)成份＋水—————→氨+二氧化碳氨＋氨指示劑—————→呈色劑2.標本：2.1病人準備：血清無特殊要求。要留取24小時尿樣。2.2樣品類型：血清；肝素鋰/鈉和EDTA抗凝血漿。定時收集的，稀釋后的尿樣。2.3標本采集與處理：2.3.1血清和血漿樣品特別要注意的是：血清；肝素鋰/鈉和EDTA抗凝血漿；不要用氟化鈉作防腐劑，因為氟會抑制尿素酶。樣品采集后4小時內(nèi)要離心標本，吸出血清。處理樣品時要將其當成生物污染品。2.3.2尿液樣品定時或隨時采集的尿液，特別要注意的是：不能使用以下防腐劑：冰醋酸，濃鹽酸，硼酸，硼粉或甲酸鈉硼酸，樣品在測試前要冷藏。測試前將1份樣品加20份試劑級別的水進行稀釋。將測試結(jié)果乘以21，就得到原始樣品中尿素氮的濃度。冷藏的樣品不能立即測試。處理樣品時要將其當成生物污染品。3.標本的存放：血清、血漿室溫下最多1天；4～8℃冷藏最多5天；-18℃冷凍保存可長達6個月。尿液樣品在測試前要冷藏。4.標本的運輸：樣品要放在帶蓋的容器內(nèi)以防污染和蒸發(fā)。5.標本拒收的標準：污染、抗凝劑、防腐劑不符合要求，標本放置時間過長。6.試驗材料：6.1測試BUN所需的物品包括：Vitros化學定標物Kit1；Vitros特制質(zhì)控液；Vitros7%BSA稀釋液。強生廠家提供原裝進口，試劑盒外包裝上標明了測試項目名稱，試劑標簽代碼，有效期限和儲藏溫度。6.1.1試劑組成：干片成分：反應成份有尿素酶和氨指示劑。其它成份有染色物質(zhì)，粘合劑，緩沖劑，穩(wěn)定劑，表面活性劑，螯合劑及交叉連接劑。干片標記：試劑盒外包裝上標明了測試項目名稱，試劑標簽代碼，有效期限和儲藏溫度。6.1.2試劑準備：從冰箱中取出干片盒，在將干片盒打開封裝并裝入儀器內(nèi)的干片儲藏器之前必須使其達到室溫狀態(tài)18～28℃。因此從冰箱中取出的試劑盒至少要在室溫下要放置60分鐘，而冷藏的試劑盒至少要在室溫下放置30分鐘。去除內(nèi)包裝后立即將干片盒放入儀器的儲藏器中。在試劑盒達到室溫后24小時內(nèi)必須將其裝入儀器中。6.1.3試劑穩(wěn)定性與貯存未開封的干片盒：存儲在2～8℃或低于該范圍。在機內(nèi)干片儲藏器中的干片盒：在儀器上放置時間不能超過2周，否則要更換新試劑。當儀器關(guān)閉時間不超過2個小時時，可將干片盒留在儲藏器中。出現(xiàn)以下情形要做質(zhì)控檢測：儀器關(guān)閉時間超過2小時；再次裝載從儀器儲藏器中取出的干片盒。如果儲藏正確，VitrosGLU干片可保質(zhì)到包裝盒上標明的有效期限。參見VITROS250干化學分析儀試劑穩(wěn)定性及貯存.SOP文件。6.1.4變質(zhì)指示：超過有效期的試劑干片不能使用。6.1.5注意事項：為避免干片盒打開以前其內(nèi)包裝受損，不能摔打干片盒；不要讓尖利物刺入內(nèi)包裝。6.2校準品：用Vitros化學定標物Kit1。血清，尿液和腦脊液都用相同的定標液，不過各自的SAVs值不同。有關(guān)標準液的配制，使用及保存的配制，保存和穩(wěn)定的詳情，可參閱VITROS250干化學分析儀校準品和質(zhì)控品.SOP文件。6.3質(zhì)控品：使用Vitros特制的質(zhì)控物品；CSF質(zhì)控檢測用Vitros液體質(zhì)控。若使用其它的一些質(zhì)控物品，當與別的GLU測試方法比較時就會出現(xiàn)差異，如：用人血清/血漿混合物分離制成的質(zhì)控物品；含有高濃度防腐劑，穩(wěn)定劑和其它化學添加劑的質(zhì)控物品；乙烯乙二醇作穩(wěn)定劑的質(zhì)控物品不能使用。有關(guān)質(zhì)控液的配制，保存和穩(wěn)定的詳情，可參閱VITROS250干化學分析儀校準品和質(zhì)控品.SOP文件。7.儀器：美國強生廠家VITROS250全自動干式生化分析儀。具體測試程序請參閱操作手冊的介紹。8.操作步驟：將試劑復溫后直接放入儀器，樣品編程，儀器5分后自動打印結(jié)果。具體測試程序請參閱VITROS250操作手冊.SOP。具體定標程序：參閱操作手冊的相關(guān)章節(jié)內(nèi)容。何時進行定標：——在維護和保養(yǎng)時更換了儀器的重要部件?！|(zhì)控結(jié)果持續(xù)超出線性范圍內(nèi)時，詳情參閱操作手冊。——管理條例上指定的時間，在美國，CLIA要求至少每6個月定標一次。9.檢驗結(jié)果的判斷與分析10.質(zhì)量控制：操作建議：將質(zhì)控物質(zhì)當成生物污染品來處理；將質(zhì)控液與患者樣品同時進行測試；每天至少做一次質(zhì)控以檢測儀器運行狀況；選擇質(zhì)控濃度來檢查與臨床的相關(guān)性；其它詳情參閱操作手冊質(zhì)控章節(jié)的有關(guān)內(nèi)容。有關(guān)質(zhì)控操作的常規(guī)性條例可參照國際質(zhì)控檢測（IQCT）的內(nèi)容。在每一批標本中都應把質(zhì)控血清做為未知標本進行分析，以2S為質(zhì)控警告限，3S為失控限，繪制質(zhì)控圖，判斷是否在控。質(zhì)控規(guī)則參見生化室室內(nèi)質(zhì)控操作規(guī)程.SOP文件。11.計算方法：以用Vitros化學定標物校準儀器后，在病人結(jié)果可報告范圍內(nèi)，儀器直接報告可靠的檢測結(jié)果，以mmol/L報告。12.參考值范圍國際單位(mmol/L)血清/血漿男性3.2-7.1女性2.5-6.1尿液24h尿樣428-714mmol/day**此參考范圍是測試3160位健康成人，然后取靶值附近95%的結(jié)果計算所得。參考值因性別、年齡、飲食和地域的不同而有所差別。根據(jù)好的實驗室經(jīng)驗，每個實驗室應建立自己的參考值。13.臨床意義：人體內(nèi)氮排泄的主要途經(jīng)是經(jīng)肝臟合成尿素氮，進入血液后最終由腎臟排出體外，因此當發(fā)生腎小球腎炎，休克，尿道阻塞，腎盂腎炎和其它原因引起的急慢性腎病時會導致血清尿素氮濃度升高。嚴重充血性心臟病，營養(yǎng)過度，糖尿病型酮酸中毒，脫水和胃腸道出血也會使尿素氮升高。而懷孕時蛋白質(zhì)攝入減少以及急性肝炎進行靜脈滴注會導致尿素氮下降。14.操作性能14.1線性范圍血清0.71-42.83mmol/L；尿液:：14.91－899.43（乘以稀釋倍數(shù)21倍的結(jié)果）。14.2精密度：在Vitros250生化儀上用質(zhì)控液來測精密度。結(jié)果反映了該方法的精密度。當儀器維護，周圍環(huán)境，干片處理和保存，質(zhì)控液的復溶以及樣品處理等方面發(fā)生變化都會影響結(jié)果的重復性。日間精密度血清(mmol/L)s(mmol/L)CV(%)室間精密度n=20天(mmol/L)s(mmol/L)CV(%)樣品1n=795.60.08樣品15.60.101.8樣品2n=7816.40.19樣品216.40.251.5日間精密度尿液(mmol/L)s(mmol/L)CV(%)室間精密度n=22天(mmol/L)s(mmol/L)CV(%)樣品1n=88146.91.94樣品1146.93.322.3樣品2n=88230.03.42樣品2230.07.253.2*日間精密度是將2至3份相同的樣品在一天中運行兩次，然后對測試結(jié)果進行統(tǒng)計計算。**室間精密度是用同一個批號的干片每周定標一次，然后對測試結(jié)果進行統(tǒng)計計算。14.3方法學比較：用Vitros700儀器和尿素酶/GLDH參考方法分別測試相同血清樣品，對比結(jié)果顯示Vitros方法的準確度良好。用Vitros250儀器與Vitros700儀器測試相同的血清/尿液樣品，對比結(jié)果顯示Vitros250方法的準確度良好，血清：Y=1.00X+0.18（r=0.999，N=85，檢測范圍0.8-41.7mmol/L）；尿液：Y=0.99X+7.14（r=0.999，N=88，檢測范圍47.9-440.3mmol/L）。14.4靈敏度：試劑檢測下限為血清0.71mmol/L，尿液為14.91mmol/L。14.5特異性：經(jīng)測試，以下物質(zhì)對VitrosBUN/UREA干片法均無干擾（偏差<1.1mg/dL，0.39mmol/L）。維生素C3mg/dL、膽紅素20mg/dL、葡聚糖1000mg/dL、乙醇300mg/dL、泛影鈉500mg/dL、眠爾寧（安定藥）2mg/dL、樂疾寧（抗腫瘤藥）1.5mg/dL、苯妥因2mg/dL、磺胺噻唑6mg/dL、甲糖寧22mg/dL、總蛋白10g/dL、甘油三酯800mg/dL。14.6病人結(jié)果可報告范圍：血清0.71-42.83mmol/L；尿液:：14.91－899.43（乘以稀釋倍數(shù)21倍的結(jié)果）。15.超出范圍結(jié)果處理：本法線性上限為血清0.71mmol/L，尿液為14.91mmol/L。如果樣品中BUN濃度超出系統(tǒng)的測試線性范圍，請按下列步驟稀釋：血清或血漿用Vitros7%BSA稀釋。尿液用生理鹽水。重新測試。將測試結(jié)果乘稀釋倍數(shù)，就得到原樣品BUN的濃度。16.病危報警值的處理當尿素氮測定值>36mmol/L時，在經(jīng)過復查等確認手段處理后應及時向臨床主管醫(yī)生匯報。17.方法局限性17.1本法線性上限血清0.71mmol/L，尿液為14.91mmol/L。如果樣品中BUN濃度超出系統(tǒng)的測試線性范圍，請按下列步驟進行稀釋：血清或血漿用Vitros7%BSA稀釋。尿液用生理鹽水。重新測試。將測試結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)，就得到原始樣品中GLU的濃度。17.2干擾物質(zhì)：銨離子會使樣品中尿素氮的測定結(jié)果升高。我們對VitrosBUN/UREA方法的干擾物質(zhì)進行了篩查，以下物質(zhì)在表中所示濃度會引起一定的偏差。當血紅蛋白為500mg/L,BUN濃度為10mmol/L時可產(chǎn)生+0.4mmol/L的干擾。有些藥物和患者的自身狀況也會影響B(tài)UN的測試值。18.補救措施：儀器出了故障可聯(lián)系儀器廠家，進行緊急修理，如一時不能修好，用OLYMPUSAU1000生化分析儀測定病人標本。19.參考文獻強生廠家提供的方法學手冊20.其他：儀器測定后的廢液及難降解的材料集中收集后按檢驗科廢物處理.SOP文件處理。血、尿液肌酐（Cr）測定1.實驗原理VitrosCREA試劑是一種干燥，多涂層的，在透明的聚合物支撐基片上涂有分析成份的化學干片。將一滴患者樣品滴于干片上，分布層會使之均勻地分布。隨后，肌酐擴散至試劑層并水解為肌酸。這樣生成的肌酸在肌酸氨基水解酶的作用下轉(zhuǎn)化為肌氨酸和尿素。肌氨酸又在肌氨酸氧化酶的作用下氧化生成甘氨酸，甲醛和過氧化氫。最后，過氧化氫催化白色染料生成呈色劑。測定方式：兩點比色法波長：670nm測試時間和溫度：37℃約５分鐘反應過程：肌酐氨基水解酶肌酐+水————→肌酸肌酸氨基水解酶肌酸+水———→肌氨酸+尿素肌氨酸氧化酶肌氨酸+氧氣+水————→甘氨酸+甲醛+過氧化氫POD過氧化氫+白色染料————→呈色劑2.標本：2.1病人準備：無特殊。2.2樣品類型：血清；肝素鋰/鈉和EDTA抗凝血漿。定時收集的，稀釋后的尿樣。2.3標本采集與處理：2.3.1血清和血漿樣品特別要注意的是：不要用注射營養(yǎng)液的針管采集樣品。樣品采集后4小時內(nèi)要離心標本，吸出血清。處理時要將其當成生物污染品。2.3.2尿液樣品定時或隨時采集的尿液。測試前將1份樣品加20份試劑級別的水進行稀釋。將測試結(jié)果乘以21，就得到原始樣品中尿素氮的濃度。冷藏的樣品不能立即測試。處理樣品時要將其當成生物污染品。3.標本的存放：血清、血漿室溫下最多5天；冷藏最多30天；冷凍保存可超過30天。尿液樣品室溫下最多3天；冷藏最多5天；-18℃可長期保存。4.標本的運輸：樣品要放在帶蓋的容器內(nèi)以防污染和蒸發(fā)。5.標本拒收的標準：污染、抗凝劑、防腐劑不符合要求，標本放置時間過長。6.試驗材料：6.1測試Cr所需的物品包括：Vitros化學定標物Kit1；Vitros特制質(zhì)控液；Vitros7%BSA稀釋液。強生廠家提供原裝進口，試劑盒外包裝上標明了測試項目名稱，試劑標簽代碼，有效期限和儲藏溫度。6.1.1試劑組成：干片成分：反應成份有肌酐氨基水解酶，肌酸氨基水解酶，肌氨酸氧化酶，過氧化酶和白色染料。其它成份有染色物質(zhì)，粘合劑，緩沖劑，穩(wěn)定劑，表面活性劑，螯合劑及交叉連接劑。干片標記：試劑盒外包裝上標明了測試項目名稱，試劑標簽代碼，有效期限和儲藏溫度。6.1.2試劑準備：從冰箱中取出干片盒，在將干片盒打開封裝并裝入儀器內(nèi)的干片儲藏器之前必須使其達到室溫狀態(tài)18～28℃。因此從冰箱中取出的試劑盒至少要在室溫下要放置60分鐘，而冷藏的試劑盒至少要在室溫下放置30分鐘。去除內(nèi)包裝后立即將干片盒放入儀器的儲藏器中。說明：在試劑盒達到室溫后的24小時之內(nèi)必須將其裝入儀器中。6.1.3試劑穩(wěn)定性與貯存未開封的干片盒：存儲在-18℃或低于該范圍。在機內(nèi)干片儲藏器中的干片盒：在儀器上放置時間不能超過2周，否則要更換新試劑。當儀器關(guān)閉時間不超過2個小時時，可將干片盒留在儲藏器中。出現(xiàn)以下情形要做質(zhì)控檢測：儀器關(guān)閉時間超過2小時；再次裝載從儀器儲藏器中取出的干片盒。如果儲藏正確，VitrosCr干片可保質(zhì)到包裝盒上標明的有效期限。參見VITROS250干化學分析儀試劑穩(wěn)定性及貯存.SOP文件。6.1.4變質(zhì)指示：超過有效期的試劑干片不能使用。6.1.5注意事項：為避免干片盒打開以前其內(nèi)包裝受損，不能摔打干片盒；不要讓尖利物刺入內(nèi)包裝。6.2校準品：用Vitros化學定標物Kit1。血清，尿液都用相同的定標液，不過各自的SAVs值不同。有關(guān)標準液的配制，使用及保存的配制，保存和穩(wěn)定的詳情，可參閱VITROS250干化學分析儀校準品和質(zhì)控品.SOP文件。6.3質(zhì)控品：使用Vitros特制的質(zhì)控物品；若使用其它的一些質(zhì)控物品，當與別的GLU測試方法比較時就會出現(xiàn)差異，如：用人血清/血漿混合物分離制成的質(zhì)控物品；含有高濃度防腐劑，穩(wěn)定劑和其它化學添加劑的質(zhì)控物品；乙烯乙二醇作穩(wěn)定劑的質(zhì)控物品不能使用。有關(guān)質(zhì)控液的配制，保存和穩(wěn)定的詳情，可參閱VITROS250干化學分析儀校準品和質(zhì)控品.SOP文件。7.儀器美國強生廠家VITROS250全自動干式生化分析儀。具體測試程序請參閱操作手冊的介紹。8.操作步驟：將試劑復溫后直接放入儀器，樣品編程，儀器5分后自動打印結(jié)果。具體測試程序請參閱VITROS250操作手冊.SOP。具體定標程序：參閱操作手冊的相關(guān)章節(jié)內(nèi)容。何時進行定標：——在維護和保養(yǎng)時更換了儀器的重要部件?！|(zhì)控結(jié)果持續(xù)超出線性范圍內(nèi)時，詳情參閱操作手冊?！芾項l例上指定的時間，在美國，CLIA要求至少每6個月定標一次。9.檢驗結(jié)果的判斷與分析10.質(zhì)量控制：操作建議：將質(zhì)控物質(zhì)當成生物污染品來處理；將質(zhì)控液與患者樣品同時進行測試；每天至少做一次質(zhì)控以檢測儀器運行狀況；選擇質(zhì)控濃度來檢查與臨床的相關(guān)性；其它詳情參閱操作手冊質(zhì)控章節(jié)的有關(guān)內(nèi)容。有關(guān)質(zhì)控操作的常規(guī)性條例可參照國際質(zhì)控檢測（IQCT）的內(nèi)容。在每一批標本中都應把質(zhì)控血清做為未知標本進行分析，以2S為質(zhì)控警告限，3S為失控限，繪制質(zhì)控圖，判斷是否在控。質(zhì)控規(guī)則參見生化室室內(nèi)質(zhì)控操作規(guī)程.SOP文件。11.計算方法：以用Vitros化學定標物校準儀器后，在病人結(jié)果可報告范圍內(nèi)，儀器直接報告可靠的檢測結(jié)果，以mmol/L報告。12.參考值范圍國際單位(μmol/L)血清/血漿男性62-106女性71-133尿液24h尿樣7000-25000μmol/day**此參考范圍是測試一批健康成人，然后取靶值附近95%的結(jié)果計算所得。參考值因性別、年齡、飲食和地域的不同而有所差別。根據(jù)好的實驗室經(jīng)驗，每個實驗室應建立自己的參考值。13.臨床意義：血清和尿液中的肌酐是正常人體肌肉組織代謝的產(chǎn)物，與飲食變化無關(guān)。男性血清肌酐含量高于女性。由于尿肌酐主要通過腎小球排泄，不被腎小管重吸收，所以測定血清和尿液中的肌酐濃度可以檢查腎小球的通透率。急性或慢性腎衰竭，尿路阻塞，腎血流減弱，休克，脫水，橫紋肌炎都可造成血清肌酐濃度上升。虛弱和肌肉量減少可造成肌酐濃度降低。運動會使肌酐廓清率升高，但當尿量減少時該指標不可靠。14.操作性能14.1線性范圍：血清4-1238μmol/L；尿液:：84-30639μmol/L（乘以稀釋倍數(shù)21倍的結(jié)果）。14.2精密度：在Vitros250生化儀上用質(zhì)控液來測精密度。結(jié)果反映了該方法的精密度。當儀器維護，周圍環(huán)境，干片處理和保存，質(zhì)控液的復溶以及樣品處理等方面發(fā)生變化都會影響結(jié)果的重復性。日間精密度血清(μmol/L)s(μmol/L)CV(%)室間精密度n=20天(μmol/L)s(μmol/L)CV(%)樣品1n=79870.9樣品1870.91.4樣品2n=785234.4樣品25238.81.8日間精密度尿液(μmol/L)s(μmol/L)CV(%)室間精密度n=22天(μmol/L)s(μmol/L)CV(%)樣品1n=88616097.8樣品16160168.82.7樣品2n=888830135樣品28830211.12.6樣品3n=8812373257.3樣品312373491.94.0樣品4n=8818827218.5樣品418827398.62.1*日間精密度是將2至3份相同的樣品在一天中運行兩次，然后對測試結(jié)果進行統(tǒng)計計算。**室間精密度是用同一個批號的干片每周定標一次，然后對測試結(jié)果進行統(tǒng)計計算。14.3方法學比較：用Vitros700儀器和高效液相色譜參考方法分別測試相同血清或尿樣品，對比結(jié)果顯示Vitros方法的準確度良好。用Vitros250儀器與Vitros700儀器測試相同的血清/尿液樣品，對比結(jié)果顯示Vitros250方法的準確度良好，血清：Y=1.03X-7.07（r=0.999，N=52，檢測范圍80-1176μmol/L）；尿液：Y=1.04X-439.35（r=0.999，N=59，檢測范圍2714-27793μmol/L）。14.4靈敏度：本試劑的檢測下限為血清4μmol/L；尿液:：84μmol/L（乘以稀釋倍數(shù)21倍的結(jié)果）。14.5特異性：經(jīng)測試，以下物質(zhì)對VitrosCREA干片法均無干擾（偏差<0.1mg/dL，<8.8umol/L）。乙酰乙酸30mmol/L、氨芐西林1.5mg/dL、阿米卡星1.5mg/dL、氯化銨1mmol/L、兩性霉素B1.5mg/dL、維生素C3mg/dL、桿菌肽1.5mg/dL、重碳酸鹽40mmol/L、膽紅素20mg/dL、硫酸博來霉素1.5mg/dL、羧芐西林1.5mg/dL、頭孢唑林1.5mg/dL、頭孢噻吩1.5mg/dL、頭孢噻啶1.5mg/dL、頭孢來星1.5mg/dL、頭孢氨芐1.5mg/dL、頭孢拉定1.5mg/dL。14.6病人結(jié)果可報告范圍：血清4-1238μmol/L；尿液:：84-30639μmol/L（乘以稀釋倍數(shù)21倍的結(jié)果）。15.超出范圍結(jié)果處理：本法線性上限為血清1238μmol/L；尿液:：30639μmol/L（乘以稀釋倍數(shù)21倍的結(jié)果）。如果樣品中Cr濃