茅莓根的DNA條形碼鑒定及化學(xué)成分研究的中期報(bào)告

茅莓根的DNA條形碼鑒定及化學(xué)成分研究的中期報(bào)告【摘要】：本文以茅莓根藥材為研究對(duì)象，采用DNA條形碼技術(shù)對(duì)其進(jìn)行鑒定，并對(duì)其化學(xué)成分進(jìn)行分析。結(jié)果顯示，茅莓根藥材的DNA條形碼序列為ITS2，其長(zhǎng)度為629bp。化學(xué)成分分析表明，茅莓根藥材中含有多種黃酮類化合物和苷類化合物，具有較好的抗氧化活性?！娟P(guān)鍵詞】茅莓根；DNA條形碼；化學(xué)成分；抗氧化活性一、研究背景茅莓根（RadixImperatae）是桿菌科植物茅莓（Imperatacylindrica（L）Beauv）的根，其具有清熱解毒、利水消腫、散瘀止血的作用，是一種常用的中藥材。然而，由于茅莓根采集來(lái)源廣泛，質(zhì)量良莠不齊，加之其地下部分與其他植物的地下部分形態(tài)相似，易被混淆，因此如何進(jìn)行茅莓根藥材的鑒別和質(zhì)量控制成為了當(dāng)前研究的熱點(diǎn)和難點(diǎn)。DNA條形碼技術(shù)是一種利用物種特異性DNA區(qū)域進(jìn)行物種鑒定的技術(shù)。其基本原理是通過(guò)PCR擴(kuò)增該物種特異性的DNA條碼序列，然后對(duì)該序列進(jìn)行測(cè)序和分析，在比對(duì)序列庫(kù)中進(jìn)行物種鑒定。由于該技術(shù)具有鑒定準(zhǔn)確、快速、可重復(fù)等優(yōu)點(diǎn)，因此被廣泛應(yīng)用于藥材鑒定領(lǐng)域。二、研究方法本研究采用茅莓根藥材為研究對(duì)象，采用DNA條形碼技術(shù)進(jìn)行鑒定，同時(shí)對(duì)茅莓根的化學(xué)成分進(jìn)行分析。1.鑒定方法（1）實(shí)驗(yàn)材料：茅莓根樣本12個(gè)、其他植物根樣本5個(gè)。（2）DNA提?。翰捎弥参锘蚪MDNA提取試劑盒進(jìn)行DNA提取，提取的DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增。（3）PCR擴(kuò)增：以ITS2為模板，設(shè)計(jì)引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，反應(yīng)體積為50μL，PCR條件為：95℃5min，95℃30s，55℃30s，72℃30s，共35個(gè)循環(huán)，最后72℃延伸5min。（4）PCR產(chǎn)物純化及測(cè)序：用QIAquickPCR純化試劑對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行純化，然后進(jìn)行雙向測(cè)序。（5）條形碼序列分析：將測(cè)序得到的ITS2序列與基因庫(kù)中的ITS2序列比對(duì)進(jìn)行物種鑒定。2.化學(xué)成分分析（1）實(shí)驗(yàn)材料：茅莓根樣本12個(gè)。（2）化學(xué)試劑：乙醇、水、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）、五硫化二磷（DTNB）、氧化石墨（GO）、氯化鐵（FeCl3）、硫酸銅（CuSO4）、硼氫化鈉（NaBH4）等。（3）化學(xué)成分分析：采用超高效液相色譜-電噴霧離子化質(zhì)譜法對(duì)茅莓根樣品的多酚類化合物進(jìn)行分析，同時(shí)使用各種生化試劑對(duì)茅莓根中的活性成分進(jìn)行定量分析。三、研究結(jié)果1.茅莓根藥材的DNA條形碼鑒定結(jié)果通過(guò)對(duì)茅莓根藥材的DNA條形碼鑒定結(jié)果表明，茅莓根藥材的ITS2序列長(zhǎng)度為629bp，與NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)中的茅莓根ITS2序列較為一致，均為RadixImperatae鑒定結(jié)果。2.茅莓根藥材的化學(xué)成分分析結(jié)果本研究采用超高效液相色譜-電噴霧離子化質(zhì)譜法對(duì)茅莓根藥材中多酚類化合物進(jìn)行了分析，同時(shí)使用DPPH自由基清除法、硫巴比妥酸法、還原能力法、FeCl3還原法和CuSO4比色法對(duì)其抗氧化活性進(jìn)行了測(cè)定。結(jié)果表明，茅莓根藥材中含有多種黃酮類化合物和苷類化合物，具有較好的抗氧化活性。四、討論與結(jié)論通過(guò)本研究的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，采用DNA條形碼技術(shù)能夠準(zhǔn)確鑒定茅莓根藥材，避免混淆