酵母菌形態(tài)觀察及死活細胞的觀察

關(guān)于酵母菌形態(tài)觀察及死活細胞的觀察酵母菌形態(tài)觀察及死活細胞的觀察；微生物細胞大小和數(shù)量的測定目的要求實驗材料實驗程序思考題第2頁,共25頁，2024年2月25日，星期天目的要求觀察酵母形態(tài)，加深理解酵母的形態(tài)特征美藍染色鑒定酵母的死活學(xué)習(xí)使用目鏡測微尺和鏡臺測微尺在顯微鏡下測定微生物大小的方法。學(xué)習(xí)使用血球記數(shù)板測定微生物數(shù)量的方法。第3頁,共25頁，2024年2月25日，星期天實驗材料顯微鏡、目鏡測微尺、鏡臺測微尺、血球記數(shù)板、酵母菌懸液、蓋玻片、美藍、無菌滴管、吸水紙、擦鏡紙、香柏油、擦鏡油。第4頁,共25頁，2024年2月25日，星期天實驗程序5-1:測定微生物的大小5-2:測定微生物數(shù)量5-3:酵母的形態(tài)特和美藍染色鑒定酵母的死活第5頁,共25頁，2024年2月25日，星期天實驗5-1:酵母的形態(tài)特和美藍染色鑒定酵母的死活

第6頁,共25頁，2024年2月25日，星期天實驗5-1a：Yeasts(unicellularfungi)Division:buddingDonotformfilamentsSomeformfilamentsSomecanmate.第7頁,共25頁，2024年2月25日，星期天蜉蝣體表面的酵母菌第8頁,共25頁，2024年2月25日，星期天面包酵母出芽生殖中的啤酒酵母第9頁,共25頁，2024年2月25日，星期天實驗5-1:測定微生物的大小第10頁,共25頁，2024年2月25日，星期天

測定的工具：目鏡測微尺鏡臺測微尺第11頁,共25頁，2024年2月25日，星期天實驗5-1實驗程序（測定微生物的大?。┠跨R測微尺的校正：在高倍鏡下，看清鏡臺測微尺的刻度后，轉(zhuǎn)動目鏡，使目鏡測微尺與鏡臺測微尺的刻度平行，移動推動器，使目鏡測微尺的0點與鏡臺測微尺的某一刻度重合，然后，仔細尋找兩尺第二個完全重合的刻度。計算兩刻度間目鏡測微尺的格數(shù)和鏡臺測微尺的格數(shù)。由于鏡臺測微尺的刻度每格長10μm，所以可得：目鏡測微尺每格長度（μm）=（鏡臺測微尺格數(shù)×10）/目鏡測微尺格數(shù)注意：校正目鏡測微尺必須針對特定的顯微鏡和附件（特定的接物鏡、接目鏡、鏡筒長度等）進行，而且只能在這特定的情況下才可重復(fù)使用。菌體大小的測定：取下鏡臺測微尺，將細菌染色標(biāo)本置于載物臺上，然后在油鏡下用目鏡測微尺測量菌體的長和寬。第12頁,共25頁，2024年2月25日，星期天第13頁,共25頁，2024年2月25日，星期天實驗5-2:測定微生物數(shù)量

第14頁,共25頁，2024年2月25日，星期天實驗5-2實驗程序（測定微生物數(shù)量）方法：活菌計數(shù)法——平板菌落計數(shù)法；總菌計數(shù)法——血球計數(shù)板或霍瑟（PeroffHausser）細菌計數(shù)板（二者原理和部件相同，只是厚薄不同而已）。

第15頁,共25頁，2024年2月25日，星期天第16頁,共25頁，2024年2月25日，星期天第17頁,共25頁，2024年2月25日，星期天實驗程序Ⅱ1（測定微生物數(shù)量）

1.

取清潔無油的血球計數(shù)板，在計數(shù)室上面加蓋玻片。

2.

取酵母菌液，搖勻，用滴管由蓋玻片邊緣滴一小滴，使菌液自行滲入，計數(shù)室內(nèi)不得有氣泡。

3.

靜止5min后，用低倍鏡觀察并將計數(shù)室移至視野中央。

4.

在高倍鏡下計數(shù)：隨機計數(shù)五個中格的平均值，然后求得每個中格的平均值。乘上16（或25）就得出一大格中的總菌數(shù)，最后再換算到每mL菌液中的含菌數(shù)。第18頁,共25頁，2024年2月25日，星期天實驗程序Ⅱ2

5.

計算方法：

6.注意事項：壓在方格線上的菌體，以壓在底線和右側(cè)線上的菌體計入本格內(nèi)；遇到有芽體的酵母時，若芽體和母體同等大，就按單個酵母計數(shù)。

7.

計數(shù)完畢后，血球計數(shù)板要立即清洗干凈，并用吸水紙吸干，最后用擦鏡紙擦干凈，并放回盒內(nèi)。

（X1+X2+X3+X4+X5）5*25（或16）*10*1000*稀釋倍數(shù)

酵母菌細胞數(shù)/mL=第19頁,共25頁，2024年2月25日，星期天實驗5-3：美藍染色死活細胞鑒定美藍為無毒染料，其氧化型呈藍色，還原型無色。通過美藍染色，檢驗細胞的還原能力。活細胞還原能力強，在特定時間內(nèi)將美藍還原為無色。老化、死亡細胞呈藍色、淡藍色。第20頁,共25頁，2024年2月25日，星期天第21頁,共25頁，2024年2月25日，星期天第22頁,共25頁，2024年2月25日，星期天思考題為什么目鏡測微尺必須用鏡臺測微尺來校正？在顯微鏡下直接測定