基于腦-腸互動(dòng)理論初探百合知母皂苷治療抑郁癥伴IBS的作用機(jī)制

基于腦—腸互動(dòng)理論初探百合知母皂苷治療抑郁癥伴IBS的作用機(jī)制目的：抑郁癥與中醫(yī)百合病有著密切的關(guān)聯(lián),腸道異常反應(yīng)是百合病的病癥之一,臨床上抑郁癥患者常伴有腸易激綜合征(IBS)等胃腸道并發(fā)癥或合并癥,腦-腸互動(dòng)理論揭示了抑郁癥多伴有IBS的原因,但其科學(xué)理論尚未闡明。本研究基于腦-腸互動(dòng)理論初步探討百合皂苷、知母皂苷、百合知母皂苷對(duì)抑郁癥伴IBS的治療作用及其相關(guān)機(jī)制。方法：1、百合知母皂苷對(duì)抑郁癥伴IBS模型大鼠外在指標(biāo)的檢測(cè)成年雄性SD大鼠,根據(jù)體重及open-field實(shí)驗(yàn)選擇相近的大鼠,采用半隨機(jī)的方法分為正常對(duì)照組(Normal)、抑郁癥伴IBS模型組(Model)、百合皂苷組(Lily-SaponinLS)、知母皂苷組(TimosaponinTI)、百合知母皂苷組(Lily-TimosaponinLT)、抑郁癥陽(yáng)性藥氟西汀組(FluoxetineHydrochlorideFLU)、IBS陽(yáng)性藥得舒特組(PinaveriumBromideDicetelPBD)。Normal不做任何處理,Model和其余五組大鼠,給予孤養(yǎng)、夾尾刺激、束縛刺激、慢性不可預(yù)見(jiàn)性溫和應(yīng)激刺激(CUMS)誘導(dǎo)建立模型,造模的同時(shí)給藥,持續(xù)6周。檢測(cè)不同實(shí)驗(yàn)階段大鼠的體重、open-field實(shí)驗(yàn)評(píng)分、糖水消耗量、AWR評(píng)分及排便量的變化。2、百合知母皂苷對(duì)抑郁癥伴IBS模型大鼠藥效指標(biāo)及其作用機(jī)制的初步探討采用ELISA法檢測(cè)各組大鼠血清中ACTH、DA、CGRP、VIP的含量變化,血漿中CRF、SP、IL-1β、IL-6的含量變化、腦組織及結(jié)腸組織中5-HT的含量變化；應(yīng)用HE常規(guī)染色及醛品紅-橙黃G特殊染色檢測(cè)各組大鼠結(jié)腸組織MC的形態(tài)及數(shù)量變化；利用熒光定量PCR檢測(cè)各組大鼠下丘腦組織CRFmRNA及其受體CRFR1mRNA、CRFR2mRNA的表達(dá)變化。3、抑郁癥伴IBS模型大鼠差異表達(dá)基因的驗(yàn)證。采用基因芯片檢測(cè)大鼠血液差異基因表達(dá)情況,比較Normal、Model、LS及LT之間的差異表達(dá)基因；篩選藥物干預(yù)的顯著性回調(diào)的兩條基因Rgs19mRNA、Ormd13mRNA并查閱文獻(xiàn)對(duì)差異基因的功能進(jìn)行相關(guān)了解,利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)驗(yàn)證大鼠的血液、下丘腦、結(jié)腸組織中Rgs19mRNA、Ormd13mRNA差異表達(dá)的可靠性。結(jié)果：1、造模給藥6周后,與Normal相比,Model大鼠的體重、行為學(xué)、糖水消耗量及內(nèi)臟敏感性有顯著差異,表現(xiàn)為體重增長(zhǎng)緩慢,行為學(xué)運(yùn)動(dòng)減少,糖水吸食量減少,排便數(shù)目增加,內(nèi)臟敏感性顯著增加。與Model比較,各皂苷組的外在指標(biāo)都有明顯的改善,其中百合知母皂苷的作用優(yōu)于單味皂苷的療效。2、與Normal比較,Model大鼠血清中ACTH、CGRP、VIP含量及血漿中CRF、SP、IL-1β、IL-6的含量明顯升高(P<0.01),各皂苷組均能明顯降低大鼠血清中ACTH、CGRP、VIP的含量及血漿中CRF、SP、IL-1β、IL-6的含量(P<0.05orP<0.01)；與Normal比較,Model大鼠血清中DA含量顯著降低(P<0.01),各皂苷組均明顯升高大鼠血清中DA含量(P<0.05)；與Normal相比,Model大鼠腦組織及結(jié)腸組織中5-HT的含量都有明顯的異常變化,并且結(jié)腸組織中MC數(shù)目增加、脫顆粒明顯；各皂苷治療后能明顯逆轉(zhuǎn)5-HT及MC異常變化。通過(guò)熒光定量PCR檢測(cè)結(jié)果表明,與Normal比較,Model大鼠下丘腦和結(jié)腸中CRFmRNA及其受體CRFR1mRNA表達(dá)明顯升高(P<0.01),LT能明顯降低其表達(dá)(P<0.01)；與Normal比較,Model大鼠下丘腦中CRFR2mRNA表達(dá)明顯降低(P<0.05),各皂苷組與Model比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。3、本研究首次對(duì)抑郁癥伴IBS動(dòng)物模型運(yùn)用基因芯片的方法篩選藥物回調(diào)顯著的差異表達(dá)基因,結(jié)果發(fā)現(xiàn)百合皂苷、百合知母皂苷共同回調(diào)差異倍數(shù)在1.50倍以上的基因有8條：血清類黏液蛋白1樣蛋白3基因(Ormdl3)、G蛋白調(diào)節(jié)信號(hào)19(Rgs19)、蛋白酪氨酸磷酸酶受體N2(Ptprn2)、凝乳酶(Cym)、跨膜蛋白47(Tmem47)、核糖體蛋白L37(Rp137)、鋅指CCHC型RNA結(jié)合序1(Zcrbl)、外生骨疣樣糖基轉(zhuǎn)移酶3(Extl3);本論文驗(yàn)證了Model與Normal相比差異倍數(shù)較高的兩條基因Rgs19mRNA、Ormd13mRNA的表達(dá)結(jié)果與基因芯片的結(jié)果具有一致性。結(jié)論：采用夾尾刺激、束縛刺激、慢性不可預(yù)見(jiàn)性溫和應(yīng)激刺激結(jié)合孤養(yǎng),可以成功誘導(dǎo)抑郁癥伴腸易激綜合征(IBS)大鼠模型,open-field實(shí)驗(yàn)、糖水偏好實(shí)驗(yàn)、AWR評(píng)分及排便量的變化可評(píng)價(jià)模型的有效性。百合皂苷、知母皂苷及百合知母皂苷治療抑郁癥伴IBS的機(jī)制可能與逆轉(zhuǎn)腦-腸互動(dòng)異常機(jī)制中HAP軸ACTH、CRF的含量、逆轉(zhuǎn)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)DA、5-HT的含量、逆轉(zhuǎn)神經(jīng)免疫因子IL-1β、IL-6的含量、并能減少結(jié)腸組織中MC數(shù)目有關(guān)；同時(shí)其作用機(jī)制也可能與逆轉(zhuǎn)相關(guān)腦-腸肽CGRP、VIP、SP、5-HT的含量變化和CRFmRNA及其受體CRFR1mRNA、CRFR2