輸血科作業(yè)指導(dǎo)書

PAGEPAGE1人民醫(yī)院輸血科工作制度文件編號(hào)頁號(hào)第1頁共1頁版本/修改次數(shù)第3版第0次修改輸血科作業(yè)指導(dǎo)書目錄審核人批準(zhǔn)人發(fā)布日期目錄文件編碼文件名頁碼SXK-WHCDQRMYY-SOP-1-001目錄1SXK-WHCDQRMYY-SOP-1-002ABO血型鑒定2SXK-WHCDQRMYY-SOP-1-003RH血型鑒定12SXK-WHCDQRMYY-SOP-1-004凝聚胺（polybrene）試驗(yàn)18SXK-WHCDQRMYY-SOP-1-005交叉配血試驗(yàn)21SXK-WHCDQRMYY-SOP-1-006不規(guī)則抗體篩檢和鑒定試驗(yàn)27人民醫(yī)院輸血科工作制度文件編號(hào)頁號(hào)第2頁共10頁版本/修改次數(shù)第3版第0次修改ABO血型鑒定審核人批準(zhǔn)人發(fā)布日期ABO血型鑒定一、AOB血型鑒定【原理】根據(jù)紅細(xì)胞膜表面有無A抗原和（或）B抗原，將血型分為A型、B型、AB型及O型4種?？衫眉t細(xì)胞凝集試驗(yàn)，通過正反定型準(zhǔn)確鑒定ABO血型。所謂正定型，是指用標(biāo)準(zhǔn)抗A抗原或（和）B抗原；所謂反定型，是指用標(biāo)準(zhǔn)A細(xì)胞和B型細(xì)胞來測(cè)定血清中有無相應(yīng)的抗A和（或）抗B?！驹噭?、抗A（B型血）、抗B（A型血）及抗A+B（0型血）分型血清，可購(gòu)自有合格證的商品。2、5%A、B及O型試劑紅細(xì)胞鹽水懸液，制備方法見附件。3、受檢者血清。4、受檢故里5%紅細(xì)胞鹽水懸液。【操作】1、試管法（1）取潔凈小試管（10mm×60mm）3支，分別標(biāo)明抗A、抗B和抗A+B，分別滴加抗A、抗B和抗A+B分型血清各1滴于試管底部人民醫(yī)院輸血科工作制度文件編號(hào)頁號(hào)第3頁共10頁版本/修改次數(shù)第3版第0次修改ABO血型鑒定審核人批準(zhǔn)人發(fā)布日期再用滴管分別加入受檢者5%紅細(xì)胞鹽水懸液1滴，混勻。（2）另取潔凈小試管（10mm×60mm）3支，分別標(biāo)明A、B和O分別滴加A、B和O細(xì)胞，用滴管分別輥入受檢者血清1滴于試管底部，再分別以滴管加入A、B和O型5%試劑紅細(xì)胞懸液1滴，混勻。（3）立即以1000r/min離心1min。（4）將試管輕輕搖動(dòng)，使沉于管底的紅細(xì)胞浮起，先以肉眼觀察有無凝集或溶血現(xiàn)象，如肉眼未見凝集，應(yīng)將反應(yīng)物倒于玻片上，再以低倍鏡觀察。（5）觀察結(jié)果時(shí)既要看有無凝集，更要注意凝集強(qiáng)度，此有且于A、B亞型、類B或cisAB的發(fā)現(xiàn)。（6）凝集強(qiáng)度判斷標(biāo)準(zhǔn)4+：紅細(xì)胞凝集成一大塊，血清清晰透明。3+：細(xì)胞凝集成數(shù)小塊，血清尚清晰。2+：紅細(xì)胞凝塊分散成許多小塊，周圍可見到游離紅細(xì)胞。1+：肉眼可見大顆粒，周圍有較多游離紅細(xì)胞?！溃虹R下可見數(shù)個(gè)紅細(xì)胞凝集在一起，周圍有很多游離紅細(xì)胞。MF：即混合凝集外觀（mixedfield），是指鏡下可見少數(shù)紅細(xì)胞凝集，而絕大多靈敏紅細(xì)胞仍呈分散分布。-：陰性，鏡下未見凝集，紅細(xì)胞均勻分布。人民醫(yī)院輸血科工作制度文件編號(hào)頁號(hào)第4頁共10頁版本/修改次數(shù)第3版第0次修改ABO血型鑒定審核人批準(zhǔn)人發(fā)布日期2、玻片法（1）取清潔玻片1張（或白瓷板1塊），用蠟筆劃成方格，標(biāo)明抗A、抗B和抗A+B，分別用滴管滴加抗A、抗B和抗A+B分型血清1滴相應(yīng)的方格內(nèi)，再各加受檢者2%紅細(xì)胞懸液1滴，混勻。（2）另取潔凈玻片1張（或瓷板1塊），用蠟筆劃成方格，標(biāo)明A細(xì)胞、B細(xì)胞和O細(xì)胞，用滴管各加受檢者血清1滴，再分別用滴管滴加A、B和O型試劑紅細(xì)胞懸液1滴。（3）將玻片（或白瓷板）不斷輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)，使血清與細(xì)胞充分混勻，連續(xù)約1～5min，肉眼觀察有無凝集（或溶血）反應(yīng)。如用玻片做試驗(yàn)時(shí)，也可用低倍鏡觀察結(jié)果。3、微柱凝膠血型卡法?！靖阶ⅰ?、分散血清質(zhì)量性能應(yīng)符合商品合格試劑的要求，試驗(yàn)結(jié)束后應(yīng)放置冰箱保存，以免細(xì)菌污染。2、試劑紅細(xì)胞以3個(gè)健康者同型新鮮紅細(xì)胞混合，用生理鹽水洗滌3次，以除去存在于血清中的抗體及可溶性抗原。3、試管、滴管和玻片必須清潔干燥，防止溶血。4、操作方法應(yīng)按規(guī)定，一般應(yīng)先加血清，然后再加紅細(xì)胞懸液，人民醫(yī)院輸血科工作制度文件編號(hào)頁號(hào)第5頁共10頁版本/修改次數(shù)第3版第0次修改ABO血型鑒定審核人批準(zhǔn)人發(fā)布日期以便容易核實(shí)是否漏加血清。5、IgM抗A和抗B與相應(yīng)紅細(xì)胞的反應(yīng)溫度以4℃為最強(qiáng)，但為了防止冷凝集的干擾，一般仍在室溫（20～24℃）下進(jìn)行試驗(yàn)，6、離心時(shí)間不宜過長(zhǎng)或過短，速度不宜過快或過慢，以防止出現(xiàn)假陽性或假陰性。7、觀察時(shí)應(yīng)注意紅細(xì)胞呈特異性凝集、繼發(fā)性凝固以及緡錢排列的區(qū)別。8、判斷結(jié)果后應(yīng)仔細(xì)核對(duì)、記錄，避免筆誤。表1ABO血型正反定型結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)血清+受檢者紅細(xì)胞受檢者血型受檢者血清+試驗(yàn)紅細(xì)胞抗A抗B抗A+BA細(xì)胞B細(xì)胞O細(xì)胞+-+A-+--++B+O++-+++AB注：+：凝集或溶血；-：不凝集。【正反定型結(jié)果不致的原因】有技術(shù)性問題或紅細(xì)胞和血清本身的問題，常見者有以下幾種。1、標(biāo)準(zhǔn)血清效價(jià)太低、親和和不強(qiáng)。如抗A血清效價(jià)不高，可將A亞型誤定為O型，AB型誤定為B型。人民醫(yī)院輸血科工作制度ABO血型鑒定2、紅細(xì)胞懸液過濃或過淡，抗原抗體比例不適當(dāng)，使反應(yīng)不明顯，誤判為陰性反應(yīng)。3、受檢者紅細(xì)胞上抗原點(diǎn)過少，如亞型；或抗原性減弱，見于白血病或惡性腫瘤；以及類B呈cisAB等。4、受檢者血清中蛋白紊亂（高球蛋白血癥），或?qū)嶒?yàn)時(shí)溫度過高，常引起紅細(xì)胞呈緡錢狀排列。5、受檢者血清中缺乏應(yīng)有的抗A（或）抗B抗體，如丙種球蛋白缺乏癥。6、各種原因引起的紅細(xì)胞溶解，誤判為不凝集。部分溶血時(shí)，可溶性血型物質(zhì)中和了相應(yīng)的抗體。7、由細(xì)菌污染或遺傳因素引起多凝集或全凝集，往往是正反定型不符的原因。8、血清中有ABO血型以外的抗體，如自身抗I，常引起干擾?！菊炊ㄐ徒Y(jié)果不一致的解決辦法】如發(fā)現(xiàn)ABO正反定型結(jié)果不一致，首先要重復(fù)做試驗(yàn)1次，嚴(yán)格執(zhí)行操作規(guī)程，使用質(zhì)量合格的試劑以及細(xì)心觀察結(jié)果，可解決明顯的問題，對(duì)一些疑難問題必須及時(shí)請(qǐng)示上級(jí)主管，并進(jìn)一步檢查。初步的檢查步驟如下：另從受檢者采取1份新鮮血液標(biāo)本，這樣可以糾正因污染或搞錯(cuò)標(biāo)本造成的不符合。人民醫(yī)院輸血科工作制度ABO血型鑒定2、將紅細(xì)胞洗滌數(shù)次，配成5%鹽水細(xì)胞懸液，用抗A、抗B、抗A+B及抗H做試驗(yàn)，可以得到其他有用的信息。3、對(duì)受檢紅細(xì)胞作直接抗人球蛋白試驗(yàn)，如結(jié)果是陽性，表示紅細(xì)胞已被抗體致敏。4、用A1、A2、B、O紅細(xì)胞及自身紅細(xì)胞檢查受檢血清。如果懷疑是抗I，用O型（或ABO相合的）臍血紅細(xì)胞檢查。5、如果試驗(yàn)結(jié)果未見凝集，應(yīng)將細(xì)胞及血清試驗(yàn)至少在室溫和4℃放置30min6、如疑為A抗原或B抗原減弱，則可將受檢紅細(xì)胞與抗A或抗B血清作吸收及放散試驗(yàn)，以及受檢者唾液作A、B、H血型物質(zhì)測(cè)定。后者只對(duì)80%HAB分泌型的人有用。7、如試驗(yàn)結(jié)果紅細(xì)胞呈緡錢狀排列，加等滲鹽水1滴混勻，往往可使緡錢現(xiàn)象消失。應(yīng)注意不應(yīng)先加鹽水1滴于受檢者血清呂，再加試劑紅細(xì)胞做試驗(yàn)，以免使血清中抗體被稀釋。8、如受檢者為A型血而疑為有類B抗原存在時(shí)，可用下列方法進(jìn)行鑒別。（1）觀察細(xì)胞與抗A及抗B的凝集強(qiáng)度，與抗A的反應(yīng)要比與抗B的反應(yīng)強(qiáng)。這種區(qū)別用玻片法做試驗(yàn)更為明顯。（2）用受檢者紅細(xì)胞與自身血清做試驗(yàn)，血清中的抗B不凝集自人民醫(yī)院輸血科工作制度ABO血型鑒定身紅細(xì)胞上的類B抗原。（3）檢查唾液中是否有A、B物質(zhì)，如果是分泌型，可檢出A物質(zhì)或（和）B物質(zhì)。（4）核對(duì)患者的診斷。類B抗原的形成與結(jié)腸癌、直腸癌、革蘭陰性桿菌感染有關(guān)。9、如發(fā)現(xiàn)多凝集現(xiàn)象，應(yīng)考慮由遺傳產(chǎn)生的Cad抗原活性、被酶激活的T或TK受體，或產(chǎn)生機(jī)制不太明了的Tn受體所引起。多凝集紅細(xì)胞具有以下特點(diǎn)。（1）能被人和許多家兔的血清凝集。（2）能與大多數(shù)成年人的血清凝集，不管有無相應(yīng)的同種抗體。（3）不被臍帶血清凝集。（4）通常不與自身的血清凝集。（5）如有條件可用外源凝集素加以鑒別?！靖健緼、B、O試驗(yàn)紅細(xì)胞懸液的制備1、分別采取已知A、B、O三種血型的紅細(xì)胞，經(jīng)鹽水洗滌3次，以壓緊紅細(xì)胞配成不同濃度的紅細(xì)胞懸液（表2）表2紅細(xì)胞懸液的配制人民醫(yī)院輸血科工作制度ABO血型鑒定懸液濃度（%）壓實(shí)紅細(xì)胞（滴）鹽水（滴）25102011112.0ml(40)0.8ml(16)0.4ml(8)0.2ml(4)2、為了防止紅細(xì)胞懸液敏感性不一致，可隨機(jī)采取3個(gè)以上的健康成人血液，按A、B、O型分別混合后，按上法制備。3、如條件許可，可分別制備A1、A2，及其他亞型的紅細(xì)胞懸液，以供ABO亞型鑒定時(shí)參考。4、如欲將紅細(xì)胞保存，應(yīng)嚴(yán)格注意無菌技術(shù)采取血液，以ACD保存液按4：1抗凝，置4℃冰箱可保存3周，臨用時(shí)取出一部分經(jīng)鹽水洗滌后配制成需的濃度。如以紅細(xì)胞保存液保存，在4℃下可保存4～5周。紅細(xì)胞保存液的配法：5.4%葡萄糖液640ml及109mmol/L枸櫞酸鈉264ml混合后，如新配的1%硫柳汞液1.8ml，經(jīng)高壓滅菌的（110℃二、A1和A2亞型鑒定【原理】根據(jù)ABO血型的血清學(xué)特點(diǎn)，A型和AB型可分為A1、A2、A1B、A2B亞型?？?A（B型）血清中含有抗A和抗A1兩種抗體；抗A可以凝集人民醫(yī)院輸血科工作制度ABO血型鑒定所有A型和AB型紅細(xì)胞，而抗A1只能與一部分A型和AB型紅細(xì)胞反應(yīng)。因此，凡與抗A1反應(yīng)者被鑒定為A2或A1B型；不與抗A1反應(yīng)而與抗A反應(yīng)者被鑒定為A2或A2B型?！驹噭?、抗A1分型血清。2、受檢者5%紅細(xì)胞鹽水懸液。3、已知A1和A2型5%紅細(xì)胞鹽水懸液?！静僮鳌?、取潔凈玻片兩張，一張供測(cè)定受檢者紅細(xì)胞用，另一張供對(duì)照用，兩者各標(biāo)明A1和A2。2、將抗A1分型血清分別滴在受檢者玻片上和對(duì)照的A1和A2部分各1滴。3、分別將受檢者紅細(xì)胞懸液以及對(duì)照用A1和A2紅細(xì)胞懸液1滴滴在上述抗A1血清上，用玻棒將血清和紅細(xì)胞懸液混勻。4、徐徐轉(zhuǎn)動(dòng)玻片，在室溫下反應(yīng)10min后觀察結(jié)果。5、如A1對(duì)照紅細(xì)胞凝集而A2對(duì)照紅細(xì)胞不凝，則受檢者紅細(xì)胞凝集者為A1，不凝者為A2?！靖阶ⅰ?、A1與A2紅細(xì)胞究竟為質(zhì)的不同，還是量的不同，各有依據(jù)。因此，檢查時(shí)必須掌握反應(yīng)時(shí)間。2、如A1和A2對(duì)照紅細(xì)胞都凝集，表示抗A1血清有問題；如A1人民醫(yī)院輸血科工作制度ABO血型鑒定和A2對(duì)照紅細(xì)胞都不凝集，則再觀察一些時(shí)間，如始終不顯凝集，也說明抗A1血清有問題。新生兒紅細(xì)胞ABO血型抗原較弱，不宜作亞型鑒定。修改狀態(tài)/日期修改記錄修改代號(hào)修改單號(hào)修改人/日期人民醫(yī)院輸血科工作制度Rh血型鑒定Rh血型鑒定Rh血型系統(tǒng)通過輸血或妊娠可產(chǎn)生免疫性抗體，當(dāng)遇有相應(yīng)抗原，可致溶血反應(yīng)或新生兒溶血病。若誤診誤治，可導(dǎo)致患者死亡或死亡。臨床輸血時(shí)，一般需作Rh血型鑒定。一、Rh血型鑒定【原理】從理論上講人類紅細(xì)胞上的Rh抗原應(yīng)有C、c、D、d、E、e6種，但目前尚未發(fā)現(xiàn)抗d，因此也未肯定d抗原，故Rh抗原主要有5種。Rh血型形成的天然性抗體極少，主要是免疫性抗體，已知有抗D、抗E、抗C、抗c和抗e抗體等5種?？笵抗體是Rh血型系統(tǒng)中最常見的抗體。Rh抗體有完全抗體和不完全抗體兩種，完全抗體在機(jī)體受抗原刺激則產(chǎn)生不完全抗體，屬IgM型。機(jī)體再次受抗原刺激，則產(chǎn)生不完全抗體，屬IgG型。Rh抗體主要是不完全抗體，如用5種不完全抗體的血清（抗D、抗E、抗C、抗c、抗e）作鑒定，可將Rh血型系統(tǒng)分為18個(gè)型別。在臨床上，因D抗原的抗原性最強(qiáng)，出現(xiàn)頻率高，臨床意義又較大，故一般只作D抗原的血型鑒定。如僅用抗D血清進(jìn)行鑒定，則凡帶有D抗原者稱為Rh陽性，不帶D抗原者稱為Rh陰性。【試劑】1、Rh抗血清。人民醫(yī)院輸血科工作制度Rh血型鑒定（1）5種不完全Rh抗血清（IgG）。（2）單克隆Rh抗血清（IgM/IgG）。2、5%受檢者紅細(xì)胞鹽水懸液。3、0.067mol/L磷酸鹽緩沖液（pH5.5），由0.067mol/LNa2HPO45ml加0.067mol/LKH2PO495ml混合而成。4、1%菠蘿酶（或木瓜酶）溶液稱取菠蘿酶1.0g，溶解于0.067mol/L磷酸鹽緩沖液（pH5.5）100ml內(nèi)。5、5%Rh陽性紅細(xì)胞和5%Rh陰性紅細(xì)胞懸液各1份?！静僮鳌?、酶法取小試管（10mm×60mm）5支，用蠟筆標(biāo)記，分別加上述5種抗血清各1滴，再加5%受檢者紅細(xì)胞鹽水懸液及1%菠蘿酶試劑各1滴，混勻，置372、鹽水法取小試管（10mm×60mm）5支，蠟筆標(biāo)記，分別加5種克隆3、4、結(jié)果判定如陽性對(duì)照管凝集，陰性對(duì)照管不凝集，受檢者凝人民醫(yī)院輸血科工作制度Rh血型鑒定集，即表示受檢者紅細(xì)胞上有相應(yīng)抗原；受檢者不凝集，即表示受檢紅細(xì)胞上沒有相應(yīng)抗原。用5種抗Rh血清的檢查結(jié)果可能有18種表型（表4）表4用5種抗Rh血清檢查結(jié)果判定與各抗血清的反應(yīng)受檢者Rh表型Rh陽性或陰性抗C抗c抗D抗E抗e臨床上通稱血清學(xué)區(qū)分+++++CcDEeRh陽性Rh陽性+—+—+CCDeeRh陽性Rh陽性+++—+CcDeeRh陽性Rh陽性+—++—CCDEERh陽性Rh陽性—++——ccDEERh陽性Rh陽性—++—+ccDeeRh陽性Rh陽性—++++ccDEeRh陽性Rh陽性+—+++CCDEeRh陽性Rh陽性++++—CcDEERh陽性Rh陽性+———+CCdeeRh陰性Rh陽性—+—+—ccdEERh陰性Rh陽性++—++CcdERh陰性Rh陽性++——+CcdeeRh陰性Rh陽性—+—++ccdEeRh陰性Rh陽性+——+—CCdEERh陰性Rh陽性+——++CCdEeRh陰性Rh陽性++—+—CcdEERh陰性Rh陽性—+——+ccdeeRh陰性Rh陰性5、微柱凝膠血型卡法詳見本章第四節(jié)第六部分。人民醫(yī)院輸血科工作制度Rh血型鑒定【附注】1、單克隆IgMRh抗血清有商品試劑供應(yīng)，可用鹽水介質(zhì)做凝集試驗(yàn)?？寡澹↖gM）1滴，加5%受檢者紅細(xì)胞懸液1滴，混合，置372、如臨床上只要求檢查是否為Rh（D）陽性還是陰性，只需用抗D血清進(jìn)行鑒別。如結(jié)果為陰性，則應(yīng)進(jìn)一步檢查排除弱D。3、在我國(guó)漢族人群中，Rh陽性占99.66%，Rh陰性占0.34%。4、陽性對(duì)照可取3人O型紅細(xì)胞混合配成。陰性對(duì)照不易得到，一般設(shè)計(jì)方法為正常AB型血清1滴，加5%D陽性紅細(xì)胞懸液1滴和菠蘿酶試劑1滴混勻，與受檢者一同置375、Rh血型鑒定應(yīng)嚴(yán)格控制溫度與時(shí)間，因Rh抗原、抗體凝集反應(yīng)時(shí)，凝塊比較脆弱，觀察反應(yīng)結(jié)果時(shí)，應(yīng)輕輕側(cè)動(dòng)試管，不可用力振搖。6、如鑒定結(jié)果只與抗D血清起反應(yīng)，而與抗C、抗c，抗E和抗e都不凝集，則受檢者為Rh缺乏型，以-D-表示?！炯訇栃苑磻?yīng)原因分析】1、試劑中存在具有其他特異性的抗體（指不完全抗D抗體），因此，對(duì)疑難抗原定型時(shí)，建議用不同來源的抗血清同時(shí)做兩份試驗(yàn)。因?yàn)槭褂脙煞萏禺愋韵嗤目寡宓玫讲灰恢碌慕Y(jié)果時(shí)，就會(huì)使檢驗(yàn)人員意識(shí)到有進(jìn)一步試驗(yàn)的必要。人民醫(yī)院輸血科工作制度Rh血型鑒定2、多凝集紅細(xì)胞與任何人血清都會(huì)發(fā)生凝集。3、當(dāng)用未經(jīng)洗滌的細(xì)胞做試驗(yàn)時(shí)，試樣中的自身凝集和異常蛋白質(zhì)可能引起假陽性結(jié)果。4、試劑瓶可能被細(xì)菌、外來物質(zhì)或其他抗血清所污染?！炯訇幮苑磻?yīng)原因分析】1、搞錯(cuò)抗血清每次試驗(yàn)時(shí)應(yīng)細(xì)心核對(duì)抗血清瓶子上的標(biāo)簽。2、試管中漏加抗血清在加入細(xì)胞懸液之前，必須檢查試管中有無抗血清。3、某種特定的抗血清不能和其相應(yīng)抗原的變異型起反應(yīng)。例如，抗D血清與弱D抗原，紅細(xì)胞不起凝集；抗E血清可能與Eu紅細(xì)胞反應(yīng)微弱，甚至完全無反應(yīng)。4、如某種抗血清含有主要對(duì)抗Rh復(fù)合抗原的抗體，則可能與獨(dú)立的基因產(chǎn)物的個(gè)別抗原不發(fā)生反應(yīng)。這在抗C血清最為常見，因?yàn)楹芏嗫笴血清含有反應(yīng)性更強(qiáng)的抗Ce成分。如受檢者為CDE/cde，其反應(yīng)可能明顯減弱，或完全不反應(yīng)。5、未遵照抗血清使用說明書做試驗(yàn)，如抗血清和細(xì)胞間的比例以及溫育的溫度和時(shí)間不正確。6、抗血清保存不妥，試劑中的免疫球蛋白變質(zhì)。人民醫(yī)院輸血科工作制度Rh血型鑒定修改狀態(tài)/日期修改記錄修改代號(hào)修改單號(hào)修改人/日期人民醫(yī)院輸血科工作制度凝聚胺（polybrene）試驗(yàn)?zāi)郯罚╬olybrene）試驗(yàn)【原理】本試驗(yàn)主要用以測(cè)定患者血清中具有臨床意義的紅細(xì)胞同種抗體，它具有敏感性高及快速等優(yōu)點(diǎn)。1983年Fisher報(bào)告，比較鹽水試驗(yàn)、木瓜酶試驗(yàn)，低離子鹽水試驗(yàn)及凝聚胺（polybrene）試驗(yàn)等4種方法發(fā)現(xiàn)，凝聚胺試驗(yàn)測(cè)出同種抗體的敏感度高出其他方法2～250倍，而且快速。凝聚胺試驗(yàn)現(xiàn)已應(yīng)用于血型檢查、抗體測(cè)定、抗體鑒定以及交叉配血試驗(yàn)。凝聚胺（polybrene）試劑目前國(guó)內(nèi)市場(chǎng)有售。1.操作1.取試管兩支，標(biāo)明主側(cè)次側(cè)，主側(cè)管加受血者血清(血漿)1滴，和供血者3～5％紅細(xì)胞懸液(洗滌或不洗滌均可)1滴，次側(cè)管受血者3～5％紅細(xì)胞懸液(洗滌或不洗滌均可)l滴，加供血者血清(血漿)1滴。2.各加LIM溶液3滴，混合均勻后，再各加Polybrene溶液1滴并混合均勻，置室溫1分鐘或參照說明書。3．普通離心機(jī)1000g離心15秒，然后把上清液倒掉，不要瀝干，讓管底殘留約0.1ml液體。4．輕輕搖動(dòng)試管，目測(cè)紅細(xì)胞有無凝集，如無凝集，則必須重作。5．最后加入Resuspending2滴，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)試管混勻并同時(shí)觀察結(jié)果。6.結(jié)果判定：如果在30秒內(nèi)（或按說明書）凝集散開，代表是由Polybrene引起的非特異性聚集，配血結(jié)果相合；如凝集不散開，則為人民醫(yī)院輸血科工作制度凝聚胺（polybrene）試驗(yàn)紅細(xì)胞抗原抗體結(jié)合的特異性反應(yīng)，配血結(jié)果不相合。如反應(yīng)可疑可進(jìn)一步倒在玻片上用顯微鏡觀察。2.注意事項(xiàng)4.在冬天室溫極低的情況下進(jìn)行交叉配血試驗(yàn)操作，由于某些受者血清中可能含有寒冷凝集素等因素，而導(dǎo)致假陽性的結(jié)果出現(xiàn)，建議進(jìn)行交叉配血試驗(yàn)操作時(shí)室溫保持在22℃左右，最后滴加Resuspending時(shí)，將試管立即置入37℃5．不同的凝聚胺試劑盒操作方法各不相同，實(shí)驗(yàn)時(shí)請(qǐng)嚴(yán)格按照說明書操作。2.方法學(xué)評(píng)價(jià)人民醫(yī)院輸血科工作制度凝聚胺（polybrene）試驗(yàn)修改狀態(tài)/日期修改記錄修改代號(hào)修改單號(hào)修改人/日期人民醫(yī)院輸血科工作制度交叉配血試驗(yàn)交叉配血試驗(yàn)【原理】交叉配血主要是檢查受血者血清中有無破壞供血者紅細(xì)胞的抗體，故受血者血清加供血者紅細(xì)胞相配的一管稱為“主側(cè)”；供血者血清加受血者紅細(xì)胞相配對(duì)的一管稱為“次側(cè)”，兩者合稱交叉配血。交叉配血試驗(yàn)又稱不配合性試驗(yàn)，是確?；颊甙踩斞夭豢缮俚脑囼?yàn)，完整的操作規(guī)程應(yīng)包括：（1）查閱受血者以前的血型檢查記錄，如與這次檢查結(jié)果不所不同，應(yīng)及時(shí)分析原因；（2）對(duì)收到的受血者血樣應(yīng)作ABO正反定型，必要時(shí)作Rh血型和其他血型檢查以及血型抗體檢測(cè)和鑒定；（3）選擇預(yù)先進(jìn)行血型檢查的合格供血者作交叉配血試驗(yàn)。一、交叉配血方法（一）鹽水介質(zhì)配血法本法是目前最常用的配血方法，可以發(fā)現(xiàn)臨床上最重要的ABO不配合性。當(dāng)受血者和供血者細(xì)胞經(jīng)混合并離心后，如有ABO不配合問題，就會(huì)很快顯示出來，所以常稱為“立即離心”（immediatespin）配血試驗(yàn)。【操作】1、抽取受血者靜脈血3—4ml，待凝固后分離血清，并制備2%鹽水懸液。人民醫(yī)院輸血科工作制度交叉配血試驗(yàn)2、將供血者同樣以同樣方法分離血清，并配制2%紅細(xì)胞懸液。3、取潔凈小試管（10mm×60mm）2支，1支標(biāo)明受血者血清（PS）+供血者細(xì)胞（DC）或“主側(cè)”，另1支標(biāo)明供血者血清（DS）+受血者細(xì)胞（PC）或“次側(cè)”。4、按標(biāo)記“主側(cè)”管加受血者血清1滴和供血者紅細(xì)胞懸液1滴。“次側(cè)”管加供血者血清1滴和受血者紅細(xì)胞懸液1滴。混勻，以1000r/min離心1min，輕輕側(cè)動(dòng)試管，觀察結(jié)果。冬季室溫較低，應(yīng)將試管保溫，以防冷凝集素引起起的凝集反應(yīng)影響結(jié)果判斷?！靖阶ⅰ?、鹽水介質(zhì)配血法也可用玻片進(jìn)行操作。2、如鹽水介質(zhì)配血結(jié)果陰性，可將原標(biāo)本接著做酶法或抗人球蛋白法配血。（二）酶技術(shù)配血法國(guó)內(nèi)以木瓜酶或菠蘿酶為常用。本法敏感性高，對(duì)Rh血型抗體的人民醫(yī)院輸血科工作制度交叉配血試驗(yàn)檢出尤為顯著，操作簡(jiǎn)便，試劑也容易購(gòu)到，故一般實(shí)驗(yàn)室均應(yīng)建立。【操作】1、取潔凈試管2支，標(biāo)明“主側(cè)”和“次側(cè)”。“主側(cè)”加受血者血清和供血者2%紅細(xì)胞鹽水懸滴各1滴，“次側(cè)”加供血者血清和受血者2%紅細(xì)胞鹽水懸液各1滴，二管各加1%木瓜酶（或菠蘿酶）液1滴。2、混合，置37℃3、陽性對(duì)照已知IgG抗D血清1滴加2%D陽性紅細(xì)胞懸液1滴，再加酶液1滴。陰性對(duì)照：AB型血清1滴加2%D陽性紅細(xì)胞懸液1混同，再加酶液1滴，同時(shí)進(jìn)行試驗(yàn)?！靖阶ⅰ棵富盍?jiǎn)易測(cè)定法：取0.067mol/L，pH6.2磷酸鹽緩沖液與脫脂牛奶等量混合，放在37℃溫箱加溫，吸出上述混合液1滴于玻片上，加1%酶液1滴，混合，觀察結(jié)果。在10—20s有絮狀物出現(xiàn)表示酶有活力，可供應(yīng)用。若在20s后出現(xiàn)絮狀物，表示該酶活力差。若做試驗(yàn)時(shí)，則延長(zhǎng)觀察結(jié)果時(shí)間，若酶活力減低50%，則此酶液不能應(yīng)用。（三）抗人球蛋白配血法【操作】人民醫(yī)院輸血科工作制度交叉配血試驗(yàn)取試管2支，分別標(biāo)明“主側(cè)”和“次側(cè)”，“主側(cè)”管加受血者血清2滴和供血者5%紅細(xì)胞鹽水懸液1滴；“次側(cè)”管加供血者血清2滴和受血者5%紅細(xì)胞懸液1滴。2、混合，置37℃3、加最適稀釋度抗人蛋白血清1滴，混勻，1000r/min離心1min，觀察結(jié)果。4、陽性對(duì)照5%不完全抗D致敏的Rh陽性紅細(xì)胞懸液1滴，加抗人球蛋白血清1滴；陰性對(duì)照：5%O型紅細(xì)胞懸液1滴，加抗人球蛋白血清1滴；鹽水對(duì)照：1管供血者5%紅細(xì)胞鹽水懸液1滴加等滲鹽水1滴；另1管受血者5%紅細(xì)胞鹽水懸液1滴加等滲鹽水1滴。5、結(jié)果判定如陽性對(duì)照管凝集，陰性對(duì)照管、鹽水對(duì)照管不凝集，“主側(cè)”、“次側(cè)”配血管都不凝集，表示無輸血禁忌。（四）LISS配血法【原理】降低介質(zhì)的離子強(qiáng)度，降低紅細(xì)胞的Zeta電位可以增加抗原抗體結(jié)合，使原來在鹽水介質(zhì)中不能凝集紅細(xì)胞的抗體能夠發(fā)生凝集。如用于間接抗人球蛋白試驗(yàn)，可加快反應(yīng)的速度，縮短保溫的時(shí)間。在配血試驗(yàn)中使用LISS有2種方法：一種是直接以LISS配制紅細(xì)胞懸液，另一種是把LISS加到血清和鹽水懸浮的細(xì)胞混合物中。人民醫(yī)院輸血科工作制度交叉配血試驗(yàn)【操作】1、將供血者和受血者紅細(xì)胞用鹽水洗滌2次，再用LISS洗滌1次，并用LISS配成5%紅細(xì)胞懸液。2、取潔凈小試管2支，分別標(biāo)明“主側(cè)”和“次側(cè)”，“主側(cè)”加受血者血清2滴和供血者5%LISS紅細(xì)胞懸液1滴；“次側(cè)”加供血者血清2滴和受血者5%LISS紅細(xì)胞1滴。3、立即以1000r/min離心1min，檢查上清液有無溶血，再輕輕側(cè)動(dòng)試管，觀察有無凝集，并記錄結(jié)果。4、置37℃5、再立即以1000r/min離心1min，檢查上清液有無溶血，再輕輕側(cè)動(dòng)試管，觀察有無凝集，并記錄結(jié)果。6、用鹽水洗滌紅細(xì)胞3次，倒盡末次洗液，加最適稀釋度抗人球蛋白血清1滴，混勻。7、以1000r/min離心1min，觀察有無凝集，記錄結(jié)果。8、對(duì)試驗(yàn)結(jié)果陰性，加IgG致敏紅細(xì)胞1滴，經(jīng)離心后檢查有無凝集，如不見凝集，表示結(jié)果無效，須全部重做。9、結(jié)果判定在交叉配血的任何步驟中，不見溶血和（或）凝集者表示交叉配血相合。（五）微柱凝膠卡配血法二、交叉配血試驗(yàn)中的不配合問題交叉配血試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)有不配合的，首先應(yīng)考慮受血者和供血者的人民醫(yī)院輸血科工作制度交叉配血試驗(yàn)ABO定型是否有錯(cuò)，必須重新鑒定血型，必要時(shí)進(jìn)行Rh血型檢定及抗體篩檢。其次，應(yīng)注意有無特異性同種抗體、特異性未知的同種抗體存在?；颊叩难迦粼谑覝亍?7℃或抗人球蛋白血清中凝集所有的其他紅細(xì)胞，造成交叉配血的困難時(shí)，應(yīng)及時(shí)請(qǐng)示上級(jí)主管或主任。必要時(shí)請(qǐng)求上級(jí)血液中心指導(dǎo)和解決問題。【附注】血液樣本的保留和貯存受血者和供血者的血液樣本必須密封或蓋緊，在每次輸血之后，在2—6℃保存至少3—7天。供血者的樣本也許是實(shí)際上用于交叉配血后剩余部分，或者在臨發(fā)出血袋前取下的一節(jié)管段。如果保留的是已用的管段，必須將它放置在密封的或者加塞的試管中，而發(fā)血前取下的完整管段則不必這樣做，在它已經(jīng)是密封的。如果患者在輸血中發(fā)生不良反應(yīng)，或在輸血后數(shù)天內(nèi)發(fā)生遲發(fā)性溶知性輸血反應(yīng)時(shí)，保存的患者和供血者的血樣就有可能要重做或追加試驗(yàn)，必要時(shí)對(duì)發(fā)生溶血性輸血反應(yīng)的患者重新采取血樣與輸血前患者血樣同時(shí)檢查，以資比較。修改狀態(tài)/日期修改記錄修改代號(hào)修改單號(hào)修改人/日期人民醫(yī)院輸血科工作制度不規(guī)則抗體篩檢和鑒定試驗(yàn)不規(guī)則抗體篩檢和鑒定試驗(yàn)【原理】本試驗(yàn)是一種檢測(cè)血清中不完全抗體或補(bǔ)體的方法。即用已知抗原的紅細(xì)胞測(cè)定受檢血清各相應(yīng)的不完全抗體；或用已知抗體的抗血清測(cè)定受檢紅細(xì)胞上相應(yīng)的抗原。常用于血型鑒定，抗體的檢出和鑒定、輸血前交叉配血試驗(yàn)以及其他特殊研究。操作步驟1）將準(zhǔn)備好的檢測(cè)卡做好標(biāo)記；2）分離被檢者血清；3）將0.8%Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ篩檢紅細(xì)胞各50μl分別加入對(duì)應(yīng)的微管中；4）將各待檢者血清分別加入Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ微管中，各50μl；5）376）離心5min（900rpm2min，1500rpm3min）；7）肉眼觀察結(jié)果。結(jié)果判定（以Rh血型系統(tǒng)為例）：根據(jù)所提供的篩檢紅細(xì)胞或譜紅細(xì)胞的反應(yīng)格局來判定結(jié)果：待檢者1血清中可能含有抗E待檢者2血清中可能含有抗C、抗E編號(hào)Rh-hrKiddMNSDuffyKiegoKellLewisPDCEceJKaJKbMNSsFyaFybDiaKkLeaLebP1Ⅰ++－+++++++－－－+++Ⅱ+－++++－+++－－－+++Ⅲ++－+++++++++－－++人民醫(yī)院輸血科工作制度不規(guī)則抗體篩檢和鑒定試驗(yàn)影響不規(guī)則抗體篩檢結(jié)果判定的因素和結(jié)果分析1）假陽性反應(yīng)：（1）人血清存在其他特異性的抗體。偶爾存在的低頻率（小于1%）抗體可以引起假陽性反應(yīng)（2）試劑瓶中試劑可能被細(xì)菌或其他外界物質(zhì)污染，應(yīng)注意并不是所有的細(xì)菌污染都引起試劑液體混濁。2）假陰性反應(yīng)：（1）紅細(xì)胞濃度過高，可減弱凝集強(qiáng)度；（2）未能識(shí)別相應(yīng)抗原的變異紅細(xì)胞；（3）未按使用說明書正確保存和使用試劑；（4）離心轉(zhuǎn)速過大以致弱凝集沉到管底；（5）細(xì)菌污染，不適當(dāng)儲(chǔ)存或過期都能使試劑失效。1、血型不完全抗體檢測(cè)卡操作程序——交叉配血試驗(yàn)操作步驟：1）將準(zhǔn)備好的檢測(cè)卡做好標(biāo)記；2）將受血者與獻(xiàn)血者的紅細(xì)胞和血清分離，分別將受血者與獻(xiàn)血者紅細(xì)胞配成0.8%懸液；3）將獻(xiàn)血者紅細(xì)胞懸液50μl與受血者血清50μl先后加入主側(cè)管中；4）將受血者紅細(xì)胞縣液50μl與獻(xiàn)備者血清50μl先后加入次側(cè)人民醫(yī)院輸血科工作制度不規(guī)則抗體篩檢和鑒定試驗(yàn)管中；5）376）離心5min（900rpm2min，1500rpm3min）；7）肉眼觀察結(jié)果。結(jié)果判定：1）陰性