《GB-T馬鈴薯葉及其加工制品中茄尼醇的含量測定 高效液相色譜-質(zhì)譜法》征求意見稿

GB

中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)

GB/TXXX-XXX

馬鈴薯葉及其加工制品中茄尼醇的含量

測定高效液相色譜-質(zhì)譜法

DeterminationofSolanesolinpotatoleavesanditsprocessedproducts-----Highperformanceliquid

chromatography-massspectrometry

XXX-XX-X發(fā)布XXX-XX-XX實(shí)施

中華人民共和國標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會發(fā)布

馬鈴薯葉及其加工制品中茄尼醇的含量測定

高效液相色譜-質(zhì)譜法

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了馬鈴薯葉及其加工制品中總茄尼醇含量的高效液相色譜-質(zhì)譜測定方法。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于馬鈴薯葉及馬鈴薯葉提取物中總茄尼醇含量的測定

2規(guī)范性引用文件

下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。

GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法

GB/T8855新鮮水果和蔬菜取樣方法

GB/T31758煙葉和煙葉提取物中茄尼醇的測定高效液相色譜法

3原理

用正己烷提取馬鈴薯葉中的茄尼醇（包含酯態(tài)），總茄尼醇用氫氧化鈉皂化以釋放出結(jié)合態(tài)的茄尼

醇，然后用水去除雜質(zhì)，離心分離，取上層溶液用流動相稀釋定容，經(jīng)微膜過濾后用高效液相色譜-質(zhì)

譜儀測定，外標(biāo)法定量計算。

4試劑

4.1正己烷（C6H14）：分析純。

4.2甲醇（CH4O）：色譜純。

4.3異丙醇（C3H8O）：色譜純。

4.4氫氧化鈉（NaOH）：分析純。

4.5無水乙醇（C2H6O）分析純。

4.6茄尼醇標(biāo)準(zhǔn)品：純度≥99%。

4.7NaOH乙醇溶液（0.02mol/L）：稱取0.4g氫氧化鈉（4.4），溶于無水乙醇（4.5），用無水乙醇稀

釋至500mL，儲存于聚乙烯瓶中，旋緊瓶蓋。

4.8流動相：甲醇（4.2）：異丙醇（4.3）=50:50（體積比），使用前經(jīng)濾膜過濾,超聲脫氣。

4.9茄尼醇標(biāo)準(zhǔn)儲備液（500μg/mL）：稱取50mg茄尼醇標(biāo)準(zhǔn)品（4.6），至于100mL容量瓶（5.9）種，

精確至0.0001g，用正己烷（4.1）溶解并定容至刻度線，混勻。標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液避光保存于4℃冰箱備用，

有效期3個月。

4.10茄尼醇系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：分別準(zhǔn)確移取0.01mL、0.5mL、1.0mL、5.0mL茄尼醇標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液

（4.9）于不同的50mL容量瓶（5.9）中，用流動相（4.8）稀釋至定容刻度線，搖勻，得到茄尼醇系列

標(biāo)準(zhǔn)工作溶液（質(zhì)量濃度分別為0.1μg/mL、1μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、50μg/mL）。

4.11除另外有規(guī)定外，所用試劑均為分析純，水應(yīng)符合GB/T6682中一級水的要求。

5儀器和設(shè)備

5.1濾膜：0.22μm，直徑25mm的有機(jī)系濾膜或者相當(dāng)者。

5.2渦旋振蕩器。

5.3超聲波清洗器：功率不低于250W，或相當(dāng)?shù)脑O(shè)備。

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5.4離心機(jī)：不低于4000r/min，或相當(dāng)?shù)脑O(shè)備。

5.5恒溫振蕩器：可水浴加入（0℃~100℃）。

5.6高效液相色譜-質(zhì)譜儀：ACCELA高效液相色譜儀、TSQQuantumAccessMAX三重四極桿質(zhì)譜儀

（賽默飛世爾科技有限公司）

5.7電子天平：感量0.0001g。

5.8離心管：50mL（螺旋蓋），10mL（具塞）。

5.9容量瓶：100mL，50mL，25mL（棕色）。

5.10三角瓶：100mL（具塞、棕色）。

6測定步驟

注：本章所述操作盡可能避免陽光直射。

6.1樣品前處理

6.1.1馬鈴薯葉

6.1.1.1試樣制備

參照GB/T8855中取樣過程。

6.1.1.2提取

稱取約1g試樣（6.1.1.1）于50mL離心管（5.8）中，精確至0.0001g，加入30mL正己烷（4.1），

用渦旋振蕩器（5.2）渦旋振蕩2min，旋緊蓋子，靜置30min后，用超聲波清洗器(5.3)于45℃超聲波萃

?。?.9）中。再分2次各用10mL正己烷（4.1）重復(fù)以上振蕩、萃取和離心步驟，合并上層正己烷層于

50mL容量瓶(5.9)中，用正己烷（4.1）定容至刻度線，搖勻。

6.1.1.3茄尼醇測定試樣處理

準(zhǔn)確移取4mL提取液（6.1.1.2）于100mL三角瓶（5.10）中，加入4mLNaOH乙醇溶液（4.7），充

分混勻，輕塞塞子，在恒溫振蕩器（5.5）中60~65℃水浴振蕩、皂化2h；皂化后溶液在83~87℃水浴

蒸發(fā)至近干；準(zhǔn)確移取2mL正己烷于上述三角瓶中，超聲2min溶解殘渣，轉(zhuǎn)移至另一潔凈10mL離心管

（5.8）中。

重復(fù)以上自“準(zhǔn)確移取2mL正己烷”起按照正確的操作規(guī)程，溶解三角瓶中殘留物轉(zhuǎn)移至離心管

（5.8）中，再用約6mL水，每次2mL分三次洗滌三角瓶，合并溶液于離心管（5.8）中；渦旋振蕩器離

心管2min以去除水溶性雜質(zhì)，離心10min分層；準(zhǔn)確移取1mL凈化后上層正己烷提取液，用流動相（4.8）

稀釋合適的倍數(shù)（如茄尼醇濃度超出標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍，則適當(dāng)調(diào)整移取體積和定容體積），經(jīng)（5.1）

濾膜過濾，濾液待上機(jī)測定。

6.1.2馬鈴薯葉提取物

分別稱取約0.1g（精確到0.0001g）馬鈴薯葉提取物1（70%提取液）、馬鈴薯葉提取物2（15%提取

液）置于10ml燒杯中，用正己烷溶解，并轉(zhuǎn)移至50mL的棕色容量瓶（5.9）中，用正己烷定容，搖勻。

再根據(jù)6.1.1.3的實(shí)驗(yàn)步驟測定馬鈴薯葉提取物中的茄尼醇含量。

6.2樣品測定

6.2.1高效液相色譜-質(zhì)譜參考條件

按照制造商操作手冊運(yùn)行高效液相色譜-質(zhì)譜儀（5.6）。以下分析條件可供參考，采用其他條件應(yīng)

驗(yàn)證其適用性：

3

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液相色譜條件：

色譜柱：C18，150mm×2.1mm（內(nèi)徑），粒徑3.5μm，或性能相當(dāng)者；

流動相：甲醇+異丙醇（50%+50%）

進(jìn)樣體積：10μL；

柱溫：35℃；

流速：0.4mL/min；

洗脫時間：8min；

質(zhì)譜條件：

離子掃描模式：正離子全掃模式；母離子m/z為653.6；

毛細(xì)管溫度(CapillaryTemperature)：350℃；

霧化溫度(VaporizerTemperature)：300℃；

鞘氣壓力(SheathGasPressure)：35Arb；

噴霧電壓(SprayVoltage)：3500V；

套管透鏡電壓（Tubelens）：91V；

6.2.2液相色譜-質(zhì)譜測定

分別取適量的茄尼醇系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液（4.10）及待上機(jī)試樣溶液，按照6.2.1列出的條件進(jìn)行液相

色譜-質(zhì)譜分析測定。由保留時間和m/z對茄尼醇進(jìn)行定性，根據(jù)茄尼醇標(biāo)準(zhǔn)工作溶液響應(yīng)信號，建立標(biāo)

準(zhǔn)工作曲線，工作曲線線性相關(guān)系數(shù)R2≥0.997，對試樣的茄尼醇含量進(jìn)行定量計算。

待測樣液中茄尼醇的響應(yīng)值應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍內(nèi)，超過線性范圍則應(yīng)稀釋后再進(jìn)行分析。分析

過程中，每20次樣品測定后應(yīng)加入一個與樣品峰面積相近的標(biāo)準(zhǔn)工作液，如果測得的值與原值相對平均

偏差超過5%，則應(yīng)重新進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作。標(biāo)準(zhǔn)曲線及典型樣品色譜圖參見附錄A。

7結(jié)果計算與表示

7.1結(jié)果計算

馬鈴薯葉干基樣品中茄尼醇的含量按下式進(jìn)行計算：

式中：

X—試樣中茄尼醇的含量（以質(zhì)量分?jǐn)?shù)計），單位為毫克每克（mg/g）；

c—由標(biāo)準(zhǔn)工作曲線得出的茄尼醇濃度，單位為微克每毫升（μg/mL）；

V—試樣最終定容體積，單位為毫升（mL）；

f—試樣稀釋倍數(shù)；

m—試樣質(zhì)量，單位為克（g）；

w—馬鈴薯葉中水分的質(zhì)量分?jǐn)?shù)。

7.2結(jié)果表示

測定結(jié)果以平均測定的算術(shù)平均值表示，計算結(jié)果保留兩位有效數(shù)字。兩次平行測定結(jié)果的相對平

均偏差不應(yīng)超過5%。

8精密度和回收率

本方法的精密度和回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果參見附錄B。

9檢出限

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該方法對茄尼醇檢出限為0.1μg/g，定量限為0.3μg/g。

10檢驗(yàn)報告

檢驗(yàn)報告應(yīng)包括以下內(nèi)容：

—識別被測試樣需要的所有信息；

—依據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)方法（本標(biāo)準(zhǔn)編號）；

—茄尼醇的測定結(jié)果；

—實(shí)驗(yàn)日期；

—測定人員。

此外，還需說明使用的方法，還應(yīng)包括本標(biāo)準(zhǔn)未規(guī)定的或選擇性的條件，以及可能影響結(jié)果的其他

條件。測試報告應(yīng)包括試樣的唯一性資料。

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附錄A

(附錄性資料)

標(biāo)準(zhǔn)溶液及典型樣品的色譜圖示例見圖A.1-A.4。

A.1標(biāo)準(zhǔn)溶液總離子流出圖

A.2馬鈴薯葉樣品總離子流出圖

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A.3提取物1樣品總離子流出圖

A.4提取液2樣品總離子流出圖

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附錄B

(資料性附錄)

精密度和回收率試驗(yàn)研究結(jié)果

本方法的精密度實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果見表B.1

表B.1本方法的精密度實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果（n=6）

樣品名稱馬鈴薯葉馬鈴薯葉提取物1馬鈴薯葉提取液2

日內(nèi)相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（%）5.11.50.9

日間相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（%）4.82.64.7

本方法的回收率試驗(yàn)研究結(jié)果見表B.2

表B.2本方