安捷倫1260高效液相操作規(guī)程

安捷倫液相1260高效液相色譜操作規(guī)程前期工作查找資料（最好是外文文獻(xiàn)）了解別人做該樣品時(shí)常用的流動(dòng)相和固定相。如果還不清楚樣品是什么物質(zhì)，最起碼也應(yīng)該對其極性進(jìn)行了解，為選擇合適的流動(dòng)相和固定相打好基礎(chǔ)。流動(dòng)相選擇注意事項(xiàng)：避免使用高粘度的溶劑作為流動(dòng)相；所選用的流動(dòng)相一定要與樣品相溶；各流動(dòng)相之間可以很好的相溶；固定相選擇注意事項(xiàng)：正相色譜正相色譜用的固定相通常為硅膠（Silica）以及其他具有極性官能團(tuán)胺基團(tuán)，如（NH2，APS）和氰基團(tuán)（CN，CPS）的鍵合相填料。由于硅膠表面的硅羥基（SiOH）或其他極性基團(tuán)極性較強(qiáng)，因此，分離的次序是依據(jù)樣品中各組分的極性大小，即極性較弱的組份最先被沖洗出色譜柱。正相色譜使用的流動(dòng)相極性相對比固定相低，如正已烷（Hexane），氯仿（Chloroform），二氯甲烷（MethyleneChloride）等。反向色譜反向色譜用的填料常是以硅膠為基質(zhì)，表面鍵合有極性相對較弱官能團(tuán)的鍵合相。反向色譜所使用的流動(dòng)相極性較強(qiáng)，通常為水、緩沖液與甲醇、乙腈等的混合物。樣品流出色譜柱的順序是極性較強(qiáng)的組分最先被沖洗出，而極性弱的組分會(huì)在色譜柱上有更強(qiáng)的保留。常用的反向填料有：C18（ODS）、C8（MOS）、C4（Butyl）、C6H5（Phenyl）等。準(zhǔn)備工作用于液相色譜分析的樣品溶液使用前要經(jīng)過0.15μm過濾器過濾，必須達(dá)到均勻而無顆粒的狀態(tài)；流動(dòng)相一定要選用色譜級(jí)別的（最好是默克、飛世爾、時(shí)聯(lián)等牌子的），并且在使用之前一定要使用0.4μm過濾器過濾，再用超聲波清洗儀脫氣處理20-30min；在連接柱子和色譜儀之前，閥件或管路一定要清洗干凈，（一般用異丙醇將管路清洗）儀器操作將所選擇的流動(dòng)相加入相應(yīng)的試劑瓶中：棕色瓶對應(yīng)A泵，該瓶中只能加雙蒸水或娃哈哈純凈水；B、C、D泵根據(jù)需要添加。注：若流動(dòng)相中有水、乙腈最好現(xiàn)用現(xiàn)處理，不宜放置太長時(shí)間。先打開計(jì)算機(jī)登陸windows操作系統(tǒng)，再將儀器的泵、色譜柱、檢測器打開，待計(jì)算機(jī)界面顯示連接好后，雙擊桌面“聯(lián)機(jī)”圖標(biāo)，進(jìn)入化學(xué)工作站，從“視圖”菜單中選擇“方法和運(yùn)行控制”畫面。色譜柱設(shè)置（TCC檢測器參數(shù)設(shè)置）右擊TCC模塊中的空白區(qū)域，在“溫度”左側(cè)下面的方框內(nèi)輸入所需的溫度，并選中它，右側(cè)選中“與左側(cè)相同”——使柱溫箱的溫度左右一致。VWD檢測器參數(shù)設(shè)定右鍵點(diǎn)擊VWD模塊視圖空白處，選擇“方法”進(jìn)入VWD的參數(shù)設(shè)置界面波長設(shè)置VWD檢測波長峰寬設(shè)置為色譜圖中的預(yù)期的最窄峰。峰檢測器將忽略比峰寬設(shè)置窄很多或者寬很多的所有峰停止時(shí)間設(shè)置VWD停止分析時(shí)間。一般設(shè)置為“與泵一致”即可雜項(xiàng)當(dāng)VWD與其他檢測器一起工作或者設(shè)定沖洗色譜柱的梯度方法時(shí)，關(guān)閉檢測器的燈，分析將停止。如果希望關(guān)閉檢測器的燈時(shí)也能進(jìn)行分析，將“采集所需的等已打開”一欄不選定即可。時(shí)間表此處可以變化的參數(shù)包括自動(dòng)平衡、改變波長、執(zhí)行掃描。進(jìn)樣在設(shè)置“運(yùn)行控制->樣品信息”后，將手動(dòng)進(jìn)樣閥扳至“l(fā)oad”狀態(tài)進(jìn)樣(將樣品裝入到定量環(huán)內(nèi))。進(jìn)樣后，將手動(dòng)進(jìn)樣器扳至“inject”狀態(tài)，工作站自動(dòng)開始記錄采集數(shù)據(jù)。分析完成后，將手動(dòng)進(jìn)樣閥扳至“l(fā)oad”狀態(tài)，用定量環(huán)的5倍體積左右的甲醇清洗定量環(huán)，再在“inject”狀態(tài)下清洗排空管路。清洗進(jìn)樣口，防止殘留樣品污染下次進(jìn)樣。注：手不要拿注射器的針頭和有樣品的部位，不要有氣泡，吸樣時(shí)要慢、快速排出再慢吸，反復(fù)幾次，10μL注射器金屬針頭部分體積0.6μL，有氣泡也看不到，多吸1-2μL把注射器針尖朝上，氣泡上走到頂端，再推動(dòng)針桿排除氣泡，進(jìn)樣的速度要快，每次進(jìn)樣要保持相同的速度。在線信號(hào)檢測“視圖”中打開在線信號(hào)，可以隨時(shí)了解樣品出峰情況。關(guān)機(jī)關(guān)閉檢測器的燈：G1314B/C/E/F(可變波長紫外檢測器)，關(guān)閉檢測器的燈后沖洗系統(tǒng)，可以延長檢測器燈的壽命。沖洗系統(tǒng)：沒有鹽緩沖溶液的流動(dòng)相，(反相系統(tǒng))用85%~90%有機(jī)相+15%~10%水相沖洗系統(tǒng)和反相色譜柱或者適宜的流動(dòng)相沖洗系統(tǒng)和反相色譜柱。有鹽緩沖溶液的流動(dòng)相，(反相系統(tǒng))用85%~90%水相+15%~10%有機(jī)相沖洗系統(tǒng)和反相色譜柱(反相系統(tǒng))，除去反相色譜柱與系統(tǒng)中的鹽溶液。然后用85%~90%有機(jī)相+15%~10%水相沖洗系統(tǒng)和反相色譜柱。封存色譜柱：(反相系統(tǒng))用90%~95%有機(jī)相+10%~5%水相封存反相色譜柱，兩端封死。（如長時(shí)間存放可將柱子完全侵泡有機(jī)相內(nèi)，以防用純有機(jī)相封存反相色譜柱，如果長期保存有機(jī)相會(huì)揮發(fā)）。關(guān)閉電腦：將泵流速逐步降至0ml/min，單擊“關(guān)閉”按鈕關(guān)閉所有模塊，退出化學(xué)工作站，關(guān)閉電腦。注意事項(xiàng)使用反向柱時(shí)，要注意正相溶液的比例最好不要超過5%，否則會(huì)對柱子產(chǎn)生影響。氘燈是易耗品，應(yīng)最后開燈，不分析樣品時(shí)即關(guān)燈，洗柱子時(shí)應(yīng)關(guān)燈。操作中常見問題的解決方法①寬峰：系統(tǒng)未達(dá)到平衡；溶解樣品的溶劑極性比流動(dòng)相差不多；色譜柱尺寸及類型選擇不正確；色譜柱或保護(hù)柱被污染或柱校降低；溫度