2.2.2動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)與單克隆抗體課件-高二下學(xué)期生物人教版選擇性必修32

③意義：打破生殖隔離，實(shí)現(xiàn)遠(yuǎn)緣雜交育種，培育新的作物類型。植物體細(xì)胞雜交技術(shù)①植物細(xì)胞融合完成的標(biāo)志：雜種細(xì)胞再生出新的細(xì)胞壁。②植物體細(xì)胞雜交技術(shù)完成的標(biāo)志：形成雜種植株。有沒有技術(shù)能讓不同種動(dòng)物的體細(xì)胞進(jìn)行雜交，培育出集不同細(xì)胞的優(yōu)勢(shì)于一身的動(dòng)物細(xì)胞呢？2.2動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)與單克隆抗體動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)一、動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)1.概念：指兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的技術(shù)。2.原理：細(xì)胞膜的流動(dòng)性3.結(jié)果：形成具有原來(lái)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞的遺傳信息的雜交細(xì)胞。4.融合方法：動(dòng)物細(xì)胞沒有細(xì)胞壁，可以直接誘導(dǎo)融合。與植物原生質(zhì)體融合的方法相同物理法電融合法、離心法化學(xué)法聚乙二醇（PEG）融合法生物法滅活病毒誘導(dǎo)法（動(dòng)物細(xì)胞融合特有）滅活是指用物理或化學(xué)手段使病毒失去感染能力，但是并不破壞病毒的抗原結(jié)構(gòu)。P49細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)分子重新排布動(dòng)物細(xì)胞融合完成的標(biāo)志:細(xì)胞核的融合一、動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)5.意義：6.應(yīng)用：突破了有性雜交方法的局限，使遠(yuǎn)緣雜交（種間、屬間、科間、動(dòng)植物之間）成為可能。成為研究細(xì)胞遺傳、細(xì)胞免疫、腫瘤和生物新品種培育等的重要手段。特別是利用雜交瘤技術(shù)制造單克隆抗體。植物體細(xì)胞雜交動(dòng)物細(xì)胞融合原理細(xì)胞融合前的處理方法誘導(dǎo)方法結(jié)果7.植物體細(xì)胞雜交和動(dòng)物細(xì)胞融合的比較細(xì)胞膜的流動(dòng)性、植物細(xì)胞的全能性細(xì)胞膜的流動(dòng)性用果膠酶和纖維素酶去除細(xì)胞壁用胰蛋白酶或膠原蛋白酶使細(xì)胞分散成單個(gè)細(xì)胞物理法、化學(xué)法物理法、化學(xué)法、滅活病毒形成雜種植株形成雜交細(xì)胞1.抗體的早期生產(chǎn)方法向動(dòng)物體內(nèi)反復(fù)注射某種抗原，使動(dòng)物產(chǎn)生抗體，然后從動(dòng)物血清中分離所需抗體。1.漿細(xì)胞產(chǎn)生抗體，每個(gè)漿細(xì)胞只能產(chǎn)生一種特異性抗體。2.漿細(xì)胞可以分泌抗體，但是不能無(wú)限增殖。3.抗體主要分布在血清中，在組織液及外分泌液液含有。缺點(diǎn)：產(chǎn)量低、純度低、特異性差面臨問題：要想獲得大量的單一抗體，必須克隆單一的淋巴細(xì)胞，形成細(xì)胞群。在體外培養(yǎng)條件下，一個(gè)B淋巴細(xì)胞(高度分化的細(xì)胞)是不可能無(wú)限增殖的。二、單克隆抗體及其應(yīng)用1975年，英國(guó)科學(xué)家米爾斯坦和德國(guó)科學(xué)家科勒設(shè)計(jì)了一個(gè)極富創(chuàng)造性的試驗(yàn)方案：米爾斯坦【英國(guó)】科勒【德國(guó)】抗體一種B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞分泌特異性抗體能在體外大量增殖能迅速大量增殖，能產(chǎn)生特異性抗體單克隆抗體由于發(fā)明了單克隆抗體的制備技術(shù)，米爾斯坦和科勒于1984年獲得了諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)。二、單克隆抗體及其應(yīng)用注射特定的抗原培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞多種B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞誘導(dǎo)融合將骨髓瘤細(xì)胞與B淋巴細(xì)胞融合兩兩融合的細(xì)胞：BB、瘤瘤、B-瘤未融合的細(xì)胞：B、瘤

思考：不注射抗原，直接提取B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合，能得到單克隆抗體嗎？不能。能從該小鼠的脾中得到可以產(chǎn)生特定抗體的B淋巴細(xì)胞。實(shí)質(zhì)是漿細(xì)胞思考：若只考慮細(xì)胞的兩兩融合，融合形成的細(xì)胞有幾種？如何篩選？二、單克隆抗體及其應(yīng)用2.單克隆抗體的制備過程第一次篩選（用特定的選擇培養(yǎng)基）資料分析：1.細(xì)胞合成DNA有D和S兩條途徑，其中D途徑能被氨基蝶呤阻斷。2.免疫的B淋巴細(xì)胞中有這兩種DNA的合成途徑，但它不能分裂增殖，其本身也不能在體外長(zhǎng)期存活。3.鼠骨髓瘤細(xì)胞中只有D途徑，沒有S途徑，但它能不斷分裂增殖。如果它的D途徑被阻斷的話，它會(huì)因不能合成DNA而死。--篩選雜交瘤細(xì)胞在該培養(yǎng)基上，未融合的親本細(xì)胞和融合的具有同種核的細(xì)胞都會(huì)死亡，只有融合的雜交瘤細(xì)胞才能生長(zhǎng)。第二次篩選（克隆化培養(yǎng)、抗體檢測(cè)）--能產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細(xì)胞AB1、AB2、AB3……1.將雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行有限稀釋，用多孔細(xì)胞培養(yǎng)板培養(yǎng)，使每孔細(xì)胞不超過一個(gè)，通過培養(yǎng)讓其增殖。2.用標(biāo)記的抗原檢測(cè)每個(gè)小孔上清液（抗原抗體能結(jié)合即為陽(yáng)性孔）；3.陽(yáng)性孔中的細(xì)胞還不能保證是來(lái)自單個(gè)細(xì)胞，挑選陽(yáng)性孔的細(xì)胞繼續(xù)進(jìn)行有限稀釋，一般需進(jìn)行3～4次。多孔細(xì)胞培養(yǎng)板陽(yáng)性孔二、單克隆抗體及其應(yīng)用2.單克隆抗體的制備過程抗體檢測(cè)呈陽(yáng)性的雜交瘤細(xì)胞體外培養(yǎng)注射到小鼠腹腔內(nèi)（體內(nèi)培養(yǎng)）細(xì)胞培養(yǎng)液提取小鼠腹水中提取特異性強(qiáng)，靈敏度高，可大量制備。單克隆抗體易于控制培養(yǎng)條件（如無(wú)需提供無(wú)菌環(huán)境等），操作簡(jiǎn)單，成本較低，規(guī)模小，產(chǎn)量少需要人為控制培養(yǎng)條件，成本相對(duì)較高二、單克隆抗體及其應(yīng)用2.單克隆抗體的制備過程注射特定蛋白免疫小鼠培養(yǎng)小鼠骨髓瘤細(xì)胞B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞多種細(xì)胞多種雜交瘤細(xì)胞能分泌所需抗體的雜交瘤細(xì)胞選擇培養(yǎng)基克隆化培養(yǎng)抗體檢測(cè)注射到小鼠腹腔內(nèi)增殖體外培養(yǎng)單克隆抗體誘導(dǎo)融合單克隆抗體小結(jié)動(dòng)物細(xì)胞融合動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)篩選1篩選2特異性強(qiáng)、靈敏度高、可大量制備細(xì)胞增殖細(xì)胞膜具有流動(dòng)性既能大量繁殖又能產(chǎn)生專一抗體二、單克隆抗體及其應(yīng)用3.應(yīng)用：P50①作為診斷試劑：(最廣泛的用途)②用于疾病的治療和運(yùn)載藥物(主要用于癌癥的治療)1.ADC的抗體和藥物各具有什么作用？2.除了細(xì)胞毒素，還有哪些物質(zhì)理論上可以作為ADC偶聯(lián)的藥物？3.單克隆抗體診斷試劑盒和ADC在臨床應(yīng)用上各具有什么優(yōu)勢(shì)？抗體：通過特異性結(jié)合靶細(xì)胞表面的抗原，將連接的藥物輸送到靶細(xì)胞。藥物：發(fā)揮治療效應(yīng)，如殺傷靶細(xì)胞。①可以用放射性同位素標(biāo)記單克隆抗體進(jìn)行靶向放療；②一些作用于細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的藥物可以通過阻斷腫瘤細(xì)胞的信號(hào)通路來(lái)抑制其生長(zhǎng)，理論上也可以將這些藥物與單克隆抗體結(jié)合進(jìn)行治療。①單克隆抗體：檢測(cè)的特異性和靈敏度高；②ADC：靶點(diǎn)清楚、毒副作用小等優(yōu)點(diǎn)【本節(jié)小結(jié)】一、概念檢測(cè)1.下列有關(guān)動(dòng)物細(xì)胞融合與植物體細(xì)胞雜交比較的敘述，錯(cuò)誤的是（）A.它們的原理都涉及細(xì)胞膜的流動(dòng)性B.都可以用電融合法或PEG融合法誘導(dǎo)融合C.融合前都需用纖維素酶或果膠酶處理細(xì)胞D.前者主要是為了獲得細(xì)胞產(chǎn)品，后者主要是為了獲得雜種植株2.科學(xué)家以SARS病毒的核衣殼蛋白為抗原，制備出了單克隆抗體。下列相關(guān)敘述正確的是（）

A.利用該單克隆抗體可以診斷是否感染SARS病毒B.體外培養(yǎng)單個(gè)B淋巴細(xì)胞可以獲得針對(duì)SARS病毒的單克隆抗體C.將等量B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞混合，經(jīng)誘導(dǎo)后融合的細(xì)胞即為雜交瘤細(xì)胞D.將純化的核衣殼蛋白反復(fù)注射到小鼠體內(nèi)，從小鼠血清中分離出的抗體為單克隆抗體CA二、拓展應(yīng)用假如你掌握了動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)，你想用這種技術(shù)來(lái)