中藥川芎化學成分的研究

目錄TOC\o"1-2"\h\z\u摘要 IAbstract II前言 11材料與方法 21.1研究對象 21.2研究背景 21.3川芎藥理活性研究 51.4實驗儀器與設備 61.5實驗材料與試劑 61.6實驗方法 72實驗過程 82.1提取濃縮 82.2萃取 82.3硅膠柱分離 82.4凝膠柱分離 92.5制備液相分離 93結果與分析 94小結 14參考文獻 15綜述 17致謝 25PAGEII摘要目的：川芎是為傘形科多年生草本植物。其藥理活性眾多，在臨床中藥應用廣泛。川芎化學成分十分的復雜，通過川芎藥材成分的化學研究，為川芎藥材的開發(fā)利用提供理論基礎。方法：將藥材川芎用75%的乙醇進行熱回流提取，得到藥材浸膏。隨后，加入水，可以形成混懸液，使用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇對其進行萃?。会槍σ宜嵋阴サ牟课徊捎霉枘z柱層析、薄層、凝膠柱層析及中壓制備色譜技術進行分離純化，可得到兩個化合物。結果：經1H-NMR和13C-NMR核磁技術，采用文獻比對方式確定化合1為阿魏酸，化合物2為沒食子酸。結論：本論文利用現代分離技術和手段，對川芎的類成分進行分離與鑒定，為川芎的深入開發(fā)及利用奠定良好的基礎。關鍵詞：川芎；化學成分；分離純化；結構鑒定 PAGEIIAbstractPAGEIIObjective:LigusticumChuanxiongisaperennialherbofumbelliferae.IthasmanypharmacologicalactivitiesandiswidelyusedinclinicalTCM.ThechemicalcompositionofLigusticumligusticumisverycomplex.ThechemicalresearchofLigusticumLigusticumcanprovidetheoreticalbasisforitsdevelopmentandutilization.Methods:RadixLigusticumChuanxiongwasextractedbyhotrefluxwith75%ethanol.Then,byaddingwater,asuspensioncanbeformedandextractedwithpetroleumether,ethylacetateandn-butanol.Theethylacetatewasisolatedandpurifiedbysilicagelcolumnchromatography,thinlayer,gelcolumnchromatographyandmediumpressurepreparationchromatography.Results:Compound1wasidentifiedasferulicacidandcompound2asgallicacidby1H-NMRand13C-NMR.Conclusion:ThispaperusesmodernseparationtechnologyandmeanstoseparateandidentifythecomponentofLigusticumChuanxiong,whichlaysagoodfoundationforfurtherdevelopmentandutilizationofligusticumChuanxiong.Keywords:ligusticumchuanxiong;chemicalcomposition;separationandpurification;structuralidentification 前言川芎為傘形科(Umbelliferae)藁本屬(Ligusti-cum)川芎(LigusticumchuanxiongHort)的藥用植物。川芎是一種十分具有藥用前景的中藥材。其的產地來源于云南、貴州、廣西、四川等地。川芎的別名有香果、京芎、雀腦芎、貫芎等[1]。從草本植物的收錄情況來看，人們早在數千年前就發(fā)現了川芎的草本和醫(yī)學應用價值[2]。《神農本草經》將其列為上品，《本草經集注》言“凡藥無過川芎，惟以治風，血，痹，痛為勝”?！吨袊幍洹穼⑵淞袨槌Ｓ弥兴?，并稱其為“血余”。認為它有活血調經，祛風止痛，行氣活血等多種功效[3]。川芎味辛苦而溫，入肝經，擅長行血散瘀?！渡褶r本草經》說：“久服利血氣、輕身耐老”。對于氣血郁結引起的痛經、閉經、頭痛等癥狀，川芎也有一定的治療作用[4]。《本草綱目》說：“川芎能治百病，和血氣而不滯行瘀滯而不傷正”。現代醫(yī)學認為川芎具有活血化瘀、行氣止痛等功效，是劃分在活血化瘀藥分類中的活血止痛藥[5][6]?！侗窘洝飞险f：“川芎主治風邪，主治頭痛，寒熱，痙攣，金創(chuàng)，女子血瘀，不能生育”。川芎既是多種中成藥的主藥之一，又是傳統中藥湯劑中的主要成分。對中藥川芎的認知和藥理研究，應該結合現代醫(yī)學臨床實際，用現代科學的視角來綜合看待。近年來，在化學成分和藥理作用等領域的研究上，川芎也有了很大的進展[7]。川芎中包含有苯酞類、有機酸類、生物堿和多糖等多種化學成分，具有十分豐富的化學組成。就目前研究的進程來看，所研究出來的川芎的主要成分是苯酞類和生物堿，這也成為了今后對川芎研究的主要方向。川芎中已分離鑒定出了20余種生物堿類單體[8]。川芎嗪是川芎獨有的生物堿類成分，其含量與川芎的產地和提取技術等有十分密切的關系；揮發(fā)油作為川芎中的主要活性成分之一，具有解熱、鎮(zhèn)痛、改善血管的藥理作用[9]。在中藥川芎的臨床應用中，常見的用于控制心腦血管疾病的治療。用于血管內皮細胞作用，通過降低內部丙二醛的含量，來增加超氧化物歧化酶（SOD）的活性[10]。川芎也可以和其他中藥聯合使用。川芎是一種具有抗氧化能力、抗腫瘤、鎮(zhèn)痛、抗炎、抗凝血、抗動脈粥樣硬化、抗抑郁、細胞保護、抗衰老及改善心功能的中藥。其中，川芎的主要藥理功效為活血化瘀，行氣止痛。在對于心腦血管疾病、疼痛、血栓等疾病的治療方面都有很好的效果。根據現階段對于中藥川芎的相關研究，對于川芎的待研究和控制方向為神經系統、心腦血管和呼吸系統方向。本文以川芎藥材醇提部位為研究對象，采用現代分離技術和色譜技術，分離純化川芎藥材中活性化合物，通過HPLC、NMR等色譜技術，對化合物結構進 行表征。以期獲得結構新穎活性特殊的新化合物，為藥理活性的篩選提供化合物來源。1材料與方法1.1研究對象《中國植物志》[11]描述的川芎的特點：“有發(fā)達的地下莖干，高40-60公分。呈不規(guī)則球形，結節(jié)狀，有濃烈的香氣。莖直，圓筒形，上半部有許多分枝，下半部莖節(jié)膨大，形成圓盤。莖尖下端有葉具柄，基部擴展成鞘狀。川芎為人工栽培，主要分布在四川（灌縣、崇慶），并且在云南、貴州、陜西、甘肅、內蒙古等省區(qū)也有栽培。關于川芎的炮制，首先去除雜質，并且將川芎形狀大小分好，隨后用水浸泡，晾曬干并悶潤后即可切片、干燥。如果是炮制酒川芎，可以將黃酒倒在川芎片表面，稍悶后放在鍋內炒至微焦，隨后取出放涼即可。在市面上銷售的中成藥中，以川芎為君藥的中成藥有很多，如丹芎通脈顆粒，主要由丹參和川芎等中藥材組成，起到活血理氣、滋補腎陰的作用；益心舒片，主要由人參、川芎、丹參等中藥材構成，起到理氣復脈、活血化瘀的作用。圖1川芎植物學形態(tài)圖1.2研究背景川芎是一種源自傘形科(Umbelliferae)蒿本屬(Ligusti-cum)的植物川芎(LigusticumchuanxiongHort)的干根狀莖。川芎中的化學成分十分豐富，主要包括有苯酞類（內酯類）、酚酸類、生物堿類、多糖類、等其他成分。1.2.1苯酞類傘形科植物的特征性成分之一是苯酞類化合物，它不僅是川芎中的一種重要有效成分，而且還存在于芹屬、蛇床屬、蒿本屬等屬的植物中[12]。苯酞類化合物是傘形科植物如川芎、當歸等藥材中的主要化學成分。在苯酞類化合物的母核中，苯環(huán)和側鏈位置容易發(fā)生改變，導致結構不穩(wěn)定，容易受到空氣氧化、光、溫度等因素的影響，給分離純化和制備中帶來了困難[13]。根據川芎母核的不同，苯酞類化合物可以分成簡單苯酞類、二聚苯酞類。簡單苯酞類化合物都有一個苯酞結構的母核，在C-3位置上連接了丁基基團或者丁烯基。由于六元環(huán)的飽和程度不同和C-3位側鏈構型的不同，其結構也有很大的差異。從川芎中分離出的簡單化合物：Z-蒿本內酯（Z-ligustilide，1）、E-蒿本內酯（E-ligustilide，2）、蛇床內酯（condilide，3）[14]新蛇床內酯（neocnidilide，4）[15]。羥基苯酞類是一種以簡單苯酞為基元，在六元環(huán)上或側鏈上都有一個羥基，并含有羰基和氯的化合物。它們是：洋川芎內酯K（senkyunolideK，5）[16]、洋川芎內酯M（senkyunolideM，6）、洋川芎內酯Q（senkyunolideQ，7）、洋川芎內酯R（senkyunolideR，8）。結構如圖2。圖2川芎中簡單苯酞類成分二聚苯酞類是簡單苯酞類的二聚體。川芎中所含二聚苯酞類化合物主要有：Z-6,8’,7,3’-二聚蒿本內酯（Ｚ-6,8',7,3'-diligustilide，9）[17]、洋川芎內酯O（senkyunolideO，10）、洋川芎內酯P（senkyunolideP，11）[18]、chuanxiongdiolide（12）、chuanxiongnolideA（13）。結構如圖3。圖3川芎中二聚苯酞類成分1.2.2酚酸類酚酸類也是川芎的藥效物質基礎。阿魏酸為川芎酚酸類成分的代表性成分，具有顯著的抗炎和抗氧化作用。川芎中含有的芬酸類化合物見表1。表1川芎中酚酸類化合物序號化合物CAS號1棕櫚酸[palmiticacid][19]1957-10-32阿魏酸[ferulicacid]1135-24-63氨基羧酸[Indole-3-carboxaldehyde]487-89-84咖啡酸[caffeicacid]331-39-553-(4-羥基-3-甲氧基苯基)丙烯酸[3-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)acrylicacid]1135-24-66甲基阿魏酸[methylferulicacid]2316-26-978異阿魏酸[isoferulicacid]異綠原酸A[3,5-dicaffeoylquinicacid]537-73-52450-53-51.2.3生物堿類生物堿也是川芎中重要的化學成分之一，川芎嗪是生物堿類的代表成分，它的含量與川芎來源和提取技術等有密切的關系。從川芎中分離出的生物堿類化合物見表2。表2川芎中生物堿類成分序號化合物CAS號1川芎嗪[Tetramethylpyrazine]1124-11-42氨基羧酸[Indole-3-carboxaldehyde]487-89-83染料木堿[genistin][20]529-59-94[(1S,3S)-1-甲基-1,2,3,4-四氫-β-碳糖系-3-羧酸][(1S,3S)-1-methyl-1,2,3,4-tetrahydro-β-carbo-]40678-46-45阿糖胸苷[thyminearabinoside]605-23-26阿拉利亞腦苷[araliacerebroside]92704-37-51.2.4多糖類川芎多糖主要由葡萄糖，半乳糖，阿拉伯糖，木糖，鼠李糖，甘露糖等組成，具有較高的藥用價值。范智超等[21]采用DEAE-纖維素柱色譜、凝膠滲透色譜等方法，首先從川芎中分離出4個雜多糖分子（LCP-1、LCP-2、LCP-3、LCP-4）。植物多糖具有保護肝臟、抗腫瘤、降低血脂等多種有利的生物活性。不但在醫(yī)學方面，而且在醫(yī)療衛(wèi)生方面也得到了廣泛的應用。1.3川芎藥理活性研究川芎具有活血化瘀、祛風止痛的藥理活性。在臨床中主要用于治療血栓、心肌缺血、高血壓等，還能起到抗炎、保護血管的作用?，F如今，對川芎的研究也逐漸增加，旨在發(fā)現新的藥理作用。例如在川芎具有的抗炎、抗氧化作用的基礎上，發(fā)現了其對軟骨也有保護作用。1.3.1苯酞類化合物的藥理作用苯酚類化合物是川芎中的主要成分之一，在傘形科的植物川芎、當歸中都有此化合物，所以推測苯酚類化合物是起到活血化瘀的重要活性成分。苯酚類化合物有很高的研究價值。據研究表明，Z-蒿本內酯的活性可以概括為：抗炎、抗氧化、神經保護等[22]。1.3.2生物堿類化合物的藥理作用川芎中的生物堿類化合物具有抗偏頭痛、神經保護、心臟保護、抗心腦血管疾病等功效[23]。其中，川芎嗪被認為是川芎中的特征化合物。川芎嗪具有很好的抗炎作用，也具有一定的抗腫瘤作用，還具有擴張冠狀動脈、肺血管、腎血管及周圍血管的作用。1.3.3多糖類化合物的藥理作用川芎多糖的組成成分有：葡萄糖、阿拉伯糖、鼠李糖、半乳糖、木糖、甘露糖。川芎多糖LCP70-2A可通過增強巨噬細胞的吞噬作用從而增強包括NO在內的免疫調節(jié)因子分泌激活巨噬細胞。通過斑馬魚的模型發(fā)現LCP70-2A促進RO和NO的釋放，表面LPC-2A增強免疫力[24]。1.4實驗儀器與設備實驗儀器生產廠家Agilent1260高效液相色譜儀Agilent科技有限公司Agilent1260制備型高效液相色譜儀Agilent科技有限公司Bruker-AV-400型核磁共振光譜儀ZF-7型三用紫外分析儀Agilent1290-6538液質聯用儀瑞士Bruker公司上海嘉騰科技有限公司美國Agilent公司動態(tài)軸向壓縮反向色譜分離柱DAC-HB50江蘇漢邦科技有限公司旋蒸蒸發(fā)儀EYELA東京理化器械株式會社KQ-500DE型數控超聲波清洗器昆山市超聲儀器有限公司臺式高速離心機H/T16M湖南赫西儀器裝備有限公司CHEMISTRYHYBRIDPUMPMadeinGermanyACS-011型電子天平上海乾峰電子儀器有限公司W-O-II+(F)恒溫加熱循環(huán)槽無錫申科儀器有限公司R2100A旋轉蒸發(fā)器無錫申科儀器有限公司DLSB-10/25低溫冷卻循環(huán)槽無錫申科儀器有限公司SHB-Ⅲ循環(huán)水式多用真空泵鄭州長城科工貿有限公司QT-100DZ餾分收集器上海琪特分析儀器有限公司電熱鼓風干燥箱泰事達凍干機微型離心機 上海一恒科學儀器有限公司西班牙泰事達公司賽默飛世爾科技（中國）有限公司1.5實驗材料與試劑實驗材料生產廠家柱色譜硅膠（200-300目）SephadexLH-20青島海洋化工Pharmacia公司C18色譜填料蘇州納微科技股份有限公司95%乙醇石油醚二氯甲烷乙酸乙酯正丁醇長和酒業(yè)有限公司南京化學試劑有限公司南京化學試劑有限公司南京化學試劑有限公司南京化學試劑有限公司甲醇南京化學試劑有限公司制備甲醇邁瑞達科技有限公司純化水自制1.6實驗方法稱取川芎藥材5kg，粉碎，裝入包煎袋中，置于100L玻璃反應釜中，75%乙醇提2次，每次2小時，提取體積為10倍量和8倍量。合并提取液，采用50L旋轉蒸發(fā)儀濃縮，比重為1.08-1.10，得川芎藥材75%乙醇提取濃縮液。使用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇為溶劑，對川芎醇提濃縮液進行萃取，分別濃縮得川芎藥材各部位。初步將乙酸乙酯部位使用硅膠柱色譜進行分離，再通過凝膠柱、制備液相等色譜手段進一步純化，得到單體化合物，通過NMR、HPLC等波譜手段對化合物進行結構解析。川芎川芎藥材5kg乙醇水煎乙醇水煎提取物流浸膏提取物流浸膏石油醚、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取石油醚、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取正丁醇部位浸膏（Fr.正丁醇部位浸膏（Fr.3）石油醚部位（Fr.1）乙酸乙酯部位（Fr.2）硅膠柱分離、TLC檢測，點板硅膠柱分離、TLC檢測，點板硅膠柱分離得到七個流分硅膠柱分離得到七個流分凝膠柱分離、純化凝膠柱分離、純化收集到收集到30個流分（Frs.A-E）Frs.EFrs.DFrs.Frs.EFrs.DFrs.CFrs.BFrs.A取Frs.C取Frs.C流分，經HPLC制備得化合物1、化合物2得化合物1、化合物2圖4川芎提取分離流程圖 2實驗過程2.1提取濃縮2.1.1提取回流提?。喝〗涍^處理后的川芎藥材裝進藥材袋中并投入到反應釜中，加入50L的75%乙醇，開啟冷凝器和控溫系統，進行加熱。待罐內藥液沸騰后，開始計時，提取2小時，提取過程中始終保持藥液微沸狀態(tài)，藥液溫度控制在80±5℃范圍內。提取結束后，關閉控溫系統，打開出料閥門，將川芎提取液轉移至儲液罐中。第二次提取重復上述操作，回流提取2小時，提取結束后，合并量次提取液，過濾，備用。2.1.2濃縮先打開水浴鍋開關設定溫度(75±2℃)，然后開啟旋轉蒸發(fā)儀真空閥和冷凝水循環(huán)器，真空吸入川芎藥材75%醇提取液至旋轉瓶1/3處停止吸液，當真空度為-0.07～-0.09MPa范圍內時，打開旋轉按鈕，開始濃縮。待全部藥液吸入旋轉瓶后，繼續(xù)濃縮至藥液相對密度為1.09時，停止?jié)饪s，過濾，備用。得川芎75%乙醇提取濃縮液525g。2.2萃取川芎在臨床使用中多為水煎劑，由于極性大的化合物在水中的溶出效果較好，所以在研究中更傾向于對極性大的化合物進行研究。取川芎藥材醇提濃縮液，加入適量水分散，先加入等體積石油醚進行萃取，充分振搖使石油醚和藥液充分接觸后靜置6h，待有明顯分層后，開始放液，將石油醚層轉移至儲液瓶中，重復三次，將石油醚萃取液混合，進行濃縮，得到石油醚部位30ml（Fr.1）。石油醚萃取結束后采用等體積乙酸乙酯進行萃取，充分振搖使乙酸乙酯和藥液充分接觸后靜置6h，待有明顯分層后，開始放液，將乙酸乙酯層轉移至儲液瓶中，重復三次，將乙酸乙酯萃取液進行合并，再通過濃縮干燥，得乙酸乙酯部位80g（Fr.2)。最后加入等體積正丁醇萃取，充分振搖使正丁醇和藥液層充分接觸后靜置6h，待有明顯分層后，開始放液，將正丁醇層轉移至儲液瓶中，重復三次，將正丁醇萃取液進行合并，再進行濃縮得正丁醇部位100g（Fr.3）。2.3硅膠柱分離2.3.1樣品前處理取川芎藥材乙酸乙酯部位100g，在表面皿內研磨至細粉狀，備用。 2.3.2上樣洗脫將前處理好的樣品置于硅膠柱中，采用二氯甲烷-甲醇溶劑系統進行梯度洗脫，具體洗脫程序為：二氯甲烷：甲醇=100:0，6個柱體積；二氯甲甲醇=50：1，6個柱體積；二氯甲烷：甲醇=20：1，6個柱體積；二氯甲烷：甲醇=10：1，6個柱二氯甲烷甲醇二氯甲烷甲醇積；二氯甲烷甲醇2.4凝膠柱分離Fr.280gSephadexLH-20柱進行分離純化，Frs.A流分，Frs.7-12合并，得到Frs.B，Frs.13-18合并，得到Frs.C，Frs.19-24合并，得到Frs.D，Frs.25-30合并，得到Frs.E。2.5制備液相分離Fr.C流分，將樣品充分溶解后，微型離心機1000轉離心十分鐘以上，取上清液作為供試品溶液。利用高效液相制備色譜，先進行制備條件重現，將處理后的供試品溶液根據表3的分析色譜條件進行制備條件重現，進樣量控制在1-5ml，流速50ml/min。采用自動餾分收集器收集，觀察分析液相色譜條件轉移制備液相是否可以重現，色譜峰是否分布均勻。如果良好可收集流分，進行正式制備，若重現不好，可以對條件進行調整。本文以26%的甲醇-水洗脫為流動相，表3的分析色譜條件進行制備，得到化合物阿魏酸和沒食子酸。表3Fr.C流分高效液相制備條件時間甲醇-甲酸水05555065100751003結果與分析（Fr.1）（Fr.2）（Fr.3）δ:3.89（3H，s，3-OCH3）是甲氧基，δ:7.59（1H，d，J=15.9Hz，H-7）化學位移值較大，周圍電子云密度較小，旁邊存在吸電子基團，根據不飽和度為6，推斷存在苯環(huán)，δ:7.17（1H，d，J=1.8Hz，H-2）,δ:7.06（1H，dd，J=1.8，10.0Hz，H-6），δ:6.81（1H，d，J=8.1Hz，H-5），δ:6.31鄰位的碳上有氫，（1H，d，J=15.8Hz，H-8）；根據13C-NMR（100MHz，DMSO-d6見圖6）δ：171.3（C-9），為羰基碳的峰，是酯鍵羧基，δ：127.8（C-1），δ：111.7（C-2），δ：150.5（C-3），δ：149.4（C-4），δ：116.4（C-5），δ：116.2（C-6），δ：146.8（C-7），C1-C7可能是苯環(huán)上的信號，δ：123.9（C-8），δ：56.4（3-OCH3）為吸電子基相連的甲基結構，且與。不飽和度為6，苯環(huán)的不飽和度為4，羰基的不飽和度為1，還剩余一個不飽和度可能為雙鍵或者環(huán)烷烴，δ:7.59和δ：6.31可能是烯烴信號，以上數據和文獻[25]的報道比對，結果基本一致，故鑒定化合物1為阿魏酸。圖5阿魏酸圖6阿魏酸13C-NMR譜圖表4化合物1與ferulicacid的13C-NMR數據（DOSO-d6,δ:ppm,J:Hz）Pos.1aferulicacidbδCδHδCδH1127.8127.82117.77.17(1H,d,J=1.8Hz)117.77.18(1H,d,J=1.2Hz)3150.5150.54149.4149.45116.46.81（1H,d,J=8.1Hz）116.46.82（1H,d,J=7.8Hz）6116.27.06（1H,dd,J=1.8,10.0Hz）115.97.07(1H,dd,J=1.8,9.6Hz)7146.87.59(1H,d,J=15.9Hz)146.97.60（1H,d,J=16.2Hz）8123.96.31（1H,d,J=15.8Hz）123.96.32(1H,d,J=15.6Hz)9171.3170.9-OCH356.42.42(3H,s)56.43.39(3H,s)arecordedinrecordedinCD3OD-d4圖7阿魏酸化合物2：淡黃色無定型固體。分子式為C7H6O5，單峰，鄰位碳沒有氫，沒有耦合作用。根據化學位移值推斷，其可能是苯環(huán)上的特征氫。δ：6.92（2H，s，H-2,6）。13C-NMR（100MHz，DMSO-d6，見圖9）δ：167.9（COOH）羰基上的碳信號，δ：145.8（C-3，C-5）,δ：138.4（C-4）苯環(huán)上連氧的碳信號，δ：120.9（C-1）苯環(huán)上連羧基的碳信號，δ：109.2（C-6）苯環(huán)上其他碳信號。以上數據與文獻[26]的報道對比，結果基本一致，故鑒定化合物2為沒食子酸。圖8沒食子酸圖9沒食子酸13C-NMR譜圖表5化合物2與Gallicacid的13C-NMR數據（DOSO-d6,δ:ppm,J:Hz）Pos.1aGallicacidbδCδHδCδH1120.9146.42109.27.17(2H,s)110.47.08(2H,s)3145.8139.74138.4122.15145.8139.76109.27.06（2H,s）110.57.08(2H,s)arecordedinrecordedinCDCl3 圖10沒食子酸4小結川芎是一種常用的中藥材，其藥理作用的研究備受國內外研究者的重視。本文通過對川芎的化學成分進行分離純化，為今后發(fā)現川芎新的藥理活性提供依據。首先對處理好的川芎藥材進行醇提，對提取得到的75%乙醇川芎提取液用旋轉蒸發(fā)儀進行濃縮。使用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇對川芎的醇提取物進行萃取，對乙酸乙酯的萃取部分進行化學成分的研究。采用硅膠柱色譜、SephadexLH-20凝膠柱色譜和制備高效液相色譜等現代化分離技術，對川芎乙酸乙酯萃取部位進行分離純化，使用摸索出的制備條件使用制備高效液相色譜儀進行制備，得到川芎中的兩個化合物，分別是阿魏酸和沒食子酸。在使用高效液相色譜儀時可能會存在的問題：1.分離不好。選擇合適的流動相；定期清洗柱子；更換新的色譜柱或選用更長的色譜柱。2.拖尾現象。固定相方面可以選擇端基封尾更好的，硅羥基活性更低的固定相；在流動相方面，首先可以調整流動相pH值<2.5的條件下進行；或者加入三乙胺之類的掃尾劑；能有效的減少因堿性化合物與游離硅羥基之間的二級作用造成的拖尾問題。對于酸性化合物而言，主要是由硅膠的吸附造成的。流動相中加入酸（如醋酸），與硅膠上酸性硅羥基作用，從而減少酸性化合物與酸性硅羥基的作用。3.儀器系統壓力過高可能由于儀器系統堵塞造成，壓力過低可能由于儀器系統泄漏造成。4.進樣量體積過大超過色譜柱的峰容量，導致色譜峰形畸變。減小進樣量，使色譜峰之間的分離度≥1.5。5.合并樣品時應注意樣品不能太分散，引入的雜質要少。 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