吸附色譜分離技術(shù)

吸附色譜分離技術(shù)

吸附色譜分離技術(shù)基本原理1吸附劑2展開劑3影響吸附分離的因素4薄層色譜分離技術(shù)5柱色譜分離技術(shù)6基本原理

利用各組分與吸附劑之間的分子吸附力(范德華力，包括色散力、誘導(dǎo)力、定向力以及氫鍵)的差異而實(shí)現(xiàn)分離。吸附色譜分離技術(shù)基本原理吸附色譜分離技術(shù)平衡系數(shù)（分配系數(shù)、吸附系數(shù)、選擇性系數(shù)）K=cs/cm

cs—固定相中的濃度；cm—流動相中的濃度影響K的因素：被分離物質(zhì)本身的性質(zhì)、固定相和流動相的性質(zhì)、色譜柱的操作溫度。K差異越大，色譜分離效果越理想。基本原理吸附色譜分離技術(shù)阻滯因數(shù)（比移值）0≤Rf≤1，Rf越大，溶質(zhì)隨流動相移動快，被洗脫速率也就越快。當(dāng)Rf=1，此種溶質(zhì)不溶于固定相，隨流動相以同樣的速率移動。當(dāng)Rf=0，此種溶質(zhì)不溶于流動相，而被吸附在固定相上。斑點(diǎn)到原點(diǎn)的距離

Rf值=—————————————

溶劑前沿到原點(diǎn)距離吸附劑吸附劑選擇的原則：1.應(yīng)有最大的比表面積和足夠的吸附能力，對欲分離的不同物質(zhì)應(yīng)有不同的溶解和解吸能力；2.與洗脫劑、溶劑及樣品組分不發(fā)生化學(xué)變化；3.顆粒均勻，操作過程中不破裂。吸附色譜分離技術(shù)吸附劑常用的吸附劑吸附劑均含有不飽和的氧原子或氮原子以及能夠形成氫鍵的基團(tuán)，如-OH和-NH2。常用的吸附劑有：吸附色譜分離技術(shù)1.硅膠2.氧化鋁

3.活性炭4.纖維素5.聚酰胺6.硅藻土吸附劑吸附劑的吸附力次序 常用吸附劑的吸附力的強(qiáng)弱順序?yàn)椋夯钚蕴?gt;氧化鋁>硅膠>氧化鎂>碳酸鈣>磷酸鈣>石膏>纖維素>淀粉和糖吸附色譜分離技術(shù)展開劑

展開劑選擇的原則：1.對被分離組分應(yīng)具有一定的解吸附能力，極性應(yīng)比被分離物質(zhì)的極性略?。?.展開劑應(yīng)對被分離物質(zhì)具有一定的溶解能力。通常，先用一種極性較小的溶劑為基礎(chǔ)，若展開不好，則用極性較大的溶劑與前一溶劑混合，調(diào)整極性，再次實(shí)驗(yàn)，直到選出適合的展開劑。吸附色譜分離技術(shù)展開劑

展開劑的極性次序：己烷<環(huán)己烷<四氯化碳<甲苯<苯<氯仿<乙醚<乙酸乙酯<丙酮<正丙醇<乙醇<甲醇<水<冰醋酸吸附色譜分離技術(shù)展開劑極性越大，對同一化合物的洗脫能力越大，可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果調(diào)整展開劑的極性以獲得最佳的分離的效果。

影響吸附分離的因素

1.和功能基極性有關(guān)。極性增加的順序：烷烴、不飽和烴、醚、酯、酮、醛、醇、酚和羧酸，同一類化合物極性基團(tuán)越多，極性越大。2.小分子的化合物比大分子的化合物極性大。3.和某些細(xì)微結(jié)構(gòu)有關(guān)，如氫鍵、異構(gòu)體等。吸附色譜分離技術(shù)薄層色譜分離技術(shù)吸附色譜分離技術(shù)1.薄層板的制備吸附劑硅膠調(diào)制玻璃板涂布調(diào)制時慢慢攪拌，勿使產(chǎn)生氣泡。均勻涂布在玻璃板上，搖動攤平，晾干。使用前放入烘箱內(nèi)，在105-115℃烘干40-50min。冷卻后使用。粘合劑、添加劑薄層色譜分離技術(shù)吸附色譜分離技術(shù)2.點(diǎn)樣樣品溶液的配制點(diǎn)樣點(diǎn)樣示意圖樣品點(diǎn)點(diǎn)樣直徑≤2mm1cm≤點(diǎn)間距≤1.5cm1-2cm薄層色譜分離技術(shù)吸附色譜分離技術(shù)3.展開展開劑要接觸到吸附劑下沿，但切勿接觸到樣點(diǎn)。蓋上蓋子，展開。觀察展開情況。取出薄層板

展開示意圖薄層色譜分離技術(shù)吸附色譜分離技術(shù)3.展開上升法傾斜上行法下降法薄層色譜分離技術(shù)吸附色譜分離技術(shù)3.展開畫溶劑前沿線觀察斑點(diǎn)記錄Rf值薄層色譜分離技術(shù)吸附色譜分離技術(shù)4.顯色本身帶有顏色——有色斑點(diǎn)本身無顏色——顯色劑顯色含有熒光劑的薄層板——暗色斑點(diǎn)柱色譜分離技術(shù)

吸附色譜分離技術(shù)洗脫劑的選擇

層析柱的選擇（內(nèi)徑、長度、材質(zhì)）制備（色譜柱裝填）洗脫方式、流速、梯度↓加樣洗脫洗脫液的監(jiān)測收集及組分鑒定吸附劑的清洗、再生和保存

↓↓↓←吸附劑的選擇（既能吸附組分，又能被洗脫液將組分洗脫下來）

↘↑吸附劑的處理上樣緩沖液（平衡液）的選擇柱色譜分離技術(shù)

吸附色譜分離技術(shù)1.裝柱干法裝柱濕法裝柱吸附色譜分離技術(shù)2.平衡色譜柱填裝好后，必須用起始緩沖液平衡到與之pH和離子強(qiáng)度相同時才可使用。裝好的柱子要求均勻，無紋路，無氣泡，柱頂部平整。用藍(lán)色葡聚糖-2000在恒壓下走柱，若色帶均勻下降，則柱填裝均勻。柱色譜分離技術(shù)

吸附色譜分離技術(shù)3.上樣濕法上樣：把被分離的物質(zhì)溶在少量色譜最初用的洗脫劑中，小心加在吸附劑上層，注意保持吸附劑上表面仍為一水平面，打開下口，待溶液面正好與吸附劑上表面一致時，在上面撒一層細(xì)砂，關(guān)緊柱活塞。干法上樣：可選用一種對其溶解度大而且沸點(diǎn)低的溶劑，取盡可能少的溶劑將其溶解。在溶