中藥制劑的定性鑒別

關(guān)于中藥制劑的定性鑒別

第一節(jié)中成藥的顯微鑒別

一、制片方法1．散劑、膠囊劑取粉末，直接加水或水合氯醛透化裝片。

2．片劑用刀片直接從藥片斷面刮取少量粉末或研碎后取少量樣品透化裝片。

3．水丸、錠劑研成粉末后取少量直接透化裝片。

4．蜜丸取蜜丸切碎，加水?dāng)嚢瑁礈旌?，置離心管中離心分離沉淀。如此反復(fù)處理以除去蜂蜜后透化裝片。若觀察細(xì)胞內(nèi)含物形狀，應(yīng)選用不同試劑制片。淀粉粒水或甘油醋酸試液；糊粉粒甘油；水溶性內(nèi)含物乙醇或水合氯醛試液(不加熱)。

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固定標(biāo)本片制片方法取中成藥粉末置離心管中，加乙醇浸過(guò)上面，玻棒攪拌5～10分鐘后離心使粉末沉積，傾去稀醇液，再加無(wú)水乙醇二次，丙酮一次，丙酮、二甲苯等量混合液一次，如前操作，每次10～20分鐘；最后加入純二甲苯，略加攪拌，取處理后的樣品微量置載玻片上，滴加中性樹膠，加蓋玻片封藏，貼標(biāo)簽。

第3頁(yè),共28頁(yè)，2024年2月25日，星期天二、觀察要點(diǎn)中成藥粉末鏡檢時(shí)，首先要了解處方中的藥味組成，明確其來(lái)源的藥用植物的部位，才能根據(jù)該部位的顯微特征來(lái)進(jìn)行檢出。

(一)根類木栓組織碎片，表面觀多為多角形細(xì)胞，排列緊密。導(dǎo)管直徑、節(jié)的長(zhǎng)短、末梢壁的穿孔及增厚壁的紋理類型。草酸鈣結(jié)晶晶形、分泌組織、淀粉粒的形狀、臍點(diǎn)層紋

(二)根莖類與根類藥材粉末特征相似。而淀粉粒有時(shí)較大，有鱗葉組織，退化的鱗葉表皮細(xì)胞大多狹長(zhǎng)，細(xì)胞壁平直或波狀彎曲。

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(三)莖類1．莖類表皮細(xì)胞及垂周壁的形狀，氣孔的類型，毛茸的類型及形態(tài)；導(dǎo)管的類型、直徑、長(zhǎng)短。管胞的形態(tài)；纖維的形狀、直徑、長(zhǎng)短、有無(wú)晶纖維等。草酸鈣結(jié)晶多為方晶及簇晶，單子葉植物偶見針晶。薄壁組織碎片、石細(xì)胞。

2．皮類纖維的直徑、長(zhǎng)短及形狀，是否成束存在，細(xì)胞壁厚薄、木化與否，能否看到胞腔及壁孔等。石細(xì)胞的形狀、細(xì)胞壁增厚情況。草酸鈣結(jié)晶多為方晶及簇晶，砂晶及針晶較少。皮類藥材粉末不應(yīng)含有木質(zhì)部組織，如導(dǎo)管、管胞等。

3．木類可見導(dǎo)管、管胞、木纖維、木射線及木薄壁細(xì)胞。細(xì)胞壁通常均木化。不應(yīng)有木栓細(xì)胞及綠色組織等。

第5頁(yè),共28頁(yè)，2024年2月25日，星期天(四)花類1．苞片及花萼構(gòu)造類同葉片，表面上可見到氣孔及毛茸。

2．花冠上表皮細(xì)胞常呈乳頭狀或絨毛狀突起而無(wú)氣孔，下表皮細(xì)胞常不呈乳頭狀，細(xì)胞壁微波狀彎曲。維管束組織細(xì)小。

3．雄蕊1）花粉囊內(nèi)壁細(xì)胞的壁不均勻地增厚，呈網(wǎng)狀、螺旋狀、環(huán)紋狀及點(diǎn)狀等；2）花粉粒具圓形、長(zhǎng)圓形或多面形等多種形狀。通常具內(nèi)外兩層壁，外壁多數(shù)具各種雕紋。

4．雌蕊柱頭的表皮細(xì)胞呈乳頭狀突起，或分化成絨毛狀。第6頁(yè),共28頁(yè)，2024年2月25日，星期天

(五)葉類1．表皮上下表皮細(xì)胞的形狀、大小，角質(zhì)層的形態(tài)，垂周壁的形狀、厚度或增厚情況以及有無(wú)氣孔、毛茸等。

2．氣孔氣孔的形狀、大小、型式，保衛(wèi)細(xì)胞的形狀及內(nèi)含物，副衛(wèi)細(xì)胞的數(shù)目、大小、形狀。

3．毛茸注意毛茸的種類。非腺毛：注意細(xì)胞的數(shù)目、形狀、長(zhǎng)短、大小、細(xì)胞壁的厚薄及表面形態(tài)等。多為單列性多細(xì)胞毛，少為單細(xì)胞毛。形狀一般呈長(zhǎng)圓錐形或線形；細(xì)胞壁一般較薄，外壁表面大都光滑。腺毛：注意頭部的形狀、大小、細(xì)胞的數(shù)目、排列情況以及柄部的長(zhǎng)短、細(xì)胞數(shù)目及行列數(shù)目等。第7頁(yè),共28頁(yè)，2024年2月25日，星期天(六)果實(shí)類1．果皮細(xì)胞的形狀、大小。2．外果皮上可能有非腺毛及腺毛，注意長(zhǎng)短、形狀。3．中果皮內(nèi)的分泌組織油細(xì)胞，油室、油管、石細(xì)胞等。

4．內(nèi)果皮石細(xì)胞，大小、細(xì)胞壁的厚薄，如為鑲嵌層，則應(yīng)注意其排列形式。第8頁(yè),共28頁(yè)，2024年2月25日，星期天(七)種子類1．種皮表皮毛的形狀、細(xì)胞壁的厚薄、是否木化、有無(wú)紋理；石細(xì)胞形狀、大小、色澤散布及細(xì)胞壁的增厚情況。柵狀細(xì)胞及油細(xì)胞。

2．外胚乳細(xì)胞大小、形狀、壁厚、色澤、細(xì)胞內(nèi)含物。

3．內(nèi)胚乳細(xì)胞形狀、厚度、內(nèi)含物。

4．胚的子葉有無(wú)分泌組織及細(xì)胞的內(nèi)含物。

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三、應(yīng)用實(shí)例

六味地黃丸的顯微定性鑒別

[顯微鑒別]取本品置顯微鏡下觀察，(1)薄壁組織棕色至黑棕色，細(xì)胞多皺縮，內(nèi)含棕色核狀物。(熟地黃)(2)果皮表皮細(xì)胞橙黃色，表面觀類多角形，垂周壁略連珠狀增厚。(山茱萸)(3)淀粉粒三角狀卵形或矩圓形，直徑24—40um，臍點(diǎn)短縫狀或人字狀。(山藥)3a草酸鈣針晶束3b淀粉粒(4)草酸鈣簇晶存在于無(wú)色薄壁細(xì)胞中，有時(shí)數(shù)個(gè)排列成行。(牡丹皮)(5)不規(guī)則分枝狀團(tuán)塊無(wú)色，遇水合氯醛溶化；菌絲無(wú)色，直徑4-6um。(茯苓)(6)薄壁細(xì)胞類圓形，有橢圓形紋孔，集成紋孔群。(澤瀉)第10頁(yè),共28頁(yè)，2024年2月25日，星期天第二節(jié)中藥制劑的一般理化鑒別法

一、一般化學(xué)反應(yīng)法中藥制劑一般選擇有效成分、特征成分作為鑒別的對(duì)象。一般化學(xué)反應(yīng)鑒別法多在試管中用濕法反應(yīng)進(jìn)行，制劑樣品要先制成適宜的供試液。一般情形下用50％-70％乙醇回流提取制備供試液。

一般化學(xué)反應(yīng)法用于中藥制劑鑒別應(yīng)該注意以下幾點(diǎn)：(1)慎重使用專屬性不好的分析反應(yīng)，如泡沫生成反應(yīng)、三氯化鐵顯色反應(yīng)等。(2)在分析前對(duì)樣品進(jìn)行分離、精制，除去干擾分析反應(yīng)的物質(zhì)，借此改善鑒別方法的專屬性。(3)采用陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照的方式，對(duì)擬定的鑒別方法進(jìn)行反復(fù)驗(yàn)證，防止出現(xiàn)假陽(yáng)性。

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實(shí)例1牛黃解毒片中大黃、黃芩的定性鑒別反應(yīng)取本品6片(去包衣)，研細(xì)，加乙醇10ml，溫?zé)?0分鐘，過(guò)濾，濾液作如下反應(yīng)：(1)取濾液5ml，加鎂粉少量與鹽酸0.5ml，加熱，即顯紅色。（黃芩中有大量黃酮）(2)另取濾液4ml，加氫氧化鈉試液，顯紅色，再加30％過(guò)氧化氫溶液，加熱，紅色不消失，加酸或酸性時(shí)，紅色變?yōu)辄S色。（大黃中含有羥基蒽醌）實(shí)例2牙痛一粒丸中蟾蜍、朱砂、雄黃的定性鑒別反應(yīng)(1)取本品約0.1g，研細(xì)，加氯仿5ml，浸泡1小時(shí)，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)哟佐倭渴谷芙?，再滴加硫酸，初顯藍(lán)紫色，漸變?yōu)樗{(lán)綠色。（蟾蜍）(2)取本品約0.2g，研細(xì)，加水濕潤(rùn)后，加氯酸鉀的硝酸飽和溶液2ml，振搖，放冷，離心，取上清液，加氯化鋇試液0.5ml，搖勻，溶液呈白色渾濁，離心，棄去上層酸液，再加水2ml，振搖，沉淀不溶解。（雄黃）(3)取本品適量，研細(xì)，用鹽酸濕潤(rùn)后，在光潔的銅片上摩擦，銅片表面即顯銀白色光澤，加熱烘烤后，銀白色消失。（朱砂）第12頁(yè),共28頁(yè)，2024年2月25日，星期天

二、顯微化學(xué)鑒別法

(一)取藥材的切片、粉末或中成藥粉末，置載玻片上，滴加各種試劑，加蓋玻片，在顯微鏡下觀察產(chǎn)生的結(jié)晶或沉淀，以及特殊的顏色等，作為鑒別的特征。

例：黃連粉末滴加稀鹽酸，放置5分鐘，可見小檗堿鹽酸鹽黃色結(jié)晶析出。

穿心蓮用水濕潤(rùn)，切成橫切片，滴加乙醇后加Kedde試液，葉肉組織顯紫紅色(穿心蓮內(nèi)酯成分的不飽和內(nèi)酯環(huán)反應(yīng))。

丁香切片滴加30％氫氧化鈉飽和溶液，略放置，可見油室內(nèi)有針狀丁香酚鈉結(jié)晶析出。

肉桂粉末加氯仿2～3滴，略浸漬，速加2％鹽酸苯肼1滴，可見黃色針狀或桿狀結(jié)晶(肉桂酸反應(yīng))。

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(二)取藥材粗粉加適當(dāng)?shù)娜軇┙幔瑢⒔嵋褐幂d玻片上，滴加各種試劑，加蓋玻片，在顯微鏡下觀察反應(yīng)。

例如：檳榔粉末0.5g，加水3～4ml及稀鹽酸1滴，微熱數(shù)分鐘，過(guò)濾，取濾液1滴于載玻片上，加碘化鉍鉀試液1滴，即發(fā)生混濁，放置后可見石榴紅球形或方形結(jié)晶(檳榔堿)。

曼陀羅葉少許，加氯仿提取，提取液蒸干，加發(fā)煙硝酸1滴，顯黃色，加氫氧化鉀1粒，顯紫堇色(莨菪烷類成分Vitali反應(yīng))。

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(三)取藥材切片或粉末，滴加各種試劑，直接觀察反應(yīng)現(xiàn)象。例如：鐘乳石少許，加濃鹽酸數(shù)滴，能產(chǎn)生大量氣泡(碳酸鹽分解產(chǎn)生CO2)。

番木鱉胚乳薄片，加1％釩酸銨-硫酸試液1滴，胚乳速顯紫色(番木鱉堿)，另取切片加發(fā)煙硝酸1滴，即顯橙紅色(馬錢子堿)。

大黃粉末少許，置白磁板上，加氫氧化鈉液l滴，顯深紅色(蒽醌鈉鹽)。

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三、升華法操作方法：取金屬片安放在有圓孔(直徑約2cm)的石棉板上，在金屬片上放一小金屬圈(內(nèi)徑約1.5cm，高約0.8cm)，對(duì)準(zhǔn)石棉板上的圓孔，圈內(nèi)放入預(yù)先研細(xì)成粉末的中藥制劑一薄層，圈上覆蓋載玻片，在石棉板下圓孔處用酒精燈緩緩加熱，至粉末開始變焦，去火待冷，載玻片上有升華物凝集。將載玻片反轉(zhuǎn)后，置顯微鏡下觀察結(jié)晶形狀、色澤，或取升華物加試液觀察反應(yīng)。實(shí)例牛黃解毒丸微量升華鑒別取本品進(jìn)行微量升華，先得白色升華物后（冰片），繼得黃色升華物（大黃中蒽醌）。將升華物分別置顯微鏡下觀察：白色升華物呈不定形的無(wú)色片狀結(jié)晶，加新制的1％香草醛硫酸溶液，漸顯紫紅色，黃色升華物呈黃色針狀結(jié)晶或羽狀結(jié)晶，遇堿顯紅色，遇酸變?yōu)辄S色。第16頁(yè),共28頁(yè)，2024年2月25日，星期天

四、熒光法有些中藥材中含有能產(chǎn)生熒光的化學(xué)成分，在可見光、紫外光照射下能發(fā)出熒光，或經(jīng)試劑處理后發(fā)出熒光。含有這類藥材的中藥制劑可用熒光法進(jìn)行鑒別。通常的操作方法是取制劑的提取液點(diǎn)在濾紙上或試紙上，置紫外光燈下(365nm)觀察，有時(shí)則是加一定的試劑后再進(jìn)行觀察。

實(shí)例l元胡止痛片的熒光鑒別取本品適量，去糖衣，研細(xì)，取粉末1g，加0.25mol／L硫酸液10ml振搖片刻，濾過(guò)，取濾液數(shù)滴，點(diǎn)于濾紙上，陰干后置紫外光燈(365nm)下觀察，顯亮黃色熒光。第17頁(yè),共28頁(yè)，2024年2月25日，星期天

五、光譜法

(一)可見—紫外分光光度法

不同的藥材所含的成分不同，在一定條件下吸收光譜的特征可用于鑒別藥材。利用這一特點(diǎn)，可見-紫外分光光度法也可用于中藥制劑的鑒別。

(二)紅外光譜法第18頁(yè),共28頁(yè)，2024年2月25日，星期天

六、色譜法中藥制劑可用色譜法鑒定，包括薄層色譜法、紙色譜法、氣相色譜法和高效液相色譜法。(一)薄層色譜法使用本法鑒定中藥制劑，通常是在同一塊薄層板上點(diǎn)入樣品和適宜的對(duì)照物，采用同一條件依法層析展開，經(jīng)顯色或用其他方法檢出色譜斑點(diǎn)后，將樣品與對(duì)照物所得的色譜圖進(jìn)行對(duì)比，作出鑒定。

1．樣品應(yīng)作適當(dāng)?shù)念A(yù)處理對(duì)樣品進(jìn)行初步的分離精制。常用的預(yù)處理方法有：升華法，蒸餾法，溶劑提取法，小型層析柱的柱色譜法、離子交換法等。

2．展開劑的選擇選用能突出主要斑點(diǎn)，便于分析比較的展開劑，如果鑒別的對(duì)象相同，應(yīng)首先試用已有的、較成熟的展開劑。如無(wú)現(xiàn)有展開劑，可先以無(wú)水乙醇-苯（1∶4）展開，如主要物質(zhì)的Rf在0.8以上，改用苯-氯仿（1∶3），如主要物質(zhì)的Rf在0.3以下，改用丙酮-甲醇（1∶1）。第19頁(yè),共28頁(yè)，2024年2月25日，星期天

3．對(duì)照品的選擇中國(guó)藥典(一部)作薄層鑒別用的對(duì)照物有對(duì)照品和對(duì)照藥材兩種。TLC用作中藥制劑鑒別的另一類對(duì)照物是陰陽(yáng)對(duì)照溶液。

4．薄層色譜的掃描定性鑒別TLC展開后，斑點(diǎn)的檢識(shí)方法，有通用性的，如在紫外光燈下觀察出現(xiàn)的熒光，或用碘蒸氣、稀硫酸、磷鉬酸顯色等，這類方法專屬性不強(qiáng)。另一類是專屬性較好的顯色劑，例如碘化鉍鉀試液，茚三酮試液和三氯化鋁試液等，一般可依次說(shuō)明斑點(diǎn)歸屬。還可用薄層掃描儀將薄層板上的斑點(diǎn)轉(zhuǎn)換繪制成峰形色譜圖，這種色譜圖以斑點(diǎn)展開后移動(dòng)的距離為橫坐標(biāo)，斑點(diǎn)對(duì)光輻射的吸收強(qiáng)度或發(fā)射熒光的強(qiáng)度為縱坐標(biāo)的峰形曲線圖譜。

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應(yīng)用實(shí)例1.大黃及含大黃的成藥

1）供試液制備取各樣品適量，加甲醇20ml浸漬1h，過(guò)濾，取濾液5ml，蒸干，加水10ml使溶解，再加HCl1ml，水浴加熱30min，立即冷卻，乙醚提取兩次，20ml/次，合并乙醚液，蒸干，殘?jiān)勇确氯芙獬?ml。

2）對(duì)照液制備取大黃對(duì)照藥材0.1g．按供試液制備作為對(duì)照藥材溶液；另取蘆薈大黃素，大黃酸，大黃素，大黃素甲醚，大黃酚對(duì)照品，加甲醇制成1mg/ml的溶液，作為對(duì)照品溶液。

3）薄層板硅膠H加0.3％CMC-Na溶液的自制板；厚度：300um

4）點(diǎn)樣分別點(diǎn)樣4uL。

5）展開劑石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)放置后的上層溶液。第21頁(yè),共28頁(yè)，2024年2月25日，星期天

6）展開方式上行展開；展距：7cm。

7）顯色置紫外光燈(365nm)下檢視。

8）色譜識(shí)別紫外光燈(365nm)下，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的五個(gè)橙黃色熒光主斑點(diǎn)。

9）備注在部分成藥樣品的色譜中，除大黃的五個(gè)蒽醌成分的斑點(diǎn)外，尚有其它熒光斑點(diǎn)，為處方中的其它成分。第22頁(yè),共28頁(yè)，2024年2月25日，星期天1234567891011121314151617

樣品：1．蘆薈大黃素；2．大黃酸；3．大黃素；4．大黃素甲醚；5．大黃酚；6．大黃(掌葉大黃)對(duì)照藥材；7．大黃(唐古特大黃)對(duì)照藥材；8．大黃流浸膏；9．小兒化毒散；10．檳榔四消丸；11．木香檳榔丸；12．枳實(shí)導(dǎo)滯丸；13．牛黃上清丸；14．清寧丸；15．一捻金；16．牛黃解毒片；17．牛黃解毒丸第23頁(yè),共28頁(yè)，2024年2月25日，星期天

2.黃連、黃柏及含黃連、黃柏的成藥

1）供試液制備取各品種藥粉適量，加甲醇5ml，置水浴回流15min，過(guò)濾，濾液濃縮至1ml。

2）對(duì)照液制備取鹽酸香檳酒小檗堿，硫酸黃連堿，硫酸表小檗堿，非洲防己堿，藥根堿，鹽酸巴馬汀對(duì)照品，加甲醇制成每0.5mg/ml的溶液，作為對(duì)照品溶液。

3）薄層板硅膠G自制板；厚度：500um

4）點(diǎn)樣分別點(diǎn)樣1-2ul

5）展開劑苯-醋酸乙酯-甲醇-異丙醇-濃氨試液(6∶3∶∶1.5∶1.5∶0.5)；另槽中加入與展開劑等體積濃氨試液。第24頁(yè),共28頁(yè)，2024年2月25日，星期天

6）展開方式展開箱預(yù)平衡15分鐘