DB1310-T251-2021軟棗獼猴桃組織培養(yǎng)育苗技術(shù)規(guī)程

ICS65.020.01

CCSB05

1310

廊坊市地方標(biāo)準(zhǔn)

DB1310/T251—2021

軟棗獼猴桃組織培養(yǎng)育苗技術(shù)規(guī)程

DB1310/T251—2021

軟棗獼猴桃組織培養(yǎng)育苗技術(shù)規(guī)程

1范圍

本文件規(guī)定了軟棗獼猴桃組培育苗的術(shù)語(yǔ)和定義、培養(yǎng)基制備、初代培養(yǎng)、繼代培養(yǎng)、煉苗、移栽、

大田移栽及管理、苗木出圃標(biāo)準(zhǔn)、保管、包裝及運(yùn)輸、技術(shù)檔案管理。

本文件適用于廊坊及氣候相近地區(qū)軟棗獼猴桃組織培養(yǎng)育苗生產(chǎn)。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB/T6001—1985育苗技術(shù)規(guī)程

GB19174—2010獼猴桃苗木

LY/T1882—2010林木組織培養(yǎng)育苗技術(shù)規(guī)程

3術(shù)語(yǔ)和定義

下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。

組培苗

根據(jù)植物細(xì)胞全能性，將植物的體細(xì)胞、組織或器官進(jìn)行離體培養(yǎng)，經(jīng)過(guò)不同的細(xì)胞分化途徑重建

形成不同的器官，誘導(dǎo)培育出的完整植株。

外植體

是指用于植物組織培養(yǎng)的接種材料，它包括植物體的各種器官、組織、細(xì)胞和原生質(zhì)體等。

繼代培養(yǎng)

將誘導(dǎo)產(chǎn)生的芽、愈傷組織、原球莖或胚狀體等培養(yǎng)物重新分割，接種到新鮮培養(yǎng)基上進(jìn)一步擴(kuò)大

培養(yǎng)的過(guò)程。

4培養(yǎng)基制備

培養(yǎng)基配方

基本培養(yǎng)基采用MS培養(yǎng)基，具體的外植體誘導(dǎo)培養(yǎng)基及繼代培養(yǎng)基配方表見(jiàn)附錄A。

母液配制

1

DB1310/T251—2021

按照LY/T1882—2010林木組織培養(yǎng)育苗技術(shù)規(guī)程中第4章的4.1培養(yǎng)基母液配制及保存執(zhí)行。

培養(yǎng)基配制

根據(jù)培養(yǎng)基配方與培養(yǎng)基配制量，按比例吸取母液配制培養(yǎng)基溶液，每加一種母液攪拌均勻后再加

入第二種母液，并加入0.7%的凝固劑與3%的蔗糖，加水定容后充分?jǐn)嚢枞芙狻⑴渲坪玫呐囵B(yǎng)基溶液裝

入不銹鋼鍋，加熱至沸騰，使培養(yǎng)基完全溶解，然后用1.0mol/L鹽酸或1.0mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)整pH

值至5.8～6.0。培養(yǎng)基加熱溶解后分裝到高度為10cm～15cm的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，體積為培養(yǎng)瓶容量的30%～40%，

密封后備用。

培養(yǎng)基滅菌

培養(yǎng)基配制完成后，在24h內(nèi)完成滅菌。將分裝好的培養(yǎng)基放入滅菌鍋內(nèi)，嚴(yán)格按滅菌鍋的使用要

求操作，滅菌氣壓0.11MPa，溫度121℃，滅菌時(shí)間20min～25min。培養(yǎng)基滅菌完成后待溫度下降到80℃

以下取出，放置在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上保存。

培養(yǎng)基保存

培養(yǎng)基宜現(xiàn)配現(xiàn)用。確需保存時(shí)，應(yīng)放置在干凈、避光的室內(nèi)進(jìn)行保存。室溫25℃以下保存應(yīng)在7d

內(nèi)使用完，2℃～4℃冷藏保存應(yīng)在14d內(nèi)使用完。

5初代培養(yǎng)

外植體采集

5.1.1采集母株要求

采集母株為種質(zhì)優(yōu)良、性狀穩(wěn)定、生長(zhǎng)健壯、無(wú)病蟲害的軟棗獼猴桃植株。

5.1.2采集時(shí)間和方法

4月至9月，選擇連續(xù)2d以上晴天的傍晚，采集母株樹(shù)冠外圍中上部幼嫩新梢，剪除葉片作為外植

體備用；12月至翌年3月，采集一年生枝條，修剪成20cm左右枝段，流水沖洗后將其下端浸泡在盛有清

水的容器中，在23℃～25℃培養(yǎng)箱中催芽，每2d～3d換一次水，待葉芽萌動(dòng)長(zhǎng)出新梢后，采集幼嫩新

梢做外植體。

5.1.3采集記錄

采集后標(biāo)明品種名稱、采集地點(diǎn)、采集時(shí)間、采集人等信息，建立信息檔案。

外植體處理

5.2.1保藏

可用濕潤(rùn)毛巾等保濕材料包裹后保存0.5h～4.0h；用泡沫保鮮箱配備冰袋低溫保藏48.0h，注意

枝條不可直接接觸冰袋。

5.2.2預(yù)處理

2

DB1310/T251—2021

用自來(lái)水沖洗外植體表面，將外植體剪成4.0cm～6.0cm的帶芽莖段，放入裝有0.3%～0.5%中性洗

潔劑水溶液的培養(yǎng)瓶中，于振蕩培養(yǎng)箱中100轉(zhuǎn)/分鐘慢速振蕩30min，再用流水沖洗莖段1.0h～2.0h。

外植體消毒及接種

5.3.1接種器具準(zhǔn)備

5.3.1.1超凈工作臺(tái)消毒

接種前使用75%酒精將超凈工作臺(tái)的臺(tái)面及內(nèi)壁擦拭干凈，然后啟動(dòng)超凈工作臺(tái)并開(kāi)啟紫外燈消毒

30min。關(guān)閉紫外燈后開(kāi)啟超凈工作臺(tái)風(fēng)機(jī)，鼓風(fēng)10min后方可進(jìn)行接種工作。

5.3.1.2接種工具滅菌

接種剪、槍狀鑷、接種盤、燒杯等接種工具可提前用高壓滅菌鍋滅菌，在接種過(guò)程中可用置于超凈

工作臺(tái)上的酒精燈或電熱消毒器滅菌。滅菌后的接種工具擱置在無(wú)菌的接種器皿上，待冷卻至室溫后方

可使用。

5.3.2外植體消毒

用75%酒精對(duì)雙手及手腕消毒，將預(yù)處理后的材料置于已消毒的超凈工作臺(tái)上，剪成帶1個(gè)或2個(gè)芽

的莖段置于已滅菌的燒杯中，先用75%酒精浸泡外植體30s，無(wú)菌水清洗3次，每次30s，再用10%次氯酸

鈉溶液滅菌10min，無(wú)菌水清洗3次，每次30s，用無(wú)菌濾紙吸干外植體表面的水分。也可選用其它外植

體消毒化學(xué)藥品，按LY/T1882—2010的有關(guān)規(guī)定執(zhí)行。

5.3.3接種

于超凈工作臺(tái)上將已消毒的外植體莖段兩端各剪掉1mm，垂直插入誘導(dǎo)培養(yǎng)基，每個(gè)培養(yǎng)瓶接種3

個(gè)莖段，均勻分布，接種后將培養(yǎng)瓶瓶口在酒精燈火焰上灼燒1s～2s，迅速蓋好瓶蓋，在培養(yǎng)瓶瓶壁

上標(biāo)明品種名稱、接種日期、接種人等信息，放入培養(yǎng)室培養(yǎng)。培養(yǎng)室溫度控制在（25±1）℃，光照

強(qiáng)度為1500lx～3000lx，光照時(shí)數(shù)為16h/d。

6繼代培養(yǎng)

在誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)20d～30d出芽后，用已滅菌的接種剪，將芽高1.0cm以上的不定芽剪下，切

割成帶1個(gè)芽的莖段，轉(zhuǎn)接至繼代培養(yǎng)基中。生長(zhǎng)20d～30d后，將繼代培養(yǎng)基中獲得的不定芽，再次轉(zhuǎn)

接至新配制的繼代培養(yǎng)基中。此后定期將繼代培養(yǎng)基中的不定芽分割、轉(zhuǎn)接，擴(kuò)大不定芽數(shù)量。

7煉苗

當(dāng)不定芽高度達(dá)3cm以上時(shí)，先將培養(yǎng)瓶置于溫度在20℃～30℃的溫室進(jìn)行閉瓶煉苗3d，再打開(kāi)培

養(yǎng)瓶蓋煉苗2d，煉苗期間避免強(qiáng)光直射和高溫灼傷瓶苗。

8移栽

容器

3

DB1310/T251—2021

容器規(guī)格為直徑5.0cm～6.0cm、高度10.0cm～12.0cm的塑料營(yíng)養(yǎng)缽或無(wú)紡布育苗袋。

基質(zhì)

將蛭石和泥炭土按1:1體積比混合均勻，裝入容器備用。

基質(zhì)消毒

移栽前1d～2d用500倍～800倍的50%多菌靈溶液澆透。

溫室移栽及管理

8.4.1溫室移栽

移栽時(shí)間在3月～4月進(jìn)行。用自來(lái)水清洗干凈不定芽基部的培養(yǎng)基，剪去部分老葉及基部的愈傷組

織，只留兩葉一心，將不定芽基部用1mg/mL的萘乙酸溶液速蘸5s～10s，快速移栽到營(yíng)養(yǎng)缽或育苗袋

中，并澆透水。移栽時(shí)注意輕拿輕放以免損傷不定芽，移栽后7d內(nèi)用塑料薄膜或保鮮膜覆蓋以保濕。

8.4.2溫濕度控制

移栽后保持溫室溫度在23℃～28℃，空氣濕度85%以上。

8.4.3水肥管理

移栽7d～14d后去除薄膜，澆水以見(jiàn)干見(jiàn)濕為原則，保證基質(zhì)不缺水即可。移栽苗長(zhǎng)出新葉后，每

隔7d～10d噴施1次葉面肥，連續(xù)噴3次～4次。

8.4.4病蟲害防治

病蟲害防治遵照GB/T6001—1985的要求執(zhí)行。

9大田移栽及管理

溫室幼苗高10cm以上時(shí)，澆一次透水，選擇在風(fēng)小、光照弱的天氣的傍晚，去除營(yíng)養(yǎng)缽或育苗袋，

將帶土坨的幼苗按株距20cm、行距40cm移栽到大田。移栽后澆一次透水，以后根據(jù)土壤水分狀況及時(shí)

灌水。前期可追施氮肥，中后期適當(dāng)增加磷鉀肥的使用，并做好病蟲害防治及人工除草和松土。

10苗木出圃標(biāo)準(zhǔn)

側(cè)根數(shù)量≥4條，側(cè)根長(zhǎng)度≥20cm，當(dāng)年生苗主干高度≥100cm、地徑≥0.4cm、主干完全木質(zhì)化。

11保管、包裝及運(yùn)輸

按照GB19174—2010中第7章執(zhí)行。

12技術(shù)檔案管理

按照GB/T6001—1985中第13章執(zhí)行。

4

DB1310/T251—2021

附錄A

（資料性）

軟棗獼猴桃組培苗培養(yǎng)基配方表

A.1軟棗獼猴桃組培苗培養(yǎng)基配方表見(jiàn)表A.1。

表A.1軟棗獼猴桃組培苗培養(yǎng)基配方表

成分名稱藥品名稱誘導(dǎo)培養(yǎng)基mg/L繼代培養(yǎng)基mg/L

NH4NO38251650

KNO39501900

大量元素MgSO47H2O185370

KH2PO485170

CaCl22H2O165330

FeSO47H2O27.827.8

鐵鹽

Na2EDTA37.237.2

MnSO44H2O22.322.3

H3BO36.26.2

ZnSO47H2O8.658.65

微量元素KI0.830.83

CuSO45H2O0.0250.025

Na2MoO42H2O0.250.25

CoCl26H2O0.0250.025

甘氨酸22

鹽酸硫胺素0.10.1

有機(jī)物鹽酸吡哆醇0.50.5

煙酸0.50.5

肌醇100100

碳源蔗糖3000030000

6-BA0.50.5

植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑

ZT0.5-

凝固劑瓊脂70007000

pH6.06.0

注：FeSO47H2O應(yīng)先與Na2-EDTA配合成絡(luò)合物，然后才與其他溶液混合。

5

DB1310/T251—2021

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定

起草。

本文件由廊坊市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局提出。

本文件起草單位：廊坊市興延科技服務(wù)有限公司、廊坊師范學(xué)院。

本文件主要起草人：蘇彥蘋、申彥平、馮雪、王秋芬、褚卓棟、孫艷香、張程亮、梁金明、袁志剛、

張方悅。

I

DB1310/T245—2021

附錄B

（資料性）

蘆筍病蟲綜合防控推薦化學(xué)農(nóng)藥及使用方法

B.1蘆筍生產(chǎn)中推薦的化學(xué)農(nóng)藥及使用方法見(jiàn)表B.1。

表B.1蘆筍病蟲綜合防控推薦化學(xué)農(nóng)藥及使用方法

病蟲害名稱防治適期農(nóng)藥名稱及劑量/畝使用方法

地下害蟲采筍結(jié)束后3%辛硫磷顆粒劑5kg～6kg拌細(xì)土撒施

木蠹蛾、棉鈴蟲、十四幼蟲孵化盛期200g/L氯蟲苯甲酰胺1500倍液噴霧

點(diǎn)負(fù)泥蟲、斜紋夜蛾

蚜蟲若蚜盛期或有蚜株10%吡蟲啉可濕性粉劑1500倍液噴霧

率10%

薊馬幼蟲發(fā)生初期7.5%甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽水分散劑1000倍液；噴霧

60g/L乙基多殺菌素1500倍液。

煙粉虱發(fā)生初期24%螺蟲乙酯懸浮劑2000倍液；25%聯(lián)苯菊酯乳油1500倍液；噴霧

25%噻蟲嗪水分散粒劑1500倍液。

莖枯病、褐斑病發(fā)病初期70%代森錳鋅可濕性粉劑600倍液；噴霧

50%甲基托布津可濕性粉劑600倍液；

10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑800倍液。

根腐病發(fā)病初期40%多菌靈超微粉劑1000倍液灌根

5

DB1310/T250—2021

附錄A

（資料性）

設(shè)施選配

A.1根據(jù)使用功能綜合配置不同鍛煉功能的設(shè)施種類見(jiàn)表A.1。

表A.1按主要功能配置表

序號(hào)