支原體菌株復(fù)蘇標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

。支原體菌株復(fù)蘇操作規(guī)程部門/職務(wù)姓名簽字日期起草人審核人批準(zhǔn)人批準(zhǔn)人生效日期：【年月日】頒發(fā)部門分發(fā)部門1目的建立規(guī)范支原體菌株復(fù)蘇的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，確保支原體復(fù)蘇質(zhì)量和活率。2范圍適用于本公司的支原體菌株復(fù)蘇操作。3職責(zé)4定義無5內(nèi)容5.1儀器設(shè)備5.1.1生物安全柜、恒溫培養(yǎng)箱、移液槍、高壓蒸汽滅菌器、混勻儀、水浴鍋（56℃）、電動移液器。5.2試劑及耗材5.2.11000uL槍頭、滅菌試管、滅菌膠塞、血清、支原體肉湯培養(yǎng)基、精氨酸支原體肉湯培養(yǎng)基、10mL刻度移液管。5.3準(zhǔn)備工作5.3.1將胎牛血清在56℃水浴鍋中水浴1小時，滅能。5.3.2將試管用錫紙包裹好試管口，將膠塞放進(jìn)飯盒，經(jīng)過121℃，30分鐘，進(jìn)行高壓蒸汽滅菌。5.4培養(yǎng)基配制5.4.1支原體肉湯培養(yǎng)基：21g干粉培養(yǎng)基，加1L純水，加熱到溶解，121℃，15分鐘高壓蒸汽滅菌。5.4.2精氨酸支原體肉湯培養(yǎng)基：21g干粉培養(yǎng)基，加1L純水，加熱到溶解，121℃，15分鐘高壓蒸汽滅菌。5.5操作步驟 5.5.1生物安全柜提前開啟紫外燈消毒30分鐘，培養(yǎng)基經(jīng)滅菌，待溫度下降到45℃以下。5.5.2將培養(yǎng)基分裝，每支試管8mL，加入2mL滅能血清，混勻5.5.3若為零代將菌種從-4℃冰箱取出，用75%酒精進(jìn)行表面消毒噴，用無塵布擦拭干凈后，放入生物安全柜內(nèi)，用止血鉗將鋁蓋打開。（注意：將所有有關(guān)菌株的物品禁止隨意丟棄，防止發(fā)生污染與泄露）。5.5.4若菌株為零代菌種肺炎支原體用1.0mL支原體肉湯培養(yǎng)基輕輕地旋轉(zhuǎn)冷凍管以充分混合并完全溶解,若菌株為零代菌種口腔支原體用1.0mL精氨酸支原體肉湯培養(yǎng)基輕輕地旋轉(zhuǎn)冷凍管以充分混合并完全溶解。5.5.5將溶解混合好的肺炎支原體、口腔支原體0.5mL分別接種于9.5mL支原體肉湯培養(yǎng)基和9.5mL精氨酸支原體肉湯培養(yǎng)基中混勻，經(jīng)36℃±1℃培養(yǎng)至肺炎支原體培養(yǎng)基由橙紅色變?yōu)槌赛S色，傳代，口腔支原體培養(yǎng)基由橙黃色變?yōu)槌燃t色，可傳代。5.5.6若為凍存后的菌種從-80℃冰箱取出，用37℃水浴溶解后，轉(zhuǎn)移到傳遞窗內(nèi)，用75%酒精進(jìn)行表面消毒噴，用無塵布擦拭干凈后，轉(zhuǎn)移到生物安全柜內(nèi)，用止血鉗將封口膜撕開，打開凍存管。（注意：將所有有關(guān)菌株的物品禁止隨意丟棄，防止發(fā)生污染與泄露）。5.5.7溶解后的菌種直接用微量移液槍轉(zhuǎn)移到相應(yīng)的培養(yǎng)基內(nèi)，混勻。肺炎支原體用9.0mL支原體肉湯培養(yǎng)基，口腔支原體用9.0mL精氨酸支原體肉湯培養(yǎng)基。5.5.8經(jīng)36℃±1℃培養(yǎng)至肺炎支原體培養(yǎng)基由橙紅色變?yōu)槌赛S色，傳代，口腔支原體培養(yǎng)基由橙黃色變?yōu)槌燃t色，可傳代。6派生記錄6.1《支原體菌