安捷倫液相色譜儀HPLC系統(tǒng)中氣泡對檢測的影響及解決方法 液相色譜解決方案

第第頁安捷倫液相色譜儀HPLC系統(tǒng)中氣泡對檢測的影響及解決方法液相色譜解決方案安捷倫液相色譜儀HPLC系統(tǒng)中氣泡對檢測的影響及解決方法利用安捷倫液相色譜儀分析時，若存在氣泡，會造成色譜圖上出現(xiàn)尖銳的噪聲峰，嚴重時會造成分析靈敏度下降；氣泡變大進入流路或色譜柱時會使流動相的流速變慢或不穩(wěn)定，使基線起伏。原因：一是流動相溶液中往往因溶解有氧氣或混入了空氣而形成氣泡；二是系統(tǒng)開始工作時未能將流路中的空氣驅(qū)趕干凈；三是在注入樣品時不注意混入了空氣。解決方法：1.吹氦脫氣法使用在液體中比空氣溶解度低的氦氣，在0.1Mpa壓力下，以約60ml/min流速通入流動相10-15min以驅(qū)除溶解的氣體。此法使用于所有的溶劑。2.加熱回流法此法的脫氣效果較好；3.抽真空脫氣法此時可使用微型真空泵，降壓至0.05-0.07MPa即可除區(qū)溶解的氣體。顯然使用水泵連接抽濾瓶和G4微孔玻璃漏斗可一起完成過濾機械雜質(zhì)和脫氣的雙重任務(wù)。由于抽真空會引起混合溶劑組成的變化，故此法適用于單一溶劑體系脫氣。對多元溶劑體系應(yīng)預(yù)先脫氣后再進行混合，以保證混合后的比例不變。4.超聲波脫氣法目前實驗室使用zui廣泛的脫氣方法，將配制好的流動相連同容器一起放入超聲波水漕中脫氣10-20min即可。該方法操作簡便，基本能滿足日常分析的要求。5.在線真空脫氣法把真空脫氣裝置串聯(lián)到儲液系統(tǒng)中，并結(jié)合膜過濾器，實現(xiàn)了流動相在進入輸液泵前的連續(xù)真空脫氣。此法的脫氣效果明顯優(yōu)于上述幾種方法，并適用于多元溶劑體系。6.在安捷倫液相色譜儀開始工作前，可以用注射器連接恒流泵的排空閥，抽入流動相，將流路中的空氣驅(qū)趕干凈。7.在注入樣品前注意排出樣品注射器中的空氣。液相色譜儀的操作與基線問題處理高效液相色譜儀適宜于分離、分析高沸點、熱穩(wěn)定性差、有生理活性及相對分子量比較大的物質(zhì)，因而廣泛為化學(xué)、醫(yī)學(xué)、工業(yè)、農(nóng)學(xué)、商檢和法檢等學(xué)科領(lǐng)域中針對這種精密而又運用廣泛的科學(xué)儀器。下面我們來聊一聊基線。HPLC常見的基線問題主要有基線漂移以及基線噪音?；€漂移線漂移基線漂移是色譜工普遍遇到的問題。一般說來，機器剛起動時，基線容易漂移，大概要30min的平衡時間，如果用了緩沖溶液、緩沖鹽，或者在低波長下(220nm)平衡時間相對會比較長，仍然發(fā)現(xiàn)基線漂移，原因可能有以下幾種：1、柱溫波動控制好柱子和流動相的溫度，檢查是否有打開的窗戶或空調(diào)對著柱溫箱。2、流通池被污染或有氣體用甲醇或其他強極性溶劑沖洗流通池(盡量斷開柱子)。如有需要，可以用1N的硝酸(不要用鹽酸)。3、紫外燈能量不足更換新的紫外燈4、流動相污染、變質(zhì)或由低品質(zhì)溶劑配成。檢查流動相的組成，使用高品質(zhì)的化學(xué)試劑及HPLC級的溶劑?；€噪音對于紫外檢測器,氘燈光源打開后要預(yù)熱30min以上,基線才能穩(wěn)定。噪聲是指與被測物無關(guān)的檢測器輸出信號的隨機擾動變化,分短期噪聲和長期噪聲兩種?；€噪音(規(guī)則的)產(chǎn)生基線噪音的原因有：在流動相、檢測器或泵中有空氣;漏液;流動相混合不完全;溫度影響(柱溫過高,檢測器未加熱);在同一條線上有其他電子設(shè)備;泵振動。了避免基線噪音,在正式進樣之前,需要對流動相脫氣;沖洗系統(tǒng)以除去檢測器或泵中的空氣;檢查管路接頭是否松動;泵是否漏液;是否有鹽析出和不正常的噪音,如有必要,更換泵密封;用手搖動使溶劑混合均勻或使用低粘度的溶劑減少差異或加上熱交換器;有其他電子設(shè)備時斷開LC、檢測器和記錄儀,檢查干擾是否來自于外部,加以更正;泵振動時在系統(tǒng)中加入脈沖阻尼器?；€噪音(不規(guī)則的)(1)漏液：檢查接頭是否松動,泵是否漏液,是否有鹽析出和不正常的噪音。如有必要,更換密封,檢查流通池是否漏液。(2)流動相污染、變質(zhì)或由低質(zhì)溶劑配成：檢查流動相的組成。(3)流動相各溶劑不相溶：選擇互溶的流動相。(4)檢測器/記錄儀電子元件的問題：斷開檢測器和記錄儀的電源,檢查并更正。(5)系統(tǒng)內(nèi)有氣泡：用強極性溶液清洗系統(tǒng);檢測器內(nèi)有氣泡,清洗檢測器,在檢測器后面安裝背景壓力調(diào)節(jié)器。(6)流通池污染(即使是極少的污染物也會產(chǎn)生噪音):用硝酸清洗流通池;(7)檢測器燈能量時不足更換燈;(8)色譜柱填料流失或阻塞:更換色譜柱。(9)流動相混合不均勻或混合器工作不正常:維修或更換混合器,在流動相不走梯度時,不建議使用泵的混合裝置。高效液相色譜儀操作步驟如下：1)過濾流動相，根據(jù)需要選擇不同的濾膜.2)對抽濾后的流動相進行超聲脫氣10-20分鐘。3)打開hplc工作站（包括計算機軟件和色譜儀），連接好流動相管道，連接檢測系統(tǒng)。4)進入hplc控制界面主菜單，點擊manual，進入手動菜單。5)有一段時間沒用，或者換了新的流動相，需要先沖洗泵和進樣閥。6)調(diào)節(jié)流量，初次使用新的流動相，可以先試一下壓力，流速越大，壓力越大，一般不要超過2000。7)設(shè)計走樣方法。8)進樣和進樣后操作。9)關(guān)機時，先關(guān)計算機，再關(guān)液相色譜。10)填寫登記本，由負責(zé)人簽字。11)流動相均需色譜純度，水用20m的去離子水。12)柱子是非常脆弱的，第一次做的方法，先不要讓液體過柱子。13)所有過柱子的液體均需嚴格的過濾。14)壓力不能太大，可以不要超過2000p