2020年臨床檢驗中心PCR實驗室標準操作程序概要

****醫(yī)院

臨床檢驗中心

臨床基因擴增實驗室

管理程序

標準操作程序（SOP）

起草人：

批準人：

生效日期：年月日

目錄

臨床基因擴增實驗室的設置..............................................3

臨床基因擴增實驗室內部管理規(guī)章.......................................11

臨床基因擴增實驗室人員管理、配置及培訓...............................15

臨床基因擴增實驗室的設施和環(huán)境.......................................18

臨床基因擴增實驗室清潔制度規(guī)章.......................................19

臨床基因擴增實驗室儀器設備管理規(guī)章...................................21

Roche480n實時熒光定量PCR儀操作規(guī)程、維護方法、校準（SOP-1）未修改26

Finnpipette可調式移液器的使用與維護標準操作（SOP-2）......................35

Finnpipette可調式移液器校準標準管理程序（SOP-3）..........................39

溫度計及濕溫度計的校正標準管理程序（SOP-4）...............................40

離心機使用與維護標準操作程序（SOP-5）.....................................41

超凈工作臺使用與維護標準操作程序（SOP-6）.................................45

恒溫水浴箱使用、維護與校正（SOP-7）.....................................46

旋渦振蕩器使用與維護標準操作程序（SOP-8）..............................49

冰箱的使用與維護標準操作程序（SOP-9）..................................50

可移動紫外燈標準操作程序（SOP-10）......................................52

儀器故障時標記、放置標準操作程序（SOP-11）.............................53

儀器設備發(fā)生故障時的應急處理程序（SOP-12）............................54

臨床標本的收集管理標準操作程序（SOP-13）................................57

檢驗標本的驗收和保存標準操作程序（SOP-14）.............................58

樣本編號的標準操作程序（SOP-15）...............................................................................63

PCR標本管理標準操作程序（S0P-16）....................................................................65

標本前處理標準操作程序（S0P-17）..........................................................................67

核酸擴增及產(chǎn)物分析檢測標準操作程序（S0P-18）..................................................68

乙型肝炎病毒基因擴增檢測標準操作程序（S0P-19）............................................70

基因擴增檢測實驗結果分析標準操作程序（SOP-20）.................................................75

實驗結果有效性判斷標準操作程序（SOP-21）........................................................78

室內質量控制標準操作程序（SOP-22）.........................................................................79

實驗室試劑耗材購買、驗收和貯存的標準操作程序（SOP-23）............................85

試劑質檢標準操作程序（SOP-24）..............................................................................91

實驗室耗材質檢標準操作程序（SOP-25）..................................................................94

手套使用及左右手分開的原則（SOP-26）..................................................................97

實驗室化學試劑貯存使用、廢棄物處理及生物防護（SOP-27）..............................98

抱怨的處理程序（SOP-28）........................................................................................101

實驗室記錄管理規(guī)章標準操作程序（SOP-29）........................................................105

檢驗報告單管理標準操作程序（SOP-30）................................................................108

實驗室臺面擺放順序程序（SOP-31）........................................................................112

實驗室常用溶液配置標準操作程序（SOP-32）........................................................113

學海無涯

臨床基因擴增實驗室的設置

1目的：依照實驗室設置規(guī)范實現(xiàn)核酸擴增熒光檢測實驗室配置合理，以保證

實驗工作健康有序及實驗結果的可靠性

2范圍：臨床基因擴增實驗室及相關工作人員，并明確各項規(guī)章制度

3操作人：****

4實驗室設置規(guī)章：

4.1依據(jù)：

本實驗室按《臨床基因擴增檢驗實驗室管理暫行辦法》（衛(wèi)醫(yī)發(fā)[XXXX]10

號）中臨床基因擴增檢驗實驗室基本設置標準結合本實驗室的條件進行設

置，并嚴格按照《臨床基因擴增檢驗實驗室工作規(guī)范》（衛(wèi)檢字XXXX第8

號）的要求開展臨床基因擴增工作（擬開展基因擴增檢驗項目見附表1）

4.2實驗室設置：

4.2.1實驗室主要由試劑儲存和準備區(qū)（PCR-I）、標本制備區(qū)（PCR-II）、PCR

擴增及產(chǎn)物分析區(qū)（PCRTII）三個工作室組成。這三區(qū)各自獨立，每個區(qū)設有

緩沖間。其布局見實驗室平面圖（見附圖1）。

4.2.2設立各區(qū)的門牌，分別是：“試劑儲存和準備區(qū)（PCR-I）”、“標本制備

區(qū)（PCR-H）”、“PCR擴增及產(chǎn)物分析區(qū)（PCRTH）”，并在各區(qū)門上貼有“非

本室工作人員不得進入”標記。

4.2.3建立實驗室內務管理，并放在進入實驗室的明顯位置（如置于緩沖區(qū)的

墻上；內務管理應有進入實驗的工作流程、進入實驗室的要求、實驗前的準

備及清潔等）。

4.2.4三個工作區(qū)各配備專用的設備、儀器、輔助設施、耗材、清潔用品、辦

公用品、專用工作服，并有明顯的區(qū)分標識：試劑準備區(qū)一藍色，標本制備

區(qū)一紫色，PCR擴增及產(chǎn)物分析區(qū)一黑色。各區(qū)的實驗物品不得混用（實驗

室主要設備一覽表見表3）。

4.2.5進入各區(qū)的工作流程為：試劑儲存和準備區(qū)一標本制備區(qū)一PCR擴增及產(chǎn)

物分析區(qū)。

4.2.6進入實驗室必須更換有本室標識的工作服及清潔鞋套，工作人員離開某

一工作區(qū)時，該區(qū)物品不得帶出本區(qū)（包括工作服等）。

4.3各區(qū)實驗設備及用品配置：

4.3.1試劑儲存和準備區(qū)：

****醫(yī)院臨床基因擴增實驗室--

學海無涯

冰箱（2?8c和-15C）、可調式移液器（覆蓋0.5~1000ul）、紫外消毒

車、固定紫外線燈，混勻器，專用工作服，一次性用品（手套、帶濾心的吸

頭、鞋套、吸水紙、耐高壓處理的離心管），專用實驗記錄本及記號筆等。

4.3.2標本制備區(qū)：

冰箱（2?8℃和-15℃）、臺式高速離心機、水浴鍋、凈化工作臺、混勻

器、可調式移液器（覆蓋1?lOOOul）、紫外消毒車、固定紫外線燈，專用工

作服，一次性用品（手套、帶濾心的吸頭、鞋套、吸水紙、耐高壓處理的離

心管），專用實驗記錄本及記號筆等。

4.3.3PCR擴增及產(chǎn)物分析區(qū)：

Line-Gene全自動熒光定量PCR核酸擴增儀、紫外消毒車、固定紫外線

燈，專用工作服，一次性用品（手套、鞋套、吸水紙等），專用實驗記錄本及

記號筆等。

4.4實驗室人員設置：

實驗室人員配置：我院PCR實驗室配備有3名工作人員，其中1人具檢

驗師職稱，2人具主管檢驗師職稱。已全部經(jīng)過安徽省臨床檢驗中心培訓，

并取得培訓合格證（實驗室工作人員一覽表見表2）。

起草人批準人生效日期

年月日

****醫(yī)院臨床彝1擴增實驗室--

學海無涯

附表1擬開展臨床基因擴增檢驗項目一覽表

項目方法備注

HBVDNAPCR熒光實時擴增Line-Gene擴增儀

****醫(yī)院臨床基朝擴增實驗室--

學海無涯

表2臨床基因擴增檢驗實驗室工作人員一覽表

一

備

性

序年學所學畢業(yè)從事本培訓合

注

別

號姓名職務職稱

齡歷專業(yè)時間專業(yè)時間格證號

中

1XXX//OC主管檢驗82.742200XXXX**

專

中

2XXX//專8主管檢驗81.744XXXXOOO**

中

3XXX//f檢驗師檢驗95.731XXXXOOO**

專

****醫(yī)院臨床基因擴增實驗室--

學海無涯

表3臨床基因擴增檢驗實驗室儀器設備一覽表

接

放

接

受

儀

器

置

收

序

備

人

設備

地

狀

號生產(chǎn)廠家儀器型號儀器序號接收日期啟用日期

名

簽

稱

點

態(tài)注

字

試

劑

紫

外

江陰市光

準

線

消全

1電儀器有ZXCI類B型XXXX-4-18XXXX-5-9

備

毒

車-新

限公司區(qū)

試

劑

美菱XX美菱

全準

2電冰股份有限BCD-10962417XXXX-4-19XXXX-4-19

新備

箱公司區(qū)

試

劑

調

可

上海雷勃全

移

準

式

3分析儀器4500120Y55777XXXX-4-19新XXXX-5-9

液

備

有限公司區(qū)

試

劑

可調上海雷勃

準

式

移全

4分析儀器4500020Y50041XXXX-4-19XXXX-5-9

液

備

器

，新

有限公司區(qū)

試

劑

可調上海雷勃

全準

5式移分析儀器4500100Y45849XXXX-4-19XXXX-5-9

新備

液器有限公司區(qū)

試

劑

調

可

上海雷勃全

移

準

式

6分析儀器4500090Y56734XXXX-4-19新XXXX-5-9

備

液

有限公司區(qū)

試

劑

調

湘儀天平準

7TG328XXXX-5-8撥XXXX-5-8

儀器廠備

天平區(qū)

樣

菌

無

本

化

凈

浙江大學全

準

作

新

8工凈化設備GEM-SHGEM-SH-01XXXX-4-16XXXX-5-9

備

臺

廠區(qū)

樣

本

紫外江陰市光

消

準

線電儀器有全

9一ZXCI類B型XXXX-4-18XXXX-5-9

毒

備

車限公司械新

r區(qū)

****醫(yī)院臨床鰥1擴增實驗室--

學海無涯

接

放

接

受

儀

器

置

收

備

人

序設備

地

生產(chǎn)廠"家儀器型號儀器序號接收日期狀啟用日期

名

簽

稱

點

號態(tài)注

字

樣

本

高

速

上海安亭全

心

準

離

10科學儀器TGL-16B17XXXX-3-1新XXXX-3-19

備

機

r區(qū)

樣

本

美

菱XX美菱

冰

準

電全

11股份有限BCD-10962422XXXX-4-19XXXX-4-19

備

箱新

公司區(qū)

樣

用

三

本

熱

電

上海躍進

溫

準

恒全

12S.HH.W21.42001006XXXX-2-15XXXX-3-30

浴醫(yī)療器械

備

水新

區(qū)

箱r

樣

本

微型

上海醫(yī)科全

勻

準

混

13大學儀器XW-80AQ/DAALCo-XXXXXXXX-2-15新XXXX-3-30

器

備

廠區(qū)

樣

本

調

可上海雷勃

移

準

式全

14分析儀器4500020Y50040XXXX-4-19XXXX-5-9

梃

新備

有限公司區(qū)

樣

本

可調

上海雷勃全

準

移

式

15分析儀器4500100Y45850XXXX-4-19新XXXX-5-9

備

由

液

器

有限公司區(qū)

樣

本

可

調

上海雷勃全

準

式

移

16分析儀器4500090Y56733XXXX-4-19新XXXX-5-9

備

液

器Y

有限公司區(qū)

樣

本

調

可上海雷勃

移

準

式全

17分析儀器4500050F59968XXXX-4-19XXXX-5-9

備

梃新

有限公司區(qū)

K

杭州JahePCR

全

Thermo-擴

18FGD-33ABYQ6079-244XXXX-4-16新XXXX-5-9

Magnetic增

儀

有限公司區(qū)

R

江陰市光PC

紫外擴

電儀器有全

19線消ZXCI類B型XXXX-4-19XXXX-5-9增

限公司械新區(qū)

毒車

廠

****醫(yī)院臨床鄲I擴增實驗室--

學海無涯

圖1基因擴增實驗室平面圖

****醫(yī)院臨床基因擴增實驗室

****醫(yī)院臨床基因擴增實驗室--

學海無涯

臨床基因擴增實驗室內部管理規(guī)章

1目的：依照實驗室管理規(guī)范實現(xiàn)全面質量管理，實現(xiàn)核酸擴增熒光檢測實驗

室有專人負責，以保證實驗工作健康有序及實驗結果的可靠性

2范圍：臨床基因擴增實驗室及相關工作人員，并明確了各項規(guī)章制度

3操作人：**

4規(guī)章：

4.1實驗室內務管理規(guī)章：

4.1.1標本的接收設在三個區(qū)以外的區(qū)域（與生化專用標本接收區(qū)合用），在標

本接收時同時進行以下記錄：在標本與化驗單上同時進行標本的唯一性編

號，在標本接收登記本上記錄患者的姓名、年齡，標本接收日期，標本的特

性、狀態(tài)，接收者簽名。經(jīng)驗收合格后接收的標本直接運送至標本制備區(qū)。

4.1.2實驗過程中須嚴格遵守實驗的工作流程：試劑準備區(qū)一標本制備區(qū)一擴

增及產(chǎn)物分析區(qū)的唯一流向制度。

4.1.3開啟實驗區(qū)前逐一打開設在緩沖區(qū)外墻上的紫外線燈開關（控制實驗區(qū)

的固定紫外燈），照射30分鐘。

4.1.4工作開始前，在緩沖區(qū)換好本實驗區(qū)工作衣，戴上一次性口罩、帽子，

套上一次鞋套，關閉紫外燈。打開緩沖的排風裝置，開啟實驗區(qū)門鎖，工作

時反鎖隔離門。

4.1.5進行測定前的準備和工作記錄（實驗前的準備和工作記錄見表4）：

a）記錄冰箱溫度、紫外線消毒時間；

b）消毒液、清潔液、75%酒精配制；

c）查看加樣器、擴增儀、離心機、滅菌的吸頭等是否在有效期限內；

d）校正水浴鍋溫度；

e）試劑準備：試劑是否在有效期范圍內，根據(jù)標本量確定準備模板的數(shù)量及

陰陽性對照數(shù)量；

4.1.6實驗過程的記錄（見S0P文件）。

4.1.7檢測結果的記錄（見SOP文件）。

4.1.8實驗完成后實驗室清潔消毒處理及記錄：實驗臺面、加樣器、離心機、

超凈工作臺、振蕩器、擴增儀、實驗室空間、實驗室地面等（詳見實驗室清潔

制度）。

4.1.9工作結束，內務整理完畢，關閉排風裝置及實驗區(qū)，加鎖。

4.1.10唯一流向制度同樣運用于實驗室物流管理及內務管理。

****醫(yī)院臨床基因擴增實驗室--

學海無涯

4.2質量控制規(guī)章：

4.2.1制定各種SOP文件并嚴格執(zhí)行。

4.2.2參加室間質評。

4.2.3開展室內質控工作。

4.3人員行為規(guī)章：

4.3.1要有強烈的時間觀念，按時上下班，不遲到、早退。

4.3.2實驗室人員須保持儀表整潔。

4.3.3嚴格遵守實驗操作規(guī)范，不得隨意更改操作步驟。

4.3.4實驗室技術人員必須嚴格按照PCR實驗室操作程序進行，包括實驗室擦

洗、臺面消毒，離心管、吸頭的無菌滅活準備，儀器使用和廢棄物的處理等。

4.3.5進入實驗室工作人員必須遵守實驗室唯一流向制度，無必要盡量減少進入

實驗室的次數(shù)。

4.3.6實驗室內嚴禁飲食、吸煙。

4.3.7非本室工作人員未經(jīng)允許不得進入實驗室。

4.3.8語言有禮貌、舉止講文明，對待來訪病人或電話應和藹禮貌，解釋明確耐

心，不得推脫或生硬回絕。

4.3.9晚上下班要關門、窗，檢查空調和儀器的電源是否關閉。

4.4儀器管理規(guī)章：

4.4.1實驗人員必須熟悉儀器性能方允許操作，嚴格遵守操作規(guī)程。

4.4.2所有儀器（如PCR擴增儀）須有專人負責，有使用維修記錄。

4.4.3儀器使用前必須檢查是否完好，一旦發(fā)現(xiàn)問題，及時向負責人反映，不

得擅自拆裝。

4.4.4注意保持儀器衛(wèi)生整潔，嚴禁在室內抽煙，吃零食，非儀器操作員應盡

量少入。

4.4.5每天了解儀器運轉情況，負責儀器的整潔，安全，檢查電源，水龍頭。

4.4.6定期校正和維護PCR儀、離心機、水浴箱、冰箱等儀器、設備，并建立

儀器質量認證檔案。

4.5試劑管理規(guī)章：

4.5.1實驗室根據(jù)需要，定期提交試劑申購單，并做到及時盤存清點，入庫做

到心中有數(shù)。

4.5.2所購試劑一律按試劑和耗材的SOP進行，并做到來源渠道正規(guī)，質量保

證。

4.5.3實驗室對試劑庫存