高職第十一章維生素類藥物的分析

高職第十一章維生素類藥物的分析前言(Preface)維生素是維持人體正常生理機能所必需的生物活性物質(zhì)；主要用于機體的能量轉(zhuǎn)移和代謝調(diào)節(jié)；大多數(shù)維生素人體不能合成。40%谷類和麥類主食12%水果18%蔬菜10%肉類、蛋類制品10%乳類制品10%油、脂肪及甜品第2頁,共30頁，2024年2月25日，星期天公元前3500年:古埃及人發(fā)現(xiàn)能防治夜盲癥的物質(zhì)，也就是后來的維A;

1600年:醫(yī)生鼓勵以多吃動物肝臟來治夜盲癥;

1747年:蘇格蘭醫(yī)生林德發(fā)現(xiàn)檸檬能治壞血病，也就是后來的維C。

1831年:胡蘿卜素被發(fā)現(xiàn);

1905年:甲狀腺腫大被碘治愈;

1912年:波蘭化學家馮克為維生素命名（Vitamin);

1915年:科學家認為糙皮病是由于缺乏某種維生素而造成的;1916年:維生素B被分離出來;

1917年:英國醫(yī)生發(fā)現(xiàn)魚肝油可治愈佝僂病，隨后斷定這種病是缺乏維D引起的。

維生素發(fā)展史第3頁,共30頁，2024年2月25日，星期天1920年-發(fā)現(xiàn)人體可將胡蘿卜轉(zhuǎn)化為維生素A;

1922年-維E被發(fā)現(xiàn);

1928年-科學家發(fā)現(xiàn)維B至少有兩種類型;

1933年-維E首次用于治療;

1948年-大劑量維C用于治療炎癥;

1949年-維B3與維C用于治療精神分裂癥;

1954年-自由基與人體老化的關系被揭開;

1957年-Q10多酶被發(fā)現(xiàn);

1969年-體內(nèi)超級抗氧化酶被發(fā)現(xiàn);

1970年-維C被用于治療感冒;

1993年-哈佛大學發(fā)表維生素E與心臟病關系的研究結(jié)果。

現(xiàn)被列為維生素的有60余種，對維持人體健康和促進發(fā)育至關重要的有20余種,其中的14種及其制劑可作為藥物使用！維生素發(fā)展史第4頁,共30頁，2024年2月25日，星期天維生素分類化學結(jié)構(gòu)：

醇、酯、酸、胺、醛、酚溶解性：

維生素A

維生素D

維生素E

維生素B

維生素C脂溶性

水溶性

這類藥物的分析方法很多，有生物法、微生物法、化學法和物理化學法，但目前常用的分析方法是化學法或物理化學法。第5頁,共30頁，2024年2月25日，星期天⊙維生素A⊙維生素E⊙維生素C⊙維生素B1主要介紹第6頁,共30頁，2024年2月25日，星期天

維生素A具有多種生理功能，對視力、生長、上皮組織及骨骼的發(fā)育、生育都是必需的。

效用：☆

防止夜盲癥和視力減退，有助于對多種眼疾的治療（維生素A可促進眼內(nèi)感光色素的形成）；☆

有抗呼吸系統(tǒng)感染作用；☆

有助于免疫系統(tǒng)功能正常；生病時能早日康復；能保持組織或器官表層的健康；☆有助于祛除老年斑；☆

促進發(fā)育，強壯骨骼，維護皮膚、頭發(fā)、牙齒、牙床的健康；☆外用有助于對粉刺、膿包、癤瘡，皮膚表面潰瘍等癥的治療；☆

有助于對肺氣腫、甲狀腺機能亢進癥的治療?！训谝还?jié)維生素A(VitA)的分析第7頁,共30頁，2024年2月25日，星期天⊙第一節(jié)

維生素A(VitA)的分析Retinol(VitAalcohol)VAacetateVApolmitate912345678結(jié)構(gòu)特點：

（1）環(huán)己烯+共軛多烯側(cè)鏈；（2）天然VitA側(cè)鏈為全反式；（3）天然來源主要是魚肝油，為醋酸酯，棕櫚酸酯等,目前多由人工合成。第8頁,共30頁，2024年2月25日，星期天維生素A(VitA)的性質(zhì)A.

紫外吸收＊具有共軛多烯側(cè)鏈—紫外吸收；＊最大吸收波長在325-328nm，隨VA存在狀態(tài)以及所用的溶劑，最大吸收波長的位置有所不同。B.溶解性：＊不溶于水＊溶于乙醚，氯仿，異丙醇，環(huán)己烷，脂肪和油。C.不穩(wěn)定性（易發(fā)生脫氫、脫水、聚合反應）D.與SbCl3作用—Carr-Price反應

CHCl3

★鑒別

★含量測定第9頁,共30頁，2024年2月25日，星期天維生素A(VitA)的鑒別試驗

鑒別？(1)SbCl3反應Carr-price反應加飽和無水SbCl3無醇CHCl3溶液TLC法(2)(3)紫外-可見分光光度法藍色紫紅色→VA與三氯化銻(SbCl3)中存在的親電試劑氯化高銻（SbCl5）作用形成不穩(wěn)定的藍色正碳離子。第10頁,共30頁，2024年2月25日，星期天維生素A的無水乙醇-鹽酸溶液在326nm波長處有單一吸收峰，將該溶液加熱后再測定，在348，367，389nm處出現(xiàn)3個尖銳吸收峰。這是維生素A在鹽酸催化下加熱，發(fā)生脫水反應所致。紫外-可見分光光度法第11頁,共30頁，2024年2月25日，星期天確認醇或酯，是醋酸酯或其他酸酯.▲例：VA和其標準品用環(huán)己烷溶解展開劑：環(huán)己烷—乙醚（80：20）板：硅膠G顯色：SbCl3T.S.（藍色斑點）Rf：VA醇0.08VA醋酸酯0.41VA棕櫚酸酯0.75薄層色譜法第12頁,共30頁，2024年2月25日，星期天含量＝？HPLC法熒光法VitA的無水乙醇溶液能產(chǎn)生綠色熒光?？蓽y定血液或動物組織中VitA含量SbCl3比色法加SbCl3無水CHCl3溶液，在618~620nm波長處有最大吸收，符合Beer定律。(3)(2)(1)(4)UV法(三點校正法)

維生素A(VitA)的含量測定專屬性差、顯色不穩(wěn)定、受水分和溫度影響大第13頁,共30頁，2024年2月25日，星期天UV法(三點校正法)

1.概述＊共軛多烯的結(jié)構(gòu)—具有特征的紫外吸收。＊維生素A中稀釋用油和有關雜質(zhì)—結(jié)構(gòu)相似,在維生素A最大吸收波長附近也有吸收，對測定產(chǎn)生干擾。＊Morton和Stubbs等人提出了三點校正法。2.原理（根據(jù)、假定）

＊雜質(zhì)吸收在310-340nm內(nèi)呈直線，且隨波長的增大吸收度變??；

＊物質(zhì)對光的吸收有加和性。第14頁,共30頁，2024年2月25日，星期天UV法(三點校正法)

第15頁,共30頁，2024年2月25日，星期天VitA含量表示生物效價：國際單位IU(internationalUnit)效價(I.U./g):每克供試品中所含VitA的國際單位數(shù)按WHO規(guī)定

VitA醋酸酯

VitA醇效價(I.U./g)0.344×106

0.300×106

1gpure

VA

VitA醋酸酯≈0.344×106IU

VitA含量測定第一法（直接測定法）：適用于酯式維生素A的測定第二法（皂化法）：消除植物油干擾，適合VA醇。第16頁,共30頁，2024年2月25日，星期天VitaminE⊙第二節(jié)

維生素E(VitE)的分析

存在于豆類、蔬菜、麥胚油中與生育有關，防治習慣性流產(chǎn)、不育癥、牙周炎等；也用于心血管疾患、脂肪肝，新生兒硬腫癥的輔助治療。

有還原性，可作抗氧劑第17頁,共30頁，2024年2月25日，星期天⊙第二節(jié)

維生素E(VitE)的分析R1R2﹡﹡VitE(dl-α-TocopherylAcetate)消旋-α-生育酚醋酸酯結(jié)構(gòu)特征：1、具有苯并二氫吡喃結(jié)構(gòu)，苯環(huán)上有1個乙?；姆恿u基，易被水解、氧化；2、脂溶性維生素。3、有四種異構(gòu)體，其中α型活性最強乙?；恿u基第18頁,共30頁，2024年2月25日，星期天VitE鑒別Identification(1)(4)(2)(3)硝酸反應(無水乙醇＋硝酸，750C顯橙紅色)UV法(

284)GC法三氯化鐵反應

加KOH醇試液，加熱，加水、乙醚，取乙醚液再加2,2'-聯(lián)吡啶的乙醇溶液和FeCl3的乙醇液，應顯血紅色?！魃?Fe2+2,2'-聯(lián)吡啶血紅色Fe3+第19頁,共30頁，2024年2月25日，星期天（二）生育酚的檢查

硫酸鈰溶液（0.01mol/L）生育酚

+

2Ce4+

→2Ce3+

+

對－生育醌原理指示劑：二苯胺（亮黃→灰紫）（反應摩爾比1:2）（一）酸度游離醋酸

VitE的雜質(zhì)檢查ChP滴定液：第20頁,共30頁，2024年2月25日，星期天第21頁,共30頁，2024年2月25日，星期天氣相色譜法ChP（2005）

內(nèi)標法加校正因子

內(nèi)標物正三十二烷

固定相硅酮（OV—17）

檢測器氫火焰離子化檢測器FID系統(tǒng)適用性試驗要求理論塔板數(shù)按維生素E峰計算應不低于500，維生素E峰與內(nèi)標物質(zhì)峰的分離度應大于2n≥500R≥2特點準確、靈敏度高、專屬性好第22頁,共30頁，2024年2月25日，星期天Thiamine

Hydrochloride鹽酸硫胺⊙第三節(jié)

維生素B1(VitB1)的分析VitaminB1治療腳氣病、多發(fā)性神經(jīng)炎和胃腸道疾病存在于米糠、麥麩和酵母中第23頁,共30頁，2024年2月25日，星期天易溶于水不溶于乙醚UV吸收(

mmax246nm)沉淀反應碘化汞鉀或硅鎢酸等反應生成堿性中遇氧化劑(鐵氰化鉀)產(chǎn)生有熒光的硫色素鑒別試驗TLC

維生素B1結(jié)構(gòu)特點與鑒別硫色素反應VB1特有硝酸鉛反應生成黑色硫化鉛沉淀氯化物反應氨基嘧啶環(huán)噻唑環(huán)因本品為鹽酸鹽噻唑環(huán)在堿性介質(zhì)中可被高鐵氰化鉀等氧化劑氧化，然后與嘧啶環(huán)上的-NH2縮合生成具有熒光的硫色素，后者易溶于異丁醇中顯強烈的藍色熒光，該反應又稱為硫色素熒光反應。為維生素B1所特有分子結(jié)構(gòu)中含有雜環(huán)，易與生物堿沉淀劑(碘化鉍鉀、碘化汞鉀、苦味酸等)，硅鎢酸，雷氏鹽等作用形成組成恒定的沉淀維生素B1在堿性加熱條件下反應放出H2S,與Pb(Ac)2試液形成黑色PbS↓第24頁,共30頁，2024年2月25日，星期天VitB1含量＝?Assay非水堿量法冰HAc和Hg(Ac)2HClO4滴定毛細管電泳法硫色素熒光法(VB1專屬反應)

紫外可見分光光度法(

max246nm)酸性染料比色法

鹽酸硫胺與酸性染料(溴麝香草酚藍)形成鹽，在420nm處測A值。高效液相法123654片劑、注射液原料簡便、快速、準確含量測定Assay第25頁,共30頁，2024年2月25日，星期天⊙第三節(jié)

維生素C(VitC)的分析VitaminC防治壞血病，預防冠心病，大量靜脈注射用于克山病的治療參與機體代謝，可幫助酶將膽固醇轉(zhuǎn)化為膽酸而排泄，減低毛細管的脆性，增加機體抵抗力(L-抗壞血酸Ascorbicacid)第26頁,共30頁，2024年2月25日，星期天L-抗壞血酸