藥品生產(chǎn)相關(guān)的微生物基礎(chǔ)知識(shí)

藥品生產(chǎn)相關(guān)的微生物基礎(chǔ)知識(shí)一、自然界中微生物生存的環(huán)境人類生活的環(huán)境充斥著大量微生物海拔100英里（約160公里）以上海平面以下600英尺（約182米）的地方都可以發(fā)現(xiàn)微生物的蹤跡1英里=5,280英尺或1.609公里第2頁(yè),共87頁(yè)，2024年2月25日，星期天微生物分布特點(diǎn)微生物無(wú)處不在氣源性微生物革蘭氏陽(yáng)性菌較多它們可形成芽孢，難以殺滅因此，藥品生產(chǎn)需要HVAC水源性則革蘭氏陰性菌居多不會(huì)生成孢子但會(huì)形成細(xì)菌內(nèi)毒素耐熱性差G+G-第3頁(yè),共87頁(yè)，2024年2月25日，星期天首先分享幾幅圖片給大家一個(gè)感性認(rèn)識(shí)葡萄球菌第4頁(yè),共87頁(yè)，2024年2月25日，星期天乳酸桿菌第5頁(yè),共87頁(yè)，2024年2月25日，星期天

芽孢桿菌第6頁(yè),共87頁(yè)，2024年2月25日，星期天

青霉是種真菌，屬于子囊菌。有的能產(chǎn)生青霉素，救了無(wú)數(shù)人的命。產(chǎn)生無(wú)性孢子。第7頁(yè),共87頁(yè)，2024年2月25日，星期天酵母菌第8頁(yè),共87頁(yè)，2024年2月25日，星期天根霉（Rhizopus)是種真菌，屬于接合菌。能產(chǎn)生無(wú)性孢子菌絲體的直徑約12um黑的是孢子囊第9頁(yè),共87頁(yè)，2024年2月25日，星期天愛(ài)滋病病毒第10頁(yè),共87頁(yè)，2024年2月25日，星期天

禽流感病毒SARS病毒是一類新發(fā)現(xiàn)的冠狀病毒第11頁(yè),共87頁(yè)，2024年2月25日，星期天甲型H1NI第12頁(yè),共87頁(yè)，2024年2月25日，星期天二、常見(jiàn)微生物種類基本特點(diǎn)細(xì)菌0.5～5μm，生長(zhǎng)態(tài)時(shí)不耐熱，部分能形成耐熱芽孢真菌5μm～50μm，形成芽孢隨空氣擴(kuò)散，不耐熱病毒小于0.1μm，一般不耐熱，0.22μm過(guò)濾不了第13頁(yè),共87頁(yè)，2024年2月25日，星期天三、真菌和細(xì)菌大小真菌5μm~50μm細(xì)菌0.5~5μm主要成員酵母、霉菌細(xì)菌細(xì)胞組成酵母是單細(xì)胞，其它為多細(xì)胞均為單細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)成份遺傳物質(zhì)(DNA)被雙層核膜包裹(真核)，并且還有如線粒體、葉綠體及高卡基體等被膜包裹的細(xì)胞器。遺傳物質(zhì)(DNA)祼露并游離于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)(原核)，并且不含有其它有膜細(xì)胞器。繁殖方式有性（如大型真菌或無(wú)性如酵母），霉菌則二者兼有無(wú)性（裂殖）孢子霉菌產(chǎn)生分生孢子（生長(zhǎng)繁殖，類似于植物的種子)，雖不耐熱，但會(huì)飄浮于空氣中而難以消除。酵母不會(huì)產(chǎn)生孢子。主要只有兩個(gè)屬產(chǎn)生孢子（內(nèi)生孢子），又名芽孢：Bacillus-芽孢桿菌屬和Clostridium-梭菌屬，細(xì)菌芽孢屬于休眠體，一個(gè)細(xì)菌細(xì)胞產(chǎn)生一個(gè)芽孢生長(zhǎng)條件20-25oC,3-5天30-35oC,1-2天殺滅程度不耐熱，但難用消毒劑消毒（因孢子處于漂浮狀態(tài)）生長(zhǎng)態(tài)菌不耐熱（極個(gè)別除外），但形成芽孢后耐熱。第14頁(yè),共87頁(yè)，2024年2月25日，星期天四、細(xì)菌的結(jié)構(gòu)及生長(zhǎng)條件細(xì)菌一般結(jié)構(gòu)包括細(xì)胞壁、細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核，特殊結(jié)構(gòu)包括莢膜、鞭毛、菌毛、芽孢。然而，細(xì)菌的芽孢，并不是繁殖的手段，而是休眠體。第15頁(yè),共87頁(yè)，2024年2月25日，星期天革蘭氏陽(yáng)性菌：氣源性，身體上部，呼吸道革蘭氏陰性菌：則是水源性的，細(xì)胞結(jié)構(gòu)不同生物指示劑(BI)均為革蘭氏陽(yáng)性菌，滅菌用BI為非致病菌。第16頁(yè),共87頁(yè)，2024年2月25日，星期天五、細(xì)菌芽胞（孢）的形成及其特性成熟芽孢孢子壁母細(xì)胞孢子壁的形成生長(zhǎng)態(tài)細(xì)胞摘自/microbes/spores.asp內(nèi)生孢子產(chǎn)生于Gram+

細(xì)菌:

芽孢桿菌屬Bacillus梭菌屬Clostridium僅含核酸及少量萌發(fā)必需物皮層含DPA和Ca2+復(fù)合物能抵御各種惡劣環(huán)境可休眠上百萬(wàn)年真菌孢子因不具上述特性而不耐熱第17頁(yè),共87頁(yè)，2024年2月25日，星期天六、什么是芽孢？當(dāng)某些細(xì)菌遇到不良生存環(huán)境條件時(shí)，為保護(hù)自身，在細(xì)胞內(nèi)形成一外壁厚而堅(jiān)硬的體眠體，該體眠體即稱芽孢（Spore）或孢子。由于其對(duì)不良環(huán)境的耐受性遠(yuǎn)高于生長(zhǎng)態(tài)細(xì)胞，常被用于挑戰(zhàn)滅菌工藝，以確認(rèn)被滅菌物品無(wú)菌的可靠性。第18頁(yè),共87頁(yè)，2024年2月25日，星期天芽孢的特性主要產(chǎn)生于Gram+

細(xì)菌的兩個(gè)屬芽孢桿菌屬Bacillus梭菌屬Clostridium能抵御各種惡劣環(huán)境，可存活上百萬(wàn)年，因?yàn)樗泻竦钠咏Y(jié)構(gòu)僅含核酸及少量萌發(fā)必需物含水量極低休眠體，內(nèi)生孢子，不可再生（每個(gè)細(xì)胞只產(chǎn)生一個(gè)芽孢）；真菌孢子屬于分生孢子，不具上述特性。第19頁(yè),共87頁(yè)，2024年2月25日，星期天芽孢的特點(diǎn)耐熱80℃下長(zhǎng)期存活100℃下有相當(dāng)高的存活率100℃以上死亡過(guò)程符合一級(jí)動(dòng)力學(xué)方程影響芽孢耐熱性的因素芽孢存在的介質(zhì)受熱時(shí)的濕度第20頁(yè),共87頁(yè)，2024年2月25日，星期天芽孢的利用生物指示劑（BI）對(duì)特定滅菌工藝具有一定耐受性并能用于定量測(cè)定滅菌效力的微生物制劑（USP32）特點(diǎn)芽孢用于制備生物指示劑的微生物應(yīng)具有相當(dāng)?shù)哪褪苄?、穩(wěn)定性、易培養(yǎng)、及非致病性應(yīng)用于被驗(yàn)證產(chǎn)品、滅菌工藝、生產(chǎn)工藝符合有關(guān)法規(guī)的要求 第21頁(yè),共87頁(yè)，2024年2月25日，星期天

第二部分

藥品無(wú)菌生產(chǎn)的微生物知識(shí)第22頁(yè),共87頁(yè)，2024年2月25日，星期天一、無(wú)菌操作崗位人員的主要培訓(xùn)內(nèi)容1、有關(guān)法規(guī)、規(guī)定、制度藥品法、GMP、規(guī)章制度，無(wú)菌操作有關(guān)制度、規(guī)定、工藝規(guī)程及崗位操作法等;2、無(wú)菌基本概念無(wú)菌產(chǎn)品定義、污染物及污染源（微粒、微生物、熱源等）

3、無(wú)菌控制方法要點(diǎn)環(huán)境控制及監(jiān)測(cè)方法，空氣凈化技術(shù)，水的凈化，物料進(jìn)入無(wú)菌區(qū)的要求和程序，人員進(jìn)入無(wú)菌區(qū)的要求和程序，消毒劑和消毒方法等第23頁(yè),共87頁(yè)，2024年2月25日，星期天4、崗位標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP）訓(xùn)練各種崗位標(biāo)準(zhǔn)操作程序的訓(xùn)練，如洗瓶機(jī)的操作，洗膠塞機(jī)的操作，設(shè)備清洗方法，場(chǎng)地清洗方法，無(wú)菌灌裝崗位的操作（包括洗手方法，無(wú)菌工作服穿著要求，無(wú)菌操作程序及技巧，天平使用規(guī)則，稱量復(fù)核程序，灌裝的計(jì)算，調(diào)整及復(fù)核等）

5、組長(zhǎng)崗位職責(zé)人員管理，無(wú)菌操作的準(zhǔn)備程序，組織清場(chǎng)、換批、復(fù)核計(jì)量，生產(chǎn)記錄檢查等第24頁(yè),共87頁(yè)，2024年2月25日，星期天6、機(jī)修人員無(wú)菌概念的培訓(xùn)生產(chǎn)工藝和設(shè)備的無(wú)菌要求，生產(chǎn)流水線的準(zhǔn)備及故障排除、試車、保養(yǎng)及維修等

7、無(wú)菌操作崗位的文件管理物料清單，無(wú)菌記錄，清潔記錄，設(shè)備運(yùn)行維修記錄，生產(chǎn)指令單，各崗位（洗瓶、洗塞、稱量、灌裝等）操作記錄，批生產(chǎn)記錄等第25頁(yè),共87頁(yè)，2024年2月25日，星期天二、潔凈與污染1、干凈與潔凈：

干凈：肉眼所見(jiàn)，是宏觀。

潔凈：微粒、菌落，是微觀。2、一般區(qū)：是指潔凈區(qū)之外，未規(guī)定有空氣潔凈度級(jí)別要求，但有衛(wèi)生要求的區(qū)域。第26頁(yè),共87頁(yè)，2024年2月25日，星期天3、潔凈室（區(qū)）：需要對(duì)塵粒及微生物數(shù)量進(jìn)行控制的房間（區(qū)域）。其建筑結(jié)構(gòu)、裝備及其使用均具有減少該區(qū)域內(nèi)污染源的介入、產(chǎn)生和滯留的功能。（全封閉的結(jié)構(gòu)，人員、物料出入門(mén)必須分別設(shè)置并有各自的凈化用室和設(shè)施，人員、物料進(jìn)入潔凈室必須經(jīng)過(guò)凈化。生產(chǎn)布局要順應(yīng)工藝流程，盡量減少迂回、往返；進(jìn)入潔凈間的工藝用水必須符合規(guī)定，無(wú)菌間不得引入飲用水；進(jìn)入潔凈間的空氣必須經(jīng)過(guò)凈化并符合規(guī)定。）第27頁(yè),共87頁(yè)，2024年2月25日，星期天4、污染：當(dāng)一個(gè)產(chǎn)品存在有不需要的物質(zhì)時(shí)，它即受到污染。第28頁(yè),共87頁(yè)，2024年2月25日，星期天（1）塵粒污染包括肉眼可見(jiàn)與不可見(jiàn)的白點(diǎn)、纖維、微粒等來(lái)源：塵埃、衣物潔具、金屬粒子、制劑制備中的粉塵、人體第29頁(yè),共87頁(yè)，2024年2月25日，星期天①塵埃5.7%來(lái)自地面行駛的車輛，34%來(lái)自采掘、煉鋼、水泥制造和磨面等工業(yè)性粉塵，57%來(lái)自燃料的燃燒如鍋爐、機(jī)動(dòng)車、火力發(fā)電廠，其他如土地干燥產(chǎn)塵、表面腐蝕等。第30頁(yè),共87頁(yè)，2024年2月25日，星期天大氣中的含塵濃度場(chǎng)所≥0.5?粉塵計(jì)數(shù)濃度（個(gè)/?）

市中心15—35╳107市郊8—20╳107田野4—8╳107香煙煙霧50╳107/ML（大多<0.3?）第31頁(yè),共87頁(yè)，2024年2月25日，星期天②衣物、潔具各種布料發(fā)塵量布料種類>0.5

?發(fā)塵量（萬(wàn)/分鐘）普通的確良91．73粗孔尼龍綢0．546尼龍綢0．546純滌綸11．64綿綸絲紡織417．3棉雙面卡603．3潔具使用過(guò)程中脫落大量的纖維、顆粒。第32頁(yè),共87頁(yè)，2024年2月25日，星期天③金屬粒子潔凈間有機(jī)械動(dòng)作的設(shè)備運(yùn)行中會(huì)產(chǎn)生大量金屬粒子，特別是大容量注射劑的壓蓋機(jī)。第33頁(yè),共87頁(yè)，2024年2月25日，星期天④制劑制備中的粉塵制劑制備中的粉碎、過(guò)篩、混合、制粒、整粒、壓片、顆粒分裝、膠囊填充、某些輕質(zhì)原料的稱量等工序均可以產(chǎn)生大量粉塵。第34頁(yè),共87頁(yè)，2024年2月25日，星期天⑤人體

人體皮屑情況部位數(shù)量（個(gè)）

皮膚表面1．75平方米

皮膚更替5天一次脫落塵粒7．1億/天

第35頁(yè),共87頁(yè)，2024年2月25日，星期天潔凈室人員動(dòng)作與微粒發(fā)生率動(dòng)作或狀態(tài)發(fā)生率（萬(wàn)/分鐘）

（0.3-1.0?）

不動(dòng)10

手臂和頭輕微活動(dòng)50

手臂、手、頭部都動(dòng)作100

坐下、起立250

行走（60米/分鐘）500

行走（90米/分鐘）750

行走（130米/分鐘）1000

跳躍1500—3000第36頁(yè),共87頁(yè)，2024年2月25日，星期天⑥花粉一朵花開(kāi)放時(shí)可以產(chǎn)生幾十萬(wàn)到上千萬(wàn)個(gè)花粉，是嚴(yán)重的過(guò)敏源?；ǚN1朵花開(kāi)放時(shí)的花粉數(shù)粒徑/?黑松148萬(wàn)40-60等披花59萬(wàn)80-100冬槍41萬(wàn)歐洲楓28萬(wàn)第37頁(yè),共87頁(yè)，2024年2月25日，星期天（2）微生物污染包括細(xì)菌、真菌、病毒。微生物廣泛存在于空氣、水、土壤和人的身上。第38頁(yè),共87頁(yè)，2024年2月25日，星期天某城市空氣的含菌濃度場(chǎng)所浮游菌濃度（個(gè)/?）火車站4.97╳104

商業(yè)區(qū)4.4╳104

公園6.98╳103

植物園1.05╳103第39頁(yè),共87頁(yè)，2024年2月25日，星期天人體帶菌情況

部位數(shù)量（個(gè)）

手100-1000/平方厘米

前額1000-10萬(wàn)/平方厘米

頭皮100萬(wàn)/平方厘米

腋窩1萬(wàn)-1000萬(wàn)/平方厘米

鼻分泌物1000萬(wàn)/克

唾液10億/克

第40頁(yè),共87頁(yè)，2024年2月25日，星期天三、污染的四大媒介1、空氣：空氣本身并不產(chǎn)生污染，但空氣是污染最主要、最危險(xiǎn)的攜帶者。2、水：純水本身并不產(chǎn)生污染，但無(wú)論怎樣仔細(xì)的蒸餾或過(guò)濾，總會(huì)含有一定量的可溶性的有機(jī)物和鹽類，這些可溶性物質(zhì)就是微生物生長(zhǎng)的養(yǎng)料。工藝用水：飲用水、純化水、注射用水第41頁(yè),共87頁(yè)，2024年2月25日，星期天3、表面：與制劑室有關(guān)的表面是指設(shè)備、設(shè)施、容器、地板、墻壁等有關(guān)物體的表面。由于空氣中的濕度，所有表面都包上一層含水的薄膜。這層薄膜由于靜電吸引而飽含塵埃微粒與微生物，許多時(shí)候，表面還覆蓋一層油狀物，更易受到塵粒和微生物的污染。第42頁(yè),共87頁(yè)，2024年2月25日，星期天4、人體：人是最大的污染源與污染的傳播媒介。（1）人自己本身會(huì)產(chǎn)生數(shù)以千萬(wàn)計(jì)的微粒，并隨著人體熱量所形成的熱流而擴(kuò)散。（2）人體本身攜帶了無(wú)數(shù)的微生物（見(jiàn)上表），呼吸、咳嗽會(huì)產(chǎn)生大量的微水滴，這些微水滴既含有大量的塵粒，也含有大量的微生物。（3）化裝品如口紅、眉筆、底粉不但產(chǎn)生大量塵粒，還是微生物的良好營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。耳環(huán)、戒指、項(xiàng)鏈、手表，隱藏了大量的塵粒與微生物。第43頁(yè),共87頁(yè)，2024年2月25日，星期天四、人員進(jìn)出潔凈區(qū)的要求（1）人員：應(yīng)預(yù)防藥品不受人的污染。（2）衣服：無(wú)菌工作服要維護(hù)良好，且穿戴要正確；工作服無(wú)破縫、無(wú)污漬；穿戴工作服要系緊衣扣，無(wú)頭發(fā)或自身衣服露出。10萬(wàn)（D）級(jí)潔凈區(qū)的著裝要求：罩住頭發(fā)和胡須，穿戴該區(qū)域?qū)Ｓ霉ぷ鞣Ｓ眯蛐住?萬(wàn)（C）級(jí)潔凈區(qū)的著裝要求：罩住頭發(fā)、胡須和小胡子，上衣/褲子或連體服、緊腰、高領(lǐng)、專用鞋或鞋套，所用材料不產(chǎn)生污染。第44頁(yè),共87頁(yè)，2024年2月25日，星期天四、人員進(jìn)出潔凈區(qū)的要求（續(xù)）100（A）級(jí)潔凈區(qū)著裝的要求：戴兜帽、口罩、穿無(wú)菌衣、戴無(wú)塵滅菌手套、穿無(wú)菌鞋或鞋套，所用材料不產(chǎn)生污染，無(wú)私人衣物，每次進(jìn)入潔凈區(qū)均需穿新滅菌的工作服。第45頁(yè),共87頁(yè)，2024年2月25日，星期天四、人員進(jìn)出潔凈區(qū)的要求（續(xù)）（3）正確的更衣要求：在凈化室工作，必須遵守潔凈室內(nèi)每一個(gè)細(xì)節(jié)的工作規(guī)范；不允許將任何有害的物質(zhì)帶入潔凈室；避免污染帶給產(chǎn)品可能的嚴(yán)重?fù)p害；人員的清潔和衛(wèi)生是很重要的；進(jìn)入潔凈室必須卸妝；第46頁(yè),共87頁(yè)，2024年2月25日，星期天四、人員進(jìn)出潔凈區(qū)的要求（續(xù)）（4）穿潔凈工作服的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進(jìn)入更衣室的更衣程序：換干凈鞋—卸裝—取下手表/首飾—換內(nèi)衣（需要時(shí)）—洗手—戴帽子—戴口罩

—穿潔凈服—換鞋和/或鞋套—鏡前檢查著裝—收拾整理—洗手—戴工作手套—進(jìn)入潔凈室。第47頁(yè),共87頁(yè)，2024年2月25日，星期天五、工具進(jìn)入潔凈區(qū)的要求1、對(duì)進(jìn)入潔凈區(qū)的工具進(jìn)行監(jiān)控。2、器具本身及部件都必須進(jìn)行清潔消毒。3、臟的，油膩的工具必須清潔并消毒。4、潔凈區(qū)配備維修工具箱。第48頁(yè),共87頁(yè)，2024年2月25日，星期天六、在無(wú)菌區(qū)工作的要求1、只有潔凈區(qū)工作人員和授權(quán)人員方可進(jìn)入潔凈室；

2、在潔凈室內(nèi)不要快速走動(dòng)，避免不必要的移動(dòng)；

3、不要從層流區(qū)附近穿過(guò)，不可避免時(shí)至少要離開(kāi)1米；

4、所有地面上的物品，均視為已被污染。第49頁(yè),共87頁(yè)，2024年2月25日，星期天六、在無(wú)菌區(qū)工作的要求（續(xù)）6、休息時(shí)，站著，手臂沿身體下垂，不要兩臂交叉，也不要放在臀部；

7、休息時(shí)，座著，把手放在膝蓋上，不要交叉雙手或雙腿；

8、工作中必要時(shí)才講話；

9、工作時(shí)，可使用電話，不可通過(guò)氣鎖講話。

第50頁(yè),共87頁(yè)，2024年2月25日，星期天七、無(wú)菌檢查的局限性歷史的教訓(xùn)：1962年，美國(guó)FDA頒布第一部GMP1970-1975年，美國(guó)輸液污染至敗血癥400多起

--有問(wèn)題的產(chǎn)品全部通過(guò)了無(wú)菌檢查無(wú)菌檢查的風(fēng)險(xiǎn)取樣量為20瓶時(shí)污染率與通過(guò)無(wú)菌檢查概率的關(guān)系批產(chǎn)品污染率％5101520通過(guò)無(wú)菌檢查的概率％361241第51頁(yè),共87頁(yè)，2024年2月25日，星期天藥典對(duì)無(wú)菌保證的定量標(biāo)準(zhǔn)1973年的英國(guó)藥典和1980年USP增補(bǔ)版提到了無(wú)菌的量化標(biāo)準(zhǔn)Fo不小于8分鐘經(jīng)滅菌后，產(chǎn)品中污染菌存活的概率不大于百萬(wàn)分之一。中國(guó)藥典在2000版起，收載了此標(biāo)準(zhǔn)。無(wú)菌保證值：污染菌存活概率的負(fù)對(duì)數(shù)，經(jīng)滅菌后，產(chǎn)品的無(wú)菌保證值不小于6第52頁(yè),共87頁(yè)，2024年2月25日，星期天“無(wú)菌”的標(biāo)準(zhǔn)及概念“每批產(chǎn)品中，污染品概率不得超過(guò)一百萬(wàn)分之一”，無(wú)菌的這一量化標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)當(dāng)可以用試驗(yàn)來(lái)證明的。用無(wú)菌檢查法顯然是不可能的。然而，每瓶產(chǎn)品微生物存活的概率卻可計(jì)算的。這就需要測(cè)試產(chǎn)品滅菌前微生物污染數(shù)、D值，使用對(duì)數(shù)規(guī)則，并用生物指示劑試驗(yàn)來(lái)證實(shí)。量化指標(biāo)+計(jì)算+試驗(yàn)，使無(wú)菌標(biāo)準(zhǔn)成為工業(yè)界可執(zhí)行的標(biāo)準(zhǔn)

第53頁(yè),共87頁(yè)，2024年2月25日，星期天

第三部分

熱力滅菌基本原理第54頁(yè),共87頁(yè)，2024年2月25日，星期天

熱對(duì)微生物的作用當(dāng)高溫破壞了細(xì)胞中起生命作用的蛋白質(zhì)、酶及核酸時(shí)，細(xì)胞死亡。生命基本物質(zhì)的破壞本質(zhì)上是化學(xué)變化實(shí)驗(yàn)證明微生物受熱死亡速度符合一級(jí)動(dòng)力學(xué)方程第55頁(yè),共87頁(yè)，2024年2月25日，星期天微生物存活數(shù)與滅菌時(shí)間關(guān)系圖

半對(duì)數(shù)座標(biāo)Y軸：微生物取對(duì)數(shù)X軸：時(shí)間為10進(jìn)制普通座標(biāo)tlgN102030123Y軸及X軸均為普通座標(biāo)（示意）tN102030101001000第56頁(yè),共87頁(yè)，2024年2月25日，星期天芽孢的耐熱參數(shù)：D值指一定溫度下將微生物殺滅90％或下降一個(gè)對(duì)數(shù)單位所需要的時(shí)間。lgNt1234t1t2D第57頁(yè),共87頁(yè)，2024年2月25日，星期天滅菌溫度對(duì)D值的影響

滅菌溫度低時(shí)，達(dá)到同一滅菌效果的時(shí)間就長(zhǎng)115℃121℃125℃lgNt△lgN=1D125D121D115第58頁(yè),共87頁(yè)，2024年2月25日，星期天F0值：達(dá)到同一滅菌效果的概念

F0值即標(biāo)準(zhǔn)滅菌時(shí)間指產(chǎn)品在滅菌過(guò)程中獲得的與標(biāo)準(zhǔn)參照條件（121℃）相同滅菌效果的曝?zé)釙r(shí)間lgNtLgNoLgNt121℃117℃△LgNFTFo第59頁(yè),共87頁(yè)，2024年2月25日，星期天不同滅菌溫度下的滅菌率滅菌溫度℃滅菌率L1000.0081050.0251120.1261150.2511160.3161180.5011200.7941211.0001221.251231.59滅菌率：為達(dá)到與某一溫度下滅菌1分鐘相同的滅菌效果，在121℃下滅菌所需要的滅菌時(shí)間

100℃滅菌時(shí)1分鐘，相當(dāng)于121℃滅菌0.008分鐘，即Fo值為0.008分鐘。105℃滅菌40分鐘時(shí)，F(xiàn)o約為1分鐘，能使D值為1分鐘的芽孢數(shù)量下降1個(gè)對(duì)數(shù)單位第60頁(yè),共87頁(yè)，2024年2月25日，星期天

第四部分

消毒、滅菌與常見(jiàn)的滅菌方法第61頁(yè),共87頁(yè)，2024年2月25日，星期天消毒

消毒：是指對(duì)病原微生物的繁殖體的致死作用，但不能殺死芽孢等全部微生物。所以消毒是不徹底的，不能代替滅菌。消毒劑：凡用于消毒的化學(xué)藥品統(tǒng)稱為消毒劑，有液體的、固體的和氣體的。常用的消毒劑第62頁(yè),共87頁(yè)，2024年2月25日，星期天名稱作用機(jī)制常用濃度性質(zhì)與用途乙醇蛋白質(zhì)變性、溶解細(xì)胞70%～75%能迅速殺死細(xì)菌繁殖體，對(duì)一般病毒有一定的消毒作用，對(duì)芽孢無(wú)殺滅作用。洗必泰破壞細(xì)胞膜，使胞漿外滲0.1%～0.5%表面活性劑，對(duì)革蘭陽(yáng)性細(xì)菌、陰性細(xì)菌均有殺菌作用，但對(duì)前者作用較強(qiáng)。甲醛阻抑菌細(xì)胞核蛋白質(zhì)合成37%～40%能破壞細(xì)菌繁殖體及許多芽孢、真菌和病毒。來(lái)蘇爾損傷細(xì)胞膜2%能殺滅大多數(shù)致病菌的繁殖體，對(duì)芽孢作用較弱。新潔爾滅破壞細(xì)胞膜，使蛋白質(zhì)變性0.05%～0.1%季胺鹽類化合物，陽(yáng)離子表面活性劑，抗菌譜較窄，對(duì)革蘭陽(yáng)性菌有較強(qiáng)作用，對(duì)革蘭陰性桿菌，特別是銅綠假單胞菌不敏感，在中性和弱堿性溶液中效果最佳。過(guò)氧化氫蛋白質(zhì)、酶類變性2%～3%強(qiáng)氧化劑，利用新生氧殺滅細(xì)菌繁殖體、芽孢、病毒，真菌有相對(duì)的抗性。第63頁(yè),共87頁(yè)，2024年2月25日，星期天影響消毒劑活性的因素：溫度濃度酸堿度微生物的種類有機(jī)物質(zhì)其他物理化學(xué)因素第64頁(yè),共87頁(yè)，2024年2月25日，星期天滅菌凡能殺滅物體中所有活的微生物的作用稱為滅菌。滅菌的手段及設(shè)備，分別稱為滅菌法及滅菌器滅菌法是指用適當(dāng)?shù)奈锢砘蚧瘜W(xué)手段將物品中的微生物殺滅或除去的方法。常用的物理方法有：熱力、氣體滅菌、輻射滅菌、物理阻留過(guò)濾除菌，還有脈動(dòng)強(qiáng)光和等離子體等滅菌。第65頁(yè),共87頁(yè)，2024年2月25日，星期天滅菌方法重點(diǎn)介紹：濕熱滅菌干熱滅菌第66頁(yè),共87頁(yè)，2024年2月25日，星期天濕熱滅菌-1濕熱滅菌通常指一定壓力下的蒸汽滅菌，也包括過(guò)熱水滅菌（水浴式或噴淋式）實(shí)際上只要微生物處于達(dá)到水－水蒸氣平衡狀態(tài)下的滅菌過(guò)程，都是濕熱滅菌例：實(shí)驗(yàn)室給微生物取樣瓶滅菌時(shí)通常加入1ml水并密封。水分的存在有利于滅菌第67頁(yè),共87頁(yè)，2024年2月25日，星期天濕熱滅菌特點(diǎn)蒸汽有利于蛋白質(zhì)的變性和酶的失活，從而殺滅細(xì)胞蒸汽熱穿透性強(qiáng)滅菌效率高溫度相對(duì)較低滅菌時(shí)間相對(duì)短滅菌過(guò)程不產(chǎn)生任何化學(xué)物理污染滅菌設(shè)備控制參數(shù)少，運(yùn)行穩(wěn)定，方便管理第68頁(yè),共87頁(yè)，2024年2月25日，星期天濕熱滅菌工藝之一美國(guó)FDA規(guī)定的殘存概率法滅菌過(guò)程8≤F0<12分鐘適用于熱穩(wěn)定性不很好的產(chǎn)品通過(guò)控制工藝過(guò)程的微生物污染和滅菌工藝參數(shù)使產(chǎn)品無(wú)菌無(wú)菌保證值不小于6第69頁(yè),共87頁(yè)，2024年2月25日，星期天濕熱滅菌工藝之二過(guò)度殺滅法F0不低于12熱穩(wěn)定性好的產(chǎn)品以徹底殺滅任何污染的微生物為實(shí)現(xiàn)無(wú)菌的手段無(wú)菌保證值不小于6第70頁(yè),共87頁(yè)，2024年2月25日，星期天其它濕熱滅菌工藝？F0值低于8的滅菌工藝熱穩(wěn)定性很差的產(chǎn)品以無(wú)菌生產(chǎn)工藝為基礎(chǔ)，滅菌是提高無(wú)菌保證水平的輔助手段不計(jì)算F0值，污染概率不大于0.1%除血液制品外，發(fā)達(dá)國(guó)家這類大容量注射劑幾乎沒(méi)有小容量注射劑也少見(jiàn)第71頁(yè),共87頁(yè)，2024年2月25日，星期天無(wú)菌灌裝與流通蒸汽滅菌PDA《參數(shù)放行》-1999-10-21文件中指出：如果產(chǎn)品在最終滅菌前采取無(wú)菌灌裝，那么該產(chǎn)品的滅菌工藝可以采用較小的F0值（如F0≤8min）這當(dāng)然是對(duì)熱穩(wěn)定差的產(chǎn)品采用的方法此提法和歐盟GMP無(wú)菌藥品附錄一致這一原則還沒(méi)有被我國(guó)制藥行業(yè)所認(rèn)可，我國(guó)企業(yè)只認(rèn)可流通蒸汽滅菌，卻忽視了無(wú)菌制造工藝的關(guān)鍵要求第72頁(yè),共87頁(yè)，2024年2月25日，星期天不同工藝無(wú)菌保證比較表過(guò)度殺滅法Fo>1210-6熱穩(wěn)定性好的產(chǎn)品以殺滅微生物作為實(shí)現(xiàn)無(wú)菌的手段殘存概率法Fo>810-6熱穩(wěn)定性較差產(chǎn)品工藝過(guò)程將防止產(chǎn)品被耐熱菌污染放在首位，而不是僅依賴最終滅菌去消除污染

流通蒸汽法不計(jì)算Fo0.1%熱不穩(wěn)定產(chǎn)品加熱是無(wú)菌生產(chǎn)工藝（除菌過(guò)濾）的補(bǔ)充手段除菌過(guò)濾法LRV>70.1%不能加熱的產(chǎn)品LRV=logreductionvalue過(guò)濾對(duì)數(shù)下降值，一般上游為107下游為1，則LRV=7由于后續(xù)無(wú)菌操作較多，最終產(chǎn)品達(dá)到的無(wú)菌保證水平遠(yuǎn)低于除菌過(guò)濾的本身的能力第73頁(yè),共87頁(yè)，2024年2月25日，星期天干熱滅菌機(jī)理干熱滅菌與濕熱滅菌的動(dòng)力學(xué)特征相似，符合“對(duì)數(shù)規(guī)則”，但滅菌的機(jī)理卻并不相同。干熱滅菌為何需較高的溫度？水份的影響：濕度低機(jī)理不同：干熱滅菌是使微生物氧化而不是使蛋白質(zhì)變性第74頁(yè),共87頁(yè)，2024年2月25日，星期天干熱滅菌要點(diǎn)干熱滅菌的介質(zhì)通常是熱空氣用對(duì)數(shù)規(guī)則描述微生物殺滅過(guò)程，準(zhǔn)確性較差溫度高，200℃以上，有可能到320℃用于玻璃容器、手術(shù)器械等無(wú)菌生產(chǎn)工藝中安瓿、西林瓶的滅菌和去熱源第75頁(yè),共87頁(yè)，2024年2月25日，星期天干熱滅菌與去熱原的關(guān)系去熱原的工藝條件比孢子殺滅程序要苛刻得多，通常相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)干熱滅菌時(shí)間FH

的數(shù)十倍。如果干熱法去熱原工藝能使細(xì)菌內(nèi)毒素下降3個(gè)對(duì)數(shù)單位，就不必再進(jìn)行微生物的生物指示劑挑戰(zhàn)性試驗(yàn)。第76頁(yè),共87頁(yè)，2024年2月25日，星期天第五部分

滅菌工藝的驗(yàn)證第77頁(yè),共