藥品微生物檢驗(yàn)基礎(chǔ)知識(shí)

藥品微生物檢驗(yàn)基礎(chǔ)知識(shí)一、微生物基本介紹1、微生物的定義微生物是一些形體微小，以單細(xì)胞或簡(jiǎn)單多細(xì)胞、甚至是沒(méi)有細(xì)胞結(jié)構(gòu)的形式存在的低等生物的統(tǒng)稱。2、微生物的分類(lèi)微生物的主要分類(lèi)單位：域、界、門(mén)、綱、目、科、屬、種、變種、亞種（小種）、型、菌株（品系）“種”是最本的分類(lèi)單位，例：大腸埃希菌第2頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天一、微生物基本介紹3、微生物的特點(diǎn)體形微??；結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單；生長(zhǎng)繁殖快；種類(lèi)繁多，分布廣，適應(yīng)性強(qiáng)。包括：細(xì)菌、酵母菌、霉菌、放線菌、立克次氏體、支原體和病毒等。第3頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天一、微生物基本介紹4.1細(xì)菌藥典收錄的有代表性的常見(jiàn)細(xì)菌有1大腸埃希菌2金黃色葡萄球菌3枯草芽孢桿菌4生孢梭菌5銅綠假單胞菌第4頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天1大腸埃希菌

大腸埃希氏菌（Escherichiacoli）通常被稱為大腸桿菌，是Escherich在1885年發(fā)現(xiàn)的，在相當(dāng)長(zhǎng)的一段時(shí)間內(nèi)一直被當(dāng)作正常腸道菌群的組成部分認(rèn)為是非致病菌。一般多不致病，為人和動(dòng)物腸道中的常居菌，在一定條件下可引起腸道外感染。某些血清型菌株的致病性強(qiáng)，引起腹瀉，統(tǒng)稱致病性大腸桿菌。人體感染致病EHEC后，會(huì)發(fā)生嚴(yán)重的痙攣性腹痛和反復(fù)發(fā)作的出血性腹瀉，同時(shí)伴有發(fā)熱、嘔吐等表現(xiàn)，多為EHEC產(chǎn)生的毒素所致。第5頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天2金黃色葡萄球菌

金黃色葡萄球菌是人類(lèi)化膿感染中最常見(jiàn)的病原菌，可引起局部化膿感染，也可引起肺炎、偽膜性腸炎、心包炎等，甚至敗血癥、膿毒癥等全身感染。金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)是人類(lèi)的一種重要病原菌，隸屬于葡萄球菌屬有“嗜肉菌"的別稱，是革蘭氏陽(yáng)性菌的代表，可引起許多嚴(yán)重感染。第6頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天2金黃色葡萄球菌典型的金黃色葡萄球菌為球型，直徑0.8μm左右，顯微鏡下排列成葡萄串狀。第7頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天3枯草芽孢桿菌

枯草芽胞桿菌，是芽胞桿菌屬的一種。單個(gè)細(xì)胞0.7～0.8×2～3微米，著色均勻。無(wú)莢膜，周生鞭毛，能運(yùn)動(dòng)。革蘭氏陽(yáng)性菌，芽孢0.6～0.9×1.0～1.5微米，橢圓到柱狀，位于菌體中央或稍偏，芽孢形成后菌體不膨大。菌落表面粗糙不透明，污白色或微黃色，在液體培養(yǎng)基中生長(zhǎng)時(shí)，常形成皺醭。需氧菌。第8頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天4生孢梭菌

生孢梭菌（Clostridium

sporogenes）又譯產(chǎn)孢梭菌，能夠產(chǎn)生孢子，革蘭氏染色陽(yáng)性，以周生鞭運(yùn)動(dòng)，嚴(yán)格厭氧的梭菌。第9頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天5銅綠假單胞菌

銅綠假單胞菌的學(xué)名是Pseudomonasaeruginosa，綠膿假單胞菌屬為革蘭染色陰性需氧菌，存在于土壤、塵埃、水和少數(shù)人體腸道中，亦可暫時(shí)寄生于皮膚，主要寄生在肛門(mén)、生殖器部位、腋窩和外耳道等處。在正常情況下一般不致病，當(dāng)機(jī)體抵抗力低下時(shí)可致病，還可引起病人死亡。第10頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天細(xì)菌鑒別革蘭氏染色格蘭仕陽(yáng)性菌例如：金黃色葡萄球菌，也稱“金葡菌”，細(xì)胞壁含90%的肽聚糖和10%的磷壁酸。其肽聚糖的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)比革蘭氏陰性菌致密，染色時(shí)結(jié)晶紫附著后不被酒精脫色故而呈現(xiàn)紫色革蘭氏陰性菌例如:大腸埃希菌的細(xì)胞壁肽聚糖層薄、交聯(lián)度差，脂類(lèi)含量高，所以紫色復(fù)合物被酒精沖掉然后附著了沙黃的紅色。第11頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天革蘭氏染色革蘭氏染色法一般包括初染、媒染、脫色、復(fù)染等四個(gè)步驟，具體操作方法是：1）涂片固定。2）草酸銨結(jié)晶紫染1分鐘。3）自來(lái)水沖洗。4）加碘液覆蓋涂面染約1分鐘。5）水洗，用吸水紙吸去水分。6）加95%酒精數(shù)滴，并輕輕搖動(dòng)進(jìn)行脫色，20秒后水洗，吸去水分。7）蕃紅染色液（?。┤?分鐘后，自來(lái)水沖洗。干燥，鏡檢。第12頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天染色結(jié)果

革蘭氏陽(yáng)性菌呈藍(lán)紫色，革蘭氏陰性菌呈紅色。

第13頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天染色結(jié)果

革蘭氏陽(yáng)性菌呈藍(lán)紫色，革蘭氏陰性菌呈紅色第14頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天一、微生物基本介紹4.2真菌（包括酵母菌和霉菌）1黑曲霉菌2白色念珠菌第15頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天1黑曲霉菌

黑曲霉，半知菌亞門(mén)，絲孢綱，絲孢目，叢梗孢科，曲霉屬真菌中的一個(gè)常見(jiàn)種。廣泛分布于世界各地的糧食、植物性產(chǎn)品和土壤中。第16頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天2白色念珠菌

白色念珠菌沙氏葡萄糖瓊脂白色念珠菌白色念珠菌（Moniliaalbican或canidiaAlbicans），是一種真菌，通常存在于正常人口腔，上呼吸道，腸道及陰道，是醫(yī)學(xué)全身性真菌感染病的重要途徑，可以引起心膜炎、肺炎、尿布疹、鵝口瘡、陰道炎、腦膜炎、及敗血癥。第17頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天白色念珠菌右圖：白色念珠菌在該批念珠菌顯色對(duì)照培養(yǎng)基表面培養(yǎng)48小時(shí)的生長(zhǎng)形態(tài)。左圖：白色念珠菌在該批念珠菌顯色對(duì)照培養(yǎng)基表面培養(yǎng)24小時(shí)的生長(zhǎng)形態(tài)；第18頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天一、微生物基本介紹5、微生物與我們每張人民幣帶細(xì)菌：900萬(wàn)個(gè)；人體體表及體內(nèi)存在大量的微生物；皮膚表面：平均10萬(wàn)個(gè)細(xì)菌/平方厘米；口腔“細(xì)菌種類(lèi)超過(guò)500種；腸道：微生物總量達(dá)100萬(wàn)億；第19頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天

（未清洗的手）

（清洗過(guò)的手）

一、微生物基本介紹第20頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天二、培養(yǎng)基1、培養(yǎng)基的制備培養(yǎng)基的配制：

按處方配制，使用按處方生產(chǎn)的符合規(guī)定的脫水培養(yǎng)基第21頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天二、培養(yǎng)基配制時(shí)注意：不得使用結(jié)塊或顏色發(fā)生改變的脫水培養(yǎng)基；常用的溶劑是純化水、蒸餾水，避免使用自來(lái)水，因其中含有氯等抗菌物質(zhì)；脫水型培養(yǎng)基應(yīng)完全溶解于水中，再分裝滅菌；加熱助溶，注意不要過(guò)度加熱；如需要添加其它組分，加入后應(yīng)充分混勻；配制用的容器最好用中性玻璃或聚乙烯容器；配制培養(yǎng)基一般要在1小時(shí)內(nèi)完成，如果室溫高，配制時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，易使培養(yǎng)基受污染；第22頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天二、培養(yǎng)基2、培養(yǎng)基的滅菌已配制好的培養(yǎng)基最好盡快滅菌；一般培養(yǎng)基采用濕熱滅菌，即高壓蒸汽菌，通常是121℃15分鐘；濕熱滅菌必須嚴(yán)格控制滅菌溫度和時(shí)間，不可重復(fù)高溫滅菌；高壓蒸汽滅菌鍋在使用時(shí)，內(nèi)置物品不能太多，不要堆積形成死角。要定期對(duì)壓力表等進(jìn)行檢定，檢定周期一般為半年；定期對(duì)滅菌效果進(jìn)行檢驗(yàn)，可采用生物指示菌法、化學(xué)變色紙片（如濕熱滅菌指示條）等進(jìn)行驗(yàn)證。第23頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天二、培養(yǎng)基3、培養(yǎng)基的貯藏貯藏注意：滅菌后的培養(yǎng)基應(yīng)迅速取出，避免長(zhǎng)時(shí)間保存在滅菌鍋內(nèi)，造成過(guò)度滅菌；培養(yǎng)基保存前應(yīng)標(biāo)上名稱和制備日期（或到期日期）；瓊脂培養(yǎng)基不得在0℃或0℃以下存放；瓊脂平板最好現(xiàn)配現(xiàn)用，如置冰箱保存，在驗(yàn)證的期限內(nèi)使用；藥典規(guī)定3周內(nèi)使用，有密封裝置的培養(yǎng)基可以保存一年第24頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天二、培養(yǎng)基4、培養(yǎng)的再融化方式水浴加熱微波爐電熱爐加熱注意：固體培養(yǎng)基滅菌后的再融化只允許一次融化的培養(yǎng)基應(yīng)置于45℃～50℃的水浴中，不得超過(guò)8小時(shí)第25頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天二、培養(yǎng)基5、培養(yǎng)基的性能評(píng)估所有購(gòu)回的、配制好的培養(yǎng)基均應(yīng)進(jìn)行質(zhì)量控制試驗(yàn)（培養(yǎng)基適應(yīng)性檢查）理化指標(biāo)（P55）微生物學(xué)指標(biāo)（P55）第26頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天購(gòu)買(mǎi)的成品培養(yǎng)基配方與藥典配方核對(duì)第27頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天中檢院購(gòu)買(mǎi)的對(duì)照培養(yǎng)基第28頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天三、菌種1、分類(lèi)（概念）：標(biāo)

準(zhǔn)

菌

株由國(guó)內(nèi)或國(guó)際菌種保藏機(jī)構(gòu)保藏的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株由標(biāo)準(zhǔn)菌株經(jīng)一次傳代得到的培養(yǎng)物商業(yè)派生菌株由供應(yīng)商提供的所有特性與標(biāo)準(zhǔn)菌株等效的菌株工

作

菌

株由標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株以傳代得到的培養(yǎng)物第29頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天三、菌種注意：標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株、工作菌株都應(yīng)進(jìn)行純度和特性確認(rèn)工作菌株的傳代次數(shù)不得超過(guò)5代（從菌種收藏機(jī)構(gòu)獲得的標(biāo)準(zhǔn)菌株為第0代）“1代”是指將活的培養(yǎng)物接種到微生物生長(zhǎng)的新鮮培養(yǎng)基中培養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)室必須建立和保存其所有菌種的進(jìn)出、收集、貯藏、保存、確認(rèn)試驗(yàn)及銷(xiāo)毀的記錄。第30頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天三、菌種標(biāo)準(zhǔn)菌株：①凍干粉（圖P63）②甘油凍存管（圖P64）第31頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天三、菌種菌種保藏機(jī)構(gòu)：CMCC中國(guó)醫(yī)學(xué)微生物菌種保藏管理中心GIMCC廣東省微生物研究所微生物菌種保藏中心ATCC美國(guó)典型菌種保藏中心例：

CMCC

（B）

26003菌種保藏機(jī)構(gòu)

細(xì)菌

菌種編號(hào)（金黃葡萄球菌）第32頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天三、菌種2、菌種的鑒定

金黃色葡萄菌CMCC(B)26003甘露醇平板上劃線分純，典型菌落

為黃色圓形突起，表面濕潤(rùn)光滑；革蘭氏染色：陽(yáng)性，球菌。血漿凝固霉酶實(shí)驗(yàn)：陽(yáng)性第33頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天三、菌種2、菌種的鑒定大腸埃希菌CMCC(B)44102大腸埃希菌在麥康凱培養(yǎng)基上的菌落形態(tài)特征：鮮桃紅色或微紅色,菌落中心呈深桃紅色,圓形,扁平,邊緣整齊,表面光滑,濕潤(rùn)革蘭氏染色：陰性，桿菌。第34頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天大腸埃希菌(Escherichiacoli)供試液制備和增菌培養(yǎng)取供試品，照“非無(wú)菌產(chǎn)品微生物限度檢查：微生物計(jì)數(shù)法”（通則1105）制成1：10供試液。取相當(dāng)于1g或1mL供試品的供試液，接種至適宜體積（經(jīng)方法適用性試驗(yàn)確定的）的胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，混勻，30～35℃培養(yǎng)18～24小時(shí)。第35頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天大腸埃希菌(Escherichiacoli)

選擇和分離培養(yǎng)

取上述預(yù)培養(yǎng)物1mL接種至100mL麥康凱液體培養(yǎng)基中，42～44℃培養(yǎng)24～48小時(shí)。取麥康凱液體培養(yǎng)物劃線接種于麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板上，30～35℃培養(yǎng)18～72小時(shí)。第36頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天大腸埃希菌(Escherichiacoli)結(jié)果判斷

若麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板上有菌落生長(zhǎng)，應(yīng)進(jìn)行分離、純化及適宜的鑒定試驗(yàn),確證是否為大腸埃希菌；若麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板上沒(méi)有菌落生長(zhǎng)，或雖有菌落生長(zhǎng)但鑒定結(jié)果為陰性，判供試品未檢出大腸埃希菌。第37頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天三、菌種銅綠假單胞菌CMCC(B)10104溴化十六烷基三甲銨瓊脂平板上劃線分純，典型菌落呈扁平，無(wú)定形、周邊擴(kuò)散，表面濕——灰白色，周?chē)兴{(lán)綠色素?cái)U(kuò)散。氧化酶實(shí)驗(yàn)：陽(yáng)性綠膿菌素：陽(yáng)性革蘭氏染色：陰性，桿菌；第38頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天三、菌種白色念珠菌CMCC(B)98001沙氏葡萄糖瓊脂平板上劃線分純，典型菌落乳白色，表面光滑有濃酵母氣味。革蘭氏染色：陽(yáng)性，菌體大，球菌。芽管試驗(yàn)：陽(yáng)性第39頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天三、菌種3、菌種的保藏A：甘油冷凍管保藏法保藏溫度：－30℃～80℃；保藏菌種有效期：1～2年優(yōu)點(diǎn)：保存期較長(zhǎng)，反復(fù)傳代導(dǎo)致菌種變異的風(fēng)險(xiǎn)較小；缺點(diǎn)：操作相對(duì)復(fù)雜，成本較高。B：斜面低溫保藏法保藏溫度4℃左右，保藏時(shí)間1～3個(gè)月，但銅綠假單胞菌不宜用本法保存。優(yōu)點(diǎn)：操作簡(jiǎn)便，成本低，比較容易掌握；缺點(diǎn)：保存期比較短，反復(fù)傳代有引起變異的可能。。

保藏溫度保藏有效期優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)甘油冷凍管保藏法-30℃～80℃1～2年·保存期較長(zhǎng)，·反復(fù)傳代導(dǎo)致菌種變異的風(fēng)險(xiǎn)較小·操作相對(duì)復(fù)雜，·成本較高斜面低溫保藏法4℃左右1～3個(gè)月·操作簡(jiǎn)便，·成本低，·比較容易掌握·保存期比較短，·反復(fù)傳代有引起變異的可能；·銅綠假單胞菌不宜用本法保存。第40頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天甘油冷凍管保存菌種第41頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天甘油冷凍管保存菌種第42頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天甘油冷凍柜保存菌種第43頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天三、菌種4、菌種的使用和銷(xiāo)毀過(guò)期菌種應(yīng)及時(shí)銷(xiāo)毀，銷(xiāo)毀時(shí)應(yīng)經(jīng)121℃30分鐘的生物滅活處理。121℃45min高溫蒸汽滅活。并進(jìn)行菌種銷(xiāo)毀記錄。第44頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天四、微生物限度檢查法1、定義微生物限度檢查法—系檢查非規(guī)定滅菌制劑及其原料、輔料受微生物污染程度的方法。2、檢查項(xiàng)目定量檢查—細(xì)菌數(shù)、霉菌及酵母菌數(shù)定性檢查—控制菌（金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、白色念球菌）檢驗(yàn)環(huán)境：與無(wú)菌檢查相同第45頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天四、微生物限度檢查法3、檢驗(yàn)量指一次檢驗(yàn)用量；10g或10ml，膜劑為100cm2，貴重藥品、微量包裝藥品的檢驗(yàn)量可以酌減。4、供試液的制備根據(jù)供試品的理化特性與生物特性，采取適宜的方法制備供試液；供試液制備若需加溫時(shí)，應(yīng)均勻加熱，且溫度不超過(guò)45℃。第46頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天四、微生物限度檢查法制備原則：簡(jiǎn)便、快速！供試液從制備至加入檢驗(yàn)用培養(yǎng)基，不得超過(guò)1小時(shí)。第47頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天四、微生物限度檢查法供試品分類(lèi)液體供試品固體、半固體或黏稠性供試品需用特殊供試液制備方法的供試品非水溶性供試品膜劑供試品腸溶及結(jié)腸制劑供試品氣霧劑、噴霧劑供試品貼膏劑供試品具抑菌活性的供試品：培養(yǎng)基稀釋法、離心沉淀法、薄膜過(guò)濾法、中和法

第48頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天四、微生物限度檢查法5、方法驗(yàn)證5.1驗(yàn)證菌株大腸埃希菌、枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、白色念珠菌、黑曲霉5.2計(jì)數(shù)方法的驗(yàn)證當(dāng)建立產(chǎn)品的微生物限度檢查法時(shí)，應(yīng)進(jìn)行細(xì)菌、霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)方法的驗(yàn)證，以確認(rèn)所采用的方法適合于該產(chǎn)品的細(xì)菌、霉菌及酵母菌數(shù)的測(cè)定。若產(chǎn)品的組分或原檢驗(yàn)條件發(fā)生改變可影響檢驗(yàn)結(jié)果時(shí)，計(jì)數(shù)方法應(yīng)重新驗(yàn)證。第49頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天四、微生物限度檢查法⑴試驗(yàn)組薄膜過(guò)濾法計(jì)數(shù)時(shí)：取規(guī)定量的供試液，過(guò)濾，沖洗，在最后一次的沖洗液中加入50～100cfu試驗(yàn)菌，過(guò)濾，按薄膜過(guò)濾法測(cè)定其菌數(shù)。⑵菌液組測(cè)定所加的試驗(yàn)菌數(shù)（50～100cfu）⑶供試品對(duì)照組取規(guī)定量供試液，按菌落計(jì)數(shù)方法測(cè)定供試品本底菌數(shù)⑷稀釋對(duì)照組用相應(yīng)的稀釋液替代供試品，加入50～100cfu試驗(yàn)菌，按試驗(yàn)組的供試液制備方法和菌落計(jì)數(shù)方法測(cè)定其菌數(shù)。第50頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天四、微生物限度檢查法驗(yàn)證方法：驗(yàn)證試驗(yàn)至少應(yīng)進(jìn)行3次獨(dú)立的平行試驗(yàn)，并分別計(jì)算試驗(yàn)菌每次試驗(yàn)的回收率不低于70%，若任一次試驗(yàn)中試驗(yàn)組的菌回收低于70%，應(yīng)采取適宜的方法消除供試品的抑菌活性，并重新進(jìn)行進(jìn)行方法驗(yàn)證。第51頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天四、微生物限度檢查法5.3控制菌檢查法驗(yàn)證當(dāng)建立藥品的微生物限度檢查法時(shí)，應(yīng)進(jìn)行控制菌檢查方法的驗(yàn)證，以確認(rèn)所采用的方法適合于該藥品的控制菌檢查。采用薄膜過(guò)濾法時(shí)，取規(guī)定量供試液，過(guò)濾，沖洗，試驗(yàn)菌（10～100cfu）應(yīng)加在最后一次沖洗液中，依法操作。若上述試驗(yàn)檢出試驗(yàn)菌，按此供試液制備法和控制菌檢查法進(jìn)行供試品的該控制菌檢查；若試驗(yàn)組未檢出試驗(yàn)菌，應(yīng)采用相應(yīng)方法消除供試品的抑菌活性，并重新進(jìn)行方法驗(yàn)證。第52頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天四、微生物限度檢查法5.4細(xì)菌、霉菌及酵母菌檢查檢查方法：平皿法和薄膜過(guò)濾法按已驗(yàn)證的計(jì)數(shù)方法進(jìn)行供試品的細(xì)菌、霉菌及酵母菌菌數(shù)檢查第53頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天四、微生物限度檢查法菌落報(bào)告規(guī)則：細(xì)菌、酵母