血液學(xué)檢驗(yàn)珠蛋白異常

血液學(xué)檢驗(yàn)珠蛋白異常第一節(jié)概述一、血紅蛋白的結(jié)構(gòu)與功能血紅蛋白是紅細(xì)胞內(nèi)的運(yùn)輸?shù)鞍?，約65%的血紅蛋白合成于有核紅細(xì)胞期，另有35%合成于網(wǎng)織紅細(xì)胞階段。其分子量為64458。它的主要功能是吸收肺部大量的氧，并將其輸送到身體的各組織。第2頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天1、血紅蛋白的組成

血紅蛋白亞鐵血紅素（鐵卟啉Ⅸ）（4分子）甘氨酸Fe2+珠蛋白（1分子）

由氨基酸組成6種肽鏈：αβγδεζ每1個(gè)珠蛋白分子有4個(gè)多肽鏈，而每一個(gè)肽鍵又和三個(gè)鐵卟啉結(jié)合。

第3頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天2、血紅蛋白的種類正常成人紅細(xì)胞中有3種血紅蛋白：成人血紅蛋白：HbA（α2β2)96%-98%

成人次要血紅蛋白:HbA2（α2δ2)1%-3.1%

胎兒血紅蛋白:HbF（α2γ2)2%以下

胚胎血紅蛋白:HbG1(

ζ2ε2)

HbG2(α2ε2)

HbP(

ζ2γ2)3周-12周第4頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天3、血紅蛋白的功能血紅蛋白的主要功能是輸送氧氣和二氧化碳。當(dāng)空氣被吸入肺部時(shí)，空氣中的氧氣與肺泡膜壁血液中的血紅蛋白進(jìn)行疏松的結(jié)合，形成氧合血紅蛋白（HbO2），隨血液流到全身各組織內(nèi)，因組織內(nèi)氧分壓較低，所以氧合血紅蛋白即被解離而放出一部分氧，以供給細(xì)胞的代謝需要。第5頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天在此同時(shí)，血紅蛋白即與組織中某些物質(zhì)氧化后所產(chǎn)生的二氧化碳結(jié)合成為氨基甲酸血紅蛋白（HbNHCOOH，又稱碳酸血紅蛋白）運(yùn)輸?shù)椒尾?，放出CO2。血紅蛋白如此不斷地運(yùn)輸O2和CO2。此外，血紅蛋白也有調(diào)節(jié)機(jī)體酸堿平衡的緩沖作用。第6頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天4、影響血紅蛋白結(jié)構(gòu)和功能的因素（1）珠蛋白基因缺失或缺陷珠蛋白肽鏈合成不足或不能合成氨基酸替換或丟失紅細(xì)胞形態(tài)異常：靶形、鐮狀紅細(xì)胞（2）酶缺陷

高鐵血紅蛋白還原酶系統(tǒng)缺陷

MHb形成

（3）化學(xué)藥物中毒

MHbSHbHbCO第7頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天二、珠蛋白異常珠蛋白合成是在各自珠蛋白基因控制下完成的。珠蛋白肽鏈合成異常,必然造成Hb合成障礙。珠蛋白分子結(jié)構(gòu)異常時(shí)，稱為Hb分子病。當(dāng)一種或幾種珠蛋白肽鏈合成量的異常時(shí),稱為珠蛋白生成障礙性貧血，以往稱地中海貧血，現(xiàn)亦稱海洋性貧血。第8頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天珠蛋白異常

包括：珠蛋白肽鏈結(jié)構(gòu)異常(異常血紅蛋白病)肽鏈合成異常(珠蛋白生成障礙性貧血)第9頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天珠蛋白生成障礙性貧血thalassemia第10頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天珠蛋白生成障礙性貧血（地中海貧血又稱海洋性貧血）是一組遺傳性溶血性貧血。其共同特點(diǎn)是由于珠蛋白基因的缺陷使血紅蛋白中的珠蛋白肽鏈有一種或幾種合成減少或不能合成。導(dǎo)致血紅蛋白的組成成分改變，本組疾病的臨床癥狀輕重不一，大多表現(xiàn)為慢性進(jìn)行性溶血性貧血。

第11頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天病因和發(fā)病機(jī)制

本病是由于珠蛋白基因的缺失或點(diǎn)突變所致。組成珠蛋白的肽鏈有4種，即α、β、γ、δ鏈，分別由其相應(yīng)的基因編碼，這些基因的缺失或點(diǎn)突變可造成各種肽鏈的合成障礙,致使血紅蛋白的組分改變。通常將地中海貧血分為α、β、δβ和δ等4種類型，其中以β和α地中海貧血較為常見(jiàn)。

第12頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天

β珠蛋白生成障礙性貧血人類β珠蛋白基因簇位于11p15.5。β地中海貧血（簡(jiǎn)稱β地貧）的發(fā)生主要是由于基因的點(diǎn)突變，少數(shù)為基因缺失?；蛉笔Ш陀行c(diǎn)突變可致β鏈的生成完全受抑制，稱為β0

地貧；有些點(diǎn)突變使β鏈的生成部分受抑制，則稱為β＋地貧。

第13頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天

β地中海貧血分型１、重型

又稱Cooley貧血?；純撼錾鷷r(shí)無(wú)癥狀，至３～６個(gè)月開(kāi)始出現(xiàn)癥狀，呈慢性進(jìn)行性貧血，面色蒼白，肝脾腫大，發(fā)育不良，常有輕度黃疸，上述癥狀隨年齡增長(zhǎng)而日益明顯。由于骨髓代償性增生導(dǎo)致骨骼變大，首先發(fā)生于掌骨，以后為長(zhǎng)骨和肋骨，1歲后顱骨改變明顯，表現(xiàn)為頭顱變大、額部隆起、顴高、鼻梁塌陷，兩眼距離增寬，形成海洋性貧血的特殊面容。

第14頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天患兒常并發(fā)支氣管炎或肺炎。當(dāng)并發(fā)有含鐵血黃素沉著時(shí)，因過(guò)多的鐵沉著于心肌和其它臟器如肝、胰腺、腦垂體等，而引起相應(yīng)臟器損害的表現(xiàn)，其中最嚴(yán)重的是心力衰竭，它是貧血和鐵沉著造成心肌損害的結(jié)果，是導(dǎo)致患兒死亡的重要原因之一。本病如不治療，多于5歲前死亡。第15頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天實(shí)驗(yàn)室檢查

血象呈小細(xì)胞低色素性貧血，網(wǎng)織紅細(xì)胞正?；蛟龈?；

骨髓象呈紅細(xì)胞系統(tǒng)增生明顯活躍，以中、晚幼紅細(xì)胞占多數(shù)；

紅細(xì)胞滲透脆性明顯減低；HbF含量明顯增高，大多>0.40，這是診斷重型β地中海貧血的重要依據(jù)；

顱骨Ｘ線照片可見(jiàn)顱骨內(nèi)外板變薄，板障增寬，在骨皮質(zhì)間出現(xiàn)垂直短發(fā)樣骨刺。第16頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天２、輕型

患者無(wú)癥狀或或輕度貧血，脾不大或輕度腫大。病程經(jīng)過(guò)良好，能存活至老年。本型多于重型患者家族調(diào)查時(shí)被發(fā)現(xiàn)。實(shí)驗(yàn)室檢查

成熟紅細(xì)胞有輕度形態(tài)改變；紅細(xì)胞滲透脆性正?；驕p低；血紅蛋白電泳顯示HbA2含量增高，這是本型的特點(diǎn)；HbF含量正常。第17頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天３、中間型

多于幼童期出現(xiàn)癥狀，其臨床表現(xiàn)介于輕型和重型之間，中度貧血，脾臟輕或中度腫大，黃疸可有可無(wú)，骨骼改變較輕。實(shí)驗(yàn)室檢查血象和骨髓象的改變?nèi)缰匦?；紅細(xì)胞滲透脆性減低；HbF含量約為0.40～0.80，HbA2含量正?；蛟龈?。第18頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天第19頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天第20頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天β地中海貧血第21頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天β地中海貧血第22頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天β地中海貧血第23頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天

a珠蛋白生成障礙性貧血

人類a珠蛋白基因簇位于16Pter-p13.3。每條染色體各有2個(gè)a珠蛋基因，一對(duì)染色體共有4個(gè)a珠蛋白基因。大多數(shù)a珠蛋白生成障礙性貧血是由于a珠蛋白基因的缺失所致，少數(shù)由基因點(diǎn)突變?cè)斐?。若僅是一條染色體上的一個(gè)a基因缺失或缺陷，則α鏈的合成部分受抑制，稱為a+地貧；若每一條染色體上的2個(gè)a基因均缺失或缺陷，稱為a0地貧。

第24頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天１、靜止型

患者無(wú)癥狀。紅細(xì)胞形態(tài)正常，出生時(shí)臍帶血中HbBart含量0.01～0.02，但3個(gè)月后即消失。

a地中海貧血分型第25頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天２、輕型

患者無(wú)癥狀。實(shí)驗(yàn)室檢查有如下特點(diǎn)；紅細(xì)胞形態(tài)有輕度改變?nèi)绱笮〔坏龋愋蔚?；紅細(xì)胞滲透脆性降低；變性珠蛋白小體陽(yáng)性；HbA2和HbF含量正?；蛏缘??；純耗氀狧bBart's含量0.034～0.140，于生后６個(gè)月時(shí)完全消失。第26頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天３、中間型

又稱血紅蛋白Ｈ病?；純撼錾鷷r(shí)無(wú)明顯癥狀，嬰兒期以后逐漸出現(xiàn)貧血，疲乏無(wú)力、肝脾腫大、輕度黃疸，年齡較大的患兒可出現(xiàn)類似重型β珠蛋白生成障礙性貧血的特殊面容。合并呼吸道感染或服用氧化性藥物等可誘發(fā)急性溶血而加重貧血，甚至發(fā)生溶血危象。第27頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天４、重型

又稱HbBart‘s胎兒水腫綜合征。胎兒常于30～40周時(shí)流產(chǎn)、死胎或娩出后半小時(shí)內(nèi)死亡，胎兒呈重度貧血、黃疸、水腫、肝脾腫大，胎盤(pán)巨大且質(zhì)脆。第28頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天實(shí)驗(yàn)室檢查血象中成熟紅細(xì)胞形態(tài)改變?nèi)缰匦挺轮榈鞍咨烧系K性貧血，有核紅細(xì)胞和網(wǎng)織紅細(xì)胞明顯增加。血紅蛋白中幾乎全是HbBart's或同時(shí)有少量HBH，無(wú)HbA、HbA2和HbF。第29頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天

二、珠蛋白生成障礙性貧血常用的檢驗(yàn)方法血紅蛋白電泳抗堿血紅蛋白檢驗(yàn)

HbF酸洗脫法檢驗(yàn)第30頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天（一）血紅蛋白電泳檢測(cè)（hemoglobinelectrophoresis）[原理]目的是檢出和確認(rèn)各種正常和異常的血紅蛋白。根據(jù)不同的血紅蛋白帶有不同的電荷，等電點(diǎn)不同，在一定的pH緩沖液中，血紅蛋白的等電點(diǎn)小于緩沖液的pH時(shí)帶負(fù)電荷，電泳時(shí)在電場(chǎng)中向陽(yáng)極泳動(dòng)，反之，Hb帶正電荷向陰極泳動(dòng)。第31頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天在一定電壓下，經(jīng)過(guò)一定時(shí)間的電泳，不同的血紅蛋白所帶電荷不同，分子量不同，其泳動(dòng)方向和速度不同，可分離出各自的區(qū)帶，同時(shí)對(duì)電泳出的各區(qū)帶進(jìn)行比色或電泳掃描，可進(jìn)行各種血紅蛋白的定量分析。一般最常用的是pH8.6醋酸纖維薄膜電泳。第32頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天[參考值]①pH8.6醋酸纖維薄膜電泳（見(jiàn)書(shū)圖）有4條區(qū)帶：

HbA>95%，HbF<2%HbA21%-3.1%非血紅蛋白（NH1和NH2）但HbA與HbF不易分開(kāi)，HbH和HbBarts不易分開(kāi)。②pH6.5TEB緩沖液醋酸纖維膜電泳，主要用于HbH和HbBarts的檢出。第33頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天[臨床評(píng)價(jià)]（1）血紅蛋白電泳為定性試驗(yàn)，可以檢測(cè)各種正常和異常血紅蛋白的存在和相對(duì)的含量，有異常Hb帶存在時(shí)，可作初步估計(jì)HbH,HbE,HbBarts,HbS,HbD和HbC）。第34頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天（2）HbA2增高：是診斷β-輕型地中海貧血的重要依據(jù)，某些不穩(wěn)定血紅蛋白病也會(huì)增高。（3）HbA2減低：缺鐵性貧血及鐵粒幼細(xì)胞貧血HbA2減低。第35頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天（二）抗堿血紅蛋白檢測(cè)（alkalidenaturationtest）[臨床意義]1、HbF絕對(duì)增多2、相對(duì)增多3、生理性增多[評(píng)價(jià)]本試驗(yàn)重復(fù)性好，但抗堿能力強(qiáng)的血紅蛋白不僅只有HBF，應(yīng)結(jié)合HB電泳分析，提高結(jié)果的可靠性。第36頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天（三）HbF酸洗脫法檢測(cè)

（acidelutiontest）[原理]利用HbF的抗酸作用，將血涂片與酸性緩沖液孵育5min，流水沖洗，待干后，用伊紅液染色，含HbF的紅細(xì)胞呈紅色，含其他血紅蛋白的紅細(xì)胞呈蒼白色，計(jì)數(shù)500個(gè)紅細(xì)胞中染成紅色細(xì)胞的百分率。

本實(shí)驗(yàn)簡(jiǎn)單，適用于基層醫(yī)院對(duì)HbF增高的疾病篩檢。第37頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天[參考值]

正常成人含HbF的紅細(xì)胞約占＜2%，新生兒55%～85%，2歲后幼兒＜2%，孕婦可有輕度增加。[臨床意義]①重型珠蛋白生成障礙②胎兒向母親輸血，血中含HbF的紅細(xì)胞增多③遺傳性胎兒血紅蛋白持續(xù)綜合征全部紅細(xì)胞均染為紅色。第38頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天異常血紅蛋白病hemoglobinpathies第39頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天一、疾病概述異常血紅蛋白病是一組珠蛋白鏈分子結(jié)構(gòu)異常性疾病，是由于控制珠蛋白肽鏈合成的基因突變的結(jié)果。目前世界上根據(jù)化學(xué)結(jié)構(gòu)分析發(fā)現(xiàn)的異常血紅蛋白病達(dá)600多種，我國(guó)已發(fā)現(xiàn)的異常血紅蛋白病有80多種，其中部分無(wú)臨床癥狀。第40頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天臨床上常見(jiàn)的有：①血紅蛋白S?。ㄧ牋罴?xì)胞綜合征）；②血紅蛋白E?。虎鄄环€(wěn)定血紅蛋白??；④氧親和力增高血紅蛋白；⑤血紅蛋白M病。第41頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天血紅蛋白S病

(鐮狀細(xì)胞綜合征)

血紅蛋白S病是出現(xiàn)異常血紅蛋白S的一組疾病，多稱為鐮狀細(xì)胞綜合征。因HbA的β鏈上第6個(gè)氨基酸谷氨酸被纈氨酸替代形成HbS：Hbα2β26谷→纈，當(dāng)血氧濃度過(guò)低時(shí)，出現(xiàn)鐮變紅細(xì)胞，引起溶血。第42頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天臨床上，鐮狀細(xì)胞綜合征有三種表現(xiàn)形式：

①純合子形式，即鐮狀細(xì)胞貧血。

②雜合子形式，即鐮狀細(xì)胞性狀。

③其他多聚性血紅蛋白病，包括血紅蛋白S—B珠蛋白生成障礙性貧血，血紅蛋白C病及血紅蛋白D病等。其中以鐮狀細(xì)胞貧血的癥狀最為嚴(yán)重(HbS純合子狀態(tài))，鐮狀細(xì)胞性狀(雜合子狀態(tài))最輕。第43頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天診斷1．陽(yáng)性家族史，幼年發(fā)病。

2．貧血程度輕重不一，為溶血性。3.易發(fā)生感染，出血，器官功能衰竭，血栓形成和各種“鐮狀細(xì)胞危象”。第44頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天實(shí)驗(yàn)室檢查Hb降低（一般為50～100g/L）紅細(xì)胞大小不均，可見(jiàn)異形細(xì)胞，多染型紅細(xì)胞，有核紅細(xì)胞，靶型紅細(xì)胞，鐮狀紅細(xì)胞不多見(jiàn)。網(wǎng)織紅細(xì)胞增加（常>10%）紅細(xì)胞鐮變?cè)囼?yàn)陽(yáng)性，紅細(xì)胞滲透脆性明顯下降Hb電泳可見(jiàn)HbS帶位于HbA和HbA2間，HbS占80％以上，HbF增加2～15％，HbA2正常，HbA缺乏。第45頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天血紅蛋白E病HbE是的β鏈上第26位谷氨酸被賴氨酸替代的異常血紅蛋白。多見(jiàn)于東南亞，及我國(guó)南方純合子可有輕至中度溶貧，可見(jiàn)靶形紅細(xì)胞，多成小細(xì)胞低色素貧血；雜合子無(wú)臨床癥狀也可見(jiàn)與珠蛋白生成障礙性貧血的基因并存的雙重雜合子，稱為血紅蛋白E-珠蛋白生成障礙性貧血。出現(xiàn)臨床及血液學(xué)改變第46頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天實(shí)驗(yàn)室檢查1.血紅蛋白下降，多成小細(xì)胞低色素輕度貧血。2.血紅蛋白電泳第47頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天不穩(wěn)定血紅蛋白病由于α或β珠蛋白鏈氨基酸組成改變，使血紅蛋白分子結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定而發(fā)生變性和沉淀，在紅細(xì)胞內(nèi)形成變性珠蛋白小體(Heinz小體)引起的溶血性貧血。第48頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天病史

1．幼年發(fā)病，貧血輕重不一。約1／4患者無(wú)明顯癥狀。

2．藥物(氧化劑)史。

3．溶血嚴(yán)重時(shí)可出現(xiàn)深色的尿。

體格檢查

可有脾臟腫大。

第49頁(yè),共57頁(yè)，2024年2月25日，星期天實(shí)驗(yàn)室檢查

1．小細(xì)胞低色素性貧血，網(wǎng)織紅細(xì)胞增多。

2．骨髓增生活躍、紅系細(xì)胞增生為主。

3．間接膽紅素增高。

4．紅細(xì)胞變性珠蛋白小體試驗(yàn)陽(yáng)性。

5.