細菌藥敏試驗及其耐藥表型檢測

細菌藥物敏感試驗及其耐藥表型檢測1細菌藥敏試驗及其耐藥表型檢測5/9/2024抗菌藥物敏感試驗測定抗菌藥物在體外對病原微生物有無抑菌或殺菌作用的方法稱為抗菌藥物敏感性試驗（AntimicrobialSusceptibilityTest），簡稱藥敏試驗（AST）。2細菌藥敏試驗及其耐藥表型檢測5/9/2024藥敏試驗的意義預測抗菌治療的效果；指導抗菌藥物的臨床應用；發(fā)現(xiàn)或提示細菌耐藥機制的存在，提供選擇藥物的依據(jù)，避免產(chǎn)生或加重細菌的耐藥；監(jiān)測細菌耐藥性，分析耐藥菌的變遷，開展耐藥菌感染的流行病學調(diào)查，以控制和預防耐藥菌感染的發(fā)生和流行。3細菌藥敏試驗及其耐藥表型檢測5/9/2024

MIC的分布 在與微生物生長速率有關(guān)的特定時間間隔內(nèi)，通常是18～24小時，能夠抑制被測菌生長的最低藥物濃度。

藥代動力學和藥效學…

定MIC的折點

臨床療效和細菌清除率抑菌圈直徑的分布

…定抑菌圈折點統(tǒng)計學的線性回歸計算錯誤率：盡可能減少極重要誤差(假敏感率)藥敏試驗折點的建立

4細菌藥敏試驗及其耐藥表型檢測5/9/2024簡述

1確定MIC分布和流行病學界值（ECV）2關(guān)注藥效的PK/PD參數(shù)和藥效相關(guān)的目標值

3使用藥代動力學的蒙特卡洛擬合分析評估達標率

4如果可能，用臨床研究中獲得的預后信息來驗證5檢查臨床折點是否與PK/PD折相似并且沒有將野生型MIC分布分隔開6一旦確定了MIC折點，則可進行其與抑菌圈直徑相關(guān)性研究5細菌藥敏試驗及其耐藥表型檢測5/9/2024MIC與抑菌圈直徑的線性關(guān)系耐藥中介敏感RISLog2.MIC抑菌圈直徑（mm)v6細菌藥敏試驗及其耐藥表型檢測5/9/2024現(xiàn)有主要標準臨床實驗室標準化委員會（ClinicalandLaboratoryStandardsInstitute,CLSI）歐洲抗菌藥物敏感性試驗委員會EUCAST參考標準ISO20776-1（國際微量肉湯稀釋法的參考方法，所有其他方法均需與其比較）ISO20776-2（強調(diào)如何正確地將其他方法與ISO20776-1方法相比較的國際標準）7細菌藥敏試驗及其耐藥表型檢測5/9/2024不同國家的判定折點

－可能不同原因：用藥劑量不同，服藥的間隔不同評價敏感時較保守更強調(diào)檢測出耐藥株（即特定的耐藥群）技術(shù)因素：接種、培養(yǎng)基在我國主要遵循臨床實驗室標準化委員會（CLSI）制定的抗菌藥物選擇原則。

8細菌藥敏試驗及其耐藥表型檢測5/9/2024抗菌藥物敏感性試驗解釋分類(CLSI的定義)敏感（Susceptible）用常規(guī)用量治療有效常規(guī)用藥時達到的平均血藥濃度超過細菌的MIC5倍以上。耐藥（Resistance）用常規(guī)用量治療不能抑制細菌的生長MIC高于藥物在血、體液中可能達到的濃度9細菌藥敏試驗及其耐藥表型檢測5/9/2024中介(Intermediate)MIC接近血、體液中藥物的濃度，治療反應率低于敏感株藥物生理濃集部位有效加大用藥劑量可能有效緩沖區(qū)：防止操作的系統(tǒng)誤差造成重大結(jié)果的判定錯誤10細菌藥敏試驗及其耐藥表型檢測5/9/2024非敏感：用在僅有敏感解釋，無中介或耐藥解釋的細菌。受試菌MIC值高于或抑菌圈直徑低于敏感解釋折點時稱為不敏感。

不敏感并不意味著分離菌存在耐藥機制，也可能是在以前公認的野生型敏感結(jié)果分布范圍內(nèi)；對于結(jié)果為“非敏感”的菌株，應確認證實細菌鑒定是否正確和抗菌藥物敏感性的試驗結(jié)果。11細菌藥敏試驗及其耐藥表型檢測5/9/2024劑量依耐性敏感（SDD）：指依耐于患者所用劑量的菌株敏感性。當菌株的藥敏結(jié)果在“SDD”范圍時，臨床應提高給藥方案(更高劑量和/或更頻繁給藥)12細菌藥敏試驗及其耐藥表型檢測5/9/2024為什么新增劑量依耐性敏感折點？臨床醫(yī)生大多將中介片面的理解為耐藥；使藥敏報告更加精確，利于臨床醫(yī)生更好的選擇藥物；SDD提供了具體的劑量標準：MIC位于SDD范圍內(nèi)時，相對高的劑量會達到治療效果；MIC位于S范圍內(nèi)時，相對低的劑量即可達到治療效果；SDD被公認為可用于抗真菌的治療；SDD與抗生素管理目標一致：在治療時強調(diào)適當?shù)膭┝亢褪褂脮r間。13細菌藥敏試驗及其耐藥表型檢測5/9/2024藥敏試驗的方法學藥物敏感試驗包括體外抗菌敏感試驗、體內(nèi)抗菌藥物活性的測定和藥物濃度的測定。體外抗菌敏感試驗（antimicrobialsusceptibilitytestinginvitro）包括抑菌試驗、殺菌試驗、聯(lián)合藥敏試驗和檢測細菌所產(chǎn)生的抗生素滅活酶。14細菌藥敏試驗及其耐藥表型檢測5/9/2024

抑菌試驗定性測定：紙片瓊脂擴散法（diskagardiffusiontest，Kirby-Bauertest）定量測定：稀釋法(肉湯、瓊脂)（dilutiontest）手工、儀器抗生素連續(xù)梯度法(E-test)藥敏試驗的方法學15細菌藥敏試驗及其耐藥表型檢測5/9/2024將含有定量抗菌藥物的紙片貼在已接種待檢菌的瓊脂平板上，紙片中所含的藥物吸收瓊脂中的水分溶解后會不斷向紙片周圍區(qū)域擴散，形成遞減的梯度濃度，在紙片周圍抑菌濃度范圍內(nèi)待檢菌的生長被抑制，從而形成無菌生長的透明的抑菌圈。抑菌圈的大小反映檢測菌對測定藥物的敏感程度，并與該藥對待檢菌的最低抑菌濃度（MIC）呈負相關(guān)關(guān)系。即抑菌圈愈大，MIC愈小。紙片擴散法（Kirby-Bauer法）16細菌藥敏試驗及其耐藥表型檢測5/9/2024紙片擴散法試驗方法1于純培養(yǎng)平板上，挑取相同的菌落4~5個2用無菌生理鹽水制成0.5麥氏單位（真菌為2.0麥氏單位）的細菌懸液

17細菌藥敏試驗及其耐藥表型檢測5/9/2024紙片擴散法3.用無菌棉拭子蘸取菌液，在試管內(nèi)壁旋轉(zhuǎn)擠去多余菌液；4.涂布整個MH平板表面,反復3次，每次旋轉(zhuǎn)平板60°,最后沿平板內(nèi)緣涂抹1圈，使整個平板涂布均勻；5.涂布菌液的平板在室溫下干燥3～5min后，用無菌鑷子或紙片分配器將藥敏紙片貼于瓊脂表面，每張紙片間距不小于24mm，紙片的中心距平板邊緣不小于15mm。90mm直徑的平板宜貼6張藥敏紙片。18細菌藥敏試驗及其耐藥表型檢測5/9/2024紙片擴散法6.將貼好紙片的MH平板置35℃孵育18～24小時后,用標尺量取抑菌圈直徑。結(jié)果判斷根據(jù)抑菌環(huán)的大小，按照CLSI標準判讀(不同的抗生素其抑菌圈大小的標準不一致)，判斷為敏感(S)、中介(I)、耐藥(R)。某些細菌可蔓延生長至某種抗生素的抑菌圈內(nèi),如磺胺藥抑菌圈內(nèi)可能有微量的細菌生長,可忽略不計,應以外圈為準。19細菌藥敏試驗及其耐藥表型檢測5/9/2024正確閱讀紙片法結(jié)果

讀取完全抑制的抑菌圈直徑，包括紙片的直徑抑菌圈的界限應該是以肉眼觀察沒有明顯的可見細菌生長區(qū)域在抑菌圈邊緣微弱生長的、僅能在放大鏡下才能觀察到的細小菌落應忽略20細菌藥敏試驗及其耐藥表型檢測5/9/2024紙片擴散法－影響因素接種菌量細菌生長率抗生素含量、擴散性平皿厚度溫度，預孵育時間21細菌藥敏試驗及其耐藥表型檢測5/9/2024紙片擴散法－標準化CLSIM100抗菌藥物敏感性試驗的實施標準（每年修訂更新）M02抗菌藥物紙片法敏感性試驗實施標準M07需氧菌抗菌藥物稀釋法敏感性試驗實施標準（每三年修訂更新）包括QC方案新藥的判定標準特殊耐藥性的檢測22細菌藥敏試驗及其耐藥表型檢測5/9/2024CLSI的法規(guī)規(guī)定紙片含量、接種濃度、培養(yǎng)基、平皿厚度、判定標準、質(zhì)控；抗菌藥物建議分組規(guī)定常規(guī)測試報告的抗生素；不同的藥判定標準不同；不同的菌判定標準也不同。23細菌藥敏試驗及其耐藥表型檢測5/9/2024藥物分組說明A組首選試驗、常規(guī)報告的藥物B組首選試驗、選擇性報告的藥物C組補充試驗、選擇性報告的藥物U組僅用于泌尿道感染的補充試驗的藥物O組（其它）對該組細菌有臨床適應癥但一般不允許常規(guī)試驗與報告的藥物InV（研究性）：對該菌群作研究用且尚未經(jīng)FDA批準的藥物24細菌藥敏試驗及其耐藥表型檢測5/9/2024非苛養(yǎng)菌藥物分組

腸桿菌科

綠膿和非腸桿菌科A氨芐西林頭孢他啶，慶大霉素頭孢唑林，慶大霉素 替卡西林，哌拉西林B阿米卡星 阿米卡星氨芐西林/舒巴坦頭孢吡肟，頭孢哌酮

阿莫西林/克拉維酸 氨曲南頭孢呋肟，頭霉素 環(huán)丙沙星，亞胺培南頭孢噻肟，頭孢曲松替卡西林/克拉維酸

環(huán)丙沙星，亞胺培南妥布霉素，復方磺胺

替卡西林，哌拉西林 C氨曲南，頭孢他啶 頭孢曲松卡那霉素，奈替米星氯霉素，奈替米星妥布霉素 四環(huán)素，氯霉素

25細菌藥敏試驗及其耐藥表型檢測5/9/2024非苛養(yǎng)菌藥物分組

葡萄球菌

腸球菌A苯唑西林，青霉素青霉素，氨芐西林B紅霉素類 萬古霉素克林霉素，萬古霉素C氯霉素 慶大霉素26細菌藥敏試驗及其耐藥表型檢測5/9/2024苛養(yǎng)菌藥物分組

流感嗜血桿菌

肺炎鏈球菌A氨芐西林，青霉素 青霉素，紅霉素復方磺胺

復方磺胺B頭孢呋肟，頭孢噻肟 氧氟沙星，四環(huán)素頭孢他啶，氯霉素萬古霉素C阿奇霉素，頭孢克羅 氯霉素，利福平環(huán)丙沙星，亞胺培南 利福平，四環(huán)素27細菌藥敏試驗及其耐藥表型檢測5/9/2024全國耐藥監(jiān)測網(wǎng)要求網(wǎng)點醫(yī)院上報的藥物細菌

抗菌藥物

腸桿菌科氨芐西林、哌拉西林、慶大霉素、妥布霉素、阿米卡星、阿莫西林/克拉維酸、氨芐西林/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦、頭孢哌酮/舒巴坦a、頭孢他啶、頭孢唑啉、頭孢呋辛、頭孢吡肟、頭孢西丁、頭孢噻肟、環(huán)丙沙星或左氧氟沙星、美羅培南或亞胺培南、甲氧芐啶/磺胺甲惡唑、氨曲南、呋喃妥因（尿標本）葡萄球菌屬氨芐西林/舒巴坦、頭孢呋辛、頭孢唑啉、頭孢西丁、慶大霉素、妥布霉素、青霉素、利福平、磷霉素、甲氧芐啶/磺胺甲惡唑、環(huán)丙沙星或左氧氟沙星、克林霉素、紅霉素、苯唑西林、替考拉寧、萬古霉素(MIC)、利奈唑胺、呋喃妥因（尿標本）銅綠假單胞菌頭孢他啶、頭孢吡肟、頭孢哌酮、氨曲南、替卡西林/克拉維酸、頭孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦、左氧氟沙星或環(huán)丙沙星、阿米卡星、亞胺培南或美羅培南、妥布霉素、慶大霉素、哌拉西林、多粘菌素不動桿菌屬氨芐西林/舒巴坦、哌拉西林、哌拉西林/他唑巴坦、頭孢哌酮/舒巴坦、頭孢他啶、頭孢吡肟、環(huán)丙沙星或左氧氟沙星、美羅培南或亞胺培南、慶大霉素、妥布霉素、阿米卡星、甲氧芐啶/磺胺甲惡唑、米諾環(huán)素、多粘菌素洋蔥伯克霍爾德菌甲氧芐啶/磺胺甲惡唑、頭孢他啶、米諾環(huán)素、美羅培南、氯霉素、左氧氟沙星、替卡西林/克拉維酸28細菌藥敏試驗及其耐藥表型檢測5/9/2024全國耐藥監(jiān)測網(wǎng)要求網(wǎng)點醫(yī)院上報的藥物細菌

抗菌藥物

嗜麥芽窄食單胞菌甲氧芐啶/磺胺甲惡唑、左氧氟沙星、米諾環(huán)素、氯霉素、頭孢他啶、替卡西林/克拉維酸）腸球菌屬氨芐西林、替考拉寧、環(huán)丙沙星或左氧氟沙星、萬古霉素、紅霉素、高濃度慶大霉素（CN120）或高濃度鏈霉素（STH300）、青霉素、利奈唑胺、呋喃妥因（尿標本）肺炎鏈球菌苯唑西林、紅霉素、左氧氟沙星、莫西沙星、青霉素b(MIC)、頭孢噻肟或頭孢曲松b(MIC)、萬古霉素、美羅培南（腦脊液標本）鏈球菌屬（除肺炎鏈球菌外）青霉素、紅霉素、克林霉素、萬古霉素、美羅培南、頭孢呋辛、頭孢噻肟或頭孢曲松、左氧氟沙星、莫西沙星嗜血桿菌屬氨芐西林、環(huán)丙沙星或左氧氟沙星、氨芐西林/舒巴坦、頭孢呋辛、頭孢噻肟或頭孢曲松或頭孢他啶、甲氧芐啶/磺胺甲惡唑、阿奇霉素、氯霉素沙門氏菌和志賀氏菌氨芐西林、頭孢曲松或頭孢噻肟或頭孢他啶、左氧氟沙星、環(huán)丙沙星、氯霉素、氨芐西林/舒巴坦、甲氧芐啶/磺胺甲惡唑、萘啶酸

29細菌藥敏試驗及其耐藥表型檢測5/9/2024預報用藥(一)

測試藥 菌名 推測其他藥物的敏感性苯唑西林 葡萄球菌 所有β-內(nèi)酰胺類四環(huán)素 所有（除葡 多西環(huán)素，米諾環(huán)素

萄球菌和不 動桿菌〕紅霉素 G＋球菌 羅紅霉素，克拉霉素，

阿奇霉素克林霉素 所有 林可霉素30細菌藥敏試驗及其耐藥表型檢測5/9/2024預報用藥(二)測試藥 菌名 推測其他藥物的敏感性氨芐西林 腸球菌 青霉素青霉素G 葡萄球菌 氨芐西林，美洛西林

替卡西林頭孢噻吩 腸桿菌科 頭孢拉定，頭孢氨芐

頭孢克羅奈啶酸

腸桿菌科 所有氟喹諾酮類萬古霉素

所有 替考拉寧31細菌藥敏試驗及其耐藥表型檢測5/9/2024即最低（或最?。┮志鷿舛龋╩inimalinhibitoryconcentration，MIC）的測定

?；驹碓谌鉁颦傊袑⒖咕幬镞M行一系列（對倍）稀釋后，定量接種待檢菌，35℃孵育24h后觀察。抑制待檢菌肉眼可見生長的最低藥物濃度，即為該藥物對待檢菌的最低抑菌濃度。稀釋法中用瓊脂培養(yǎng)基者為瓊脂稀釋法，用肉湯培養(yǎng)基者為肉湯稀釋法。藥敏試驗-稀釋法32細菌藥敏試驗及其耐藥表型檢測5/9/2024肉湯稀釋法試驗方法取無菌試管26支，排成兩排。另取三支試管，分別作為肉湯對照管、待檢菌生長對照管和質(zhì)控菌生長對照管。每管加入無菌MH肉湯2ml，在第一管加入經(jīng)MH肉湯稀釋的藥物原液（256mg∕L）2ml混勻，然后吸取2ml至第二管，混勻后再吸取2ml至第三管。如此連續(xù)對倍稀釋至第13管，并從第13管中吸取2ml棄去。此時各管含藥濃度依次為128、64、32、16、8、4、2、1、0.5、0.25、0.125、0.0625、0.03125mg∕L。第1排試管每管加入待檢菌菌液（1×107CFU∕ml）0.1ml，第2排試管每管加入標準菌菌液（1×107CFU∕ml）0.1ml，最終接種量約為（5×105CFU∕ml）.置35℃培養(yǎng)箱中孵育18～24h，觀察有無細菌生長33細菌藥敏試驗及其耐藥表型檢測5/9/2024肉湯稀釋法結(jié)果判斷藥物最低濃度管無細菌生長者（對照管細菌生長良好），即為待檢菌的最低抑菌濃度（MIC）。34細菌藥敏試驗及其耐藥表型檢測5/9/2024肉湯稀釋法調(diào)節(jié)離子濃度的MH肉湯宏量肉湯法（2ml,13x100mm） 微量肉湯法（0.1ml,微量板）自動化儀器優(yōu)點：準確，可靠，可用于研究。缺點：勞動強度大細菌生長情況不可查35細菌藥敏試驗及其耐藥表型檢測5/9/2024瓊脂稀釋法

濃度16 32 64128256ug/ml制備含對倍抗生素濃度梯度的平板，制備菌懸液，點種菌，104/每個點，孵育，判讀結(jié)果36細菌藥敏試驗及其耐藥表型檢測5/9/2024瓊脂稀釋法優(yōu)點：金標準精確可靠可同時測定多株菌（40株）細菌生長情況可查缺點：測多個藥時勞動強度大制備平皿費時費力37細菌藥敏試驗及其耐藥表型檢測5/9/2024抗生素連續(xù)梯度法（E-test法）基本原理該方法結(jié)合擴散法和稀釋法的原理和特點，操作簡便如擴散法，但可以與稀釋法一樣直接定量測出藥物對待檢菌的MIC。其試條為商品化塑料試條，長50mm，寬5mm，內(nèi)含干化、穩(wěn)定、濃度由高至低呈指數(shù)梯度分布的某種抗菌藥物。可用于各種常見菌、苛養(yǎng)菌、分枝桿菌、厭氧菌和真菌等的藥敏試驗。試驗方法菌液、平板涂布接種等同紙片瓊脂擴散法（厭氧菌、隱球菌和真菌菌懸液濃度為1個麥氏單位，其他細菌為0.5個麥氏單位），將E試條放在細菌接種、干燥后的瓊脂平板上，（90mm平板放置1～2條），經(jīng)一定條件孵育：厭氧菌置厭氧環(huán)境孵育48h，苛養(yǎng)菌置5%～10%二氧化碳環(huán)境孵育24～48h，隱球菌孵育48～72h，其他細菌孵育18～24h。38細菌藥敏試驗及其耐藥表型檢測5/9/2024E-test法結(jié)果判斷孵育后圍繞著試條可形成一個卵圓形抑菌圈，抑菌圈與試條的橫向相交處的讀數(shù)刻度，即為該抗菌藥物對待檢菌的MIC。39細菌藥敏試驗及其耐藥表型檢測5/9/2024E-test法優(yōu)點連續(xù)濃度梯度，與瓊脂稀釋法相關(guān)性好影響因素少，穩(wěn)定性高操作簡單，省時缺點：成本高用途：快生長菌，苛養(yǎng)菌，厭氧菌，酵母菌，分枝桿菌40細菌藥敏試驗及其耐藥表型檢測5/9/2024細菌耐藥機制

細菌耐藥機制主要有四種：產(chǎn)生一種或多種水解酶、鈍化酶和修飾酶；抗生素作用的靶位改變，包括青霉素結(jié)合蛋白位點、DNA解旋酶、DNA拓撲異構(gòu)酶Ⅳ的改變等；細菌膜的通透性下降，包括細菌生物被膜的形成和通道蛋白丟失；細菌主動外排系統(tǒng)的過度表達。在上述耐藥機制中，第一、二種耐藥機制具有專一性，第三、四種耐藥機制不具有專一性。41細菌藥敏試驗及其耐藥表型檢測5/9/202442細菌藥敏試驗及其耐藥表型檢測5/9/2024β-內(nèi)酰胺酶

β內(nèi)酰胺酶是一類水解青霉素、頭孢菌素類抗生素的滅活酶；該酶位于革蘭陽性球菌菌體外，革蘭陰性桿菌間質(zhì)中；檢測方法有微生物培養(yǎng)法、碘－淀粉法、頭孢硝噻吩紙片法。(M100-S24修訂：增加了顯色頭孢菌素法)其中頭孢硝噻吩紙片法因為簡單、方便、快速，應用于臨床檢測。43細菌藥敏試驗及其耐藥表型檢測5/9/2024β-內(nèi)酰胺酶篩選試驗M100-S24新增：SAUATCC29213作為補充性質(zhì)控菌株，用于青霉素抑菌圈邊緣試驗。44細菌藥敏試驗及其耐藥表型檢測5/9/2024超廣譜β-內(nèi)酰胺酶（ESBLs）ESBLs是指由質(zhì)粒介導的能水解青霉素類、頭孢菌素類和單環(huán)

內(nèi)酰胺類氨曲南的一類酶；ESBLs不能水解頭霉素類和碳青霉烯類藥物，能被克拉維酸、舒巴坦和他唑巴坦等

內(nèi)酰胺酶抑制劑所抑制；ESBLs主要見于大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌，此外也見于腸桿菌屬、枸櫞酸桿菌屬、變形桿菌屬、沙雷菌屬等其他腸桿菌科細菌、不動桿菌、銅綠假單胞菌。45細菌藥敏試驗及其耐藥表型檢測5/9/2024超廣譜β-內(nèi)酰胺酶（ESBLs）紙片法，出現(xiàn)以下一種情況即可懷疑該菌株產(chǎn)生ESBL（篩選陽性）：頭孢泊肟≤17mm頭孢他啶≤22mm頭孢噻肟≤27mm頭孢曲松≤25mm氨曲南≤27mm46細菌藥敏試驗及其耐藥表型檢測5/9/2024超廣譜β-內(nèi)酰胺酶（ESBLs）紙片法（表型確認試驗）頭孢他啶和頭孢他啶/克拉維酸、頭孢噻肟和頭孢噻肟/克拉維酸。任一復方制劑的抑菌圈直徑與相應單藥抑菌圈直徑相差≥5mm時，即可判斷該菌產(chǎn)ESBL。47細菌藥敏試驗及其耐藥表型檢測5/9/2024超廣譜β-內(nèi)酰胺酶（ESBLs）稀釋法，出現(xiàn)以下一種情況即可懷疑該菌株產(chǎn)生ESBL：頭孢他啶或頭孢噻肟或頭孢曲松或氨曲南MIC≥2mg/ml或頭孢泊肟MIC≥8mg/ml48細菌藥敏試驗及其耐藥表型檢測5/9/2024超廣譜β-內(nèi)酰胺酶（ESBLs）稀釋法（表型確認試驗）頭孢他啶和頭孢他啶/克拉維酸、頭孢噻肟和頭孢噻肟/克拉維酸。任何一組酶抑制劑復方制劑的MIC值比相應單藥的MIC降低3個稀釋度者即可判定該菌為產(chǎn)ESBL菌株。

49細菌藥敏試驗及其耐藥表型檢測5/9/2024AmpC酶的特征AmpC酶是在革蘭陰性菌中發(fā)現(xiàn)的由染色體或質(zhì)粒介導的水解頭孢菌素的Ⅰ型β內(nèi)酰胺酶，可分為誘導酶和非誘導酶。與ESBLs不同的是，AmpC酶對三代頭孢菌素耐藥但對四代頭孢菌素敏感且不被酶抑制劑克拉維酸所抑制，但其酶活性可被氯唑西林和硼酸抑制。50細菌藥敏試驗及其耐藥表型檢測5/9/2024AmpC酶的檢測方法頭孢西丁三維試驗是檢測AmpC酶的經(jīng)典方法；除此之外，還有以硼酸化合物為抑制劑檢測肺炎克雷伯菌和大腸埃希菌的AmpC酶、AmpCDisk、頭孢西丁瓊脂基礎法等。51細菌藥敏試驗及其耐藥表型檢測5/9/2024碳青霉烯酶碳青霉烯酶可以定義為具有水解碳青霉烯類抗生素活性的β-內(nèi)酰胺酶，主要分布于β-內(nèi)酰胺酶A、B、D類中。根據(jù)水解機制中作用位點的不同可以將碳青霉烯酶分為兩大類：一類稱為金屬碳青霉烯酶，這類酶以金屬鋅離子為活性作用位點，可以被EDTA抑制，屬于B類β-內(nèi)酰胺酶；另一類以絲氨酸（Ser）為酶的活性作用位點，可以被酶抑制劑克拉維酸和他唑巴坦所抑制，屬于A、D類β-內(nèi)酰胺酶。52細菌藥敏試驗及其耐藥表型檢測5/9/2024碳青霉烯酶表型檢測方法-改良hodge試驗ATCC25922，0.5麥氏，1:10稀釋涂MH平板平皿中心貼10μg

厄他培南或美羅培南紙片10μl環(huán)挑取待檢菌從平板中心紙片邊緣向平板邊緣劃線待檢菌菌株與大腸埃希菌ATCC25922抑菌環(huán)交匯處大腸埃希菌生長增強，即產(chǎn)碳青霉烯酶。53細菌藥敏試驗及其耐藥表型檢測5/9/2024耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）攜帶SCCmec基因盒。SCCmec基因盒中的MecA基因編碼修飾的青霉素結(jié)合蛋白PBP2a，這種蛋白對甲氧西林和其他的β-內(nèi)酰胺類抗生素親和力下降，從而導致對這些抗生素的耐藥。耐甲氧西林葡萄球菌耐藥機制54細菌藥敏試驗及其耐藥表型檢測5/9/2024耐甲氧西林葡萄球菌的檢測MRSA的檢測方法有頭孢西丁紙片擴散法、苯唑西林瓊脂稀釋法、乳膠凝膠試驗檢測PBP2a、mecA基因測定及MRSA顯色培養(yǎng)基。頭孢西丁紙片法、苯唑西林瓊脂稀釋法是目前檢測耐甲氧西林葡萄球菌最常用篩選方法。55細菌藥敏試驗及其耐藥表型檢測5/9/2024克林霉素誘導耐藥葡萄球菌紅霉素或其他大環(huán)內(nèi)酯類耐藥的金葡菌或凝固酶陰性葡萄球菌可對克林霉素結(jié)構(gòu)性或誘導性耐藥或僅對紅霉素耐藥。56細菌藥敏試驗及其耐藥表型檢測5/9/2024機制耐藥基因紅霉素克林霉素核糖體修飾-藥物不能結(jié)合于靶位ermRS*RR結(jié)構(gòu)性泵-藥物被泵出msrARSerm =erythromycinribosomemethylasemsrA =macrolidestreptograminresistance*需要誘導來顯示耐藥性

紅霉素/克林霉素耐藥葡萄球菌耐藥機制57細菌藥敏試驗及其耐藥表型檢測5/9/2024誘導性克林霉素耐藥（erm介導）葡萄球菌-“D試驗”患者不會對克林霉素有反應-報告克林霉素耐藥無克林霉素誘導（msrA介導）真的克林霉素敏感-報告克林霉素敏感“D”陽性陰性15～26mm58細菌藥敏試驗及其耐藥表型檢測5/9/2024葡萄球菌誘導性克林霉素耐藥的MIC檢測方法4.0 μg/ml紅霉素0.5 μg/ml克林霉素Nogrowth=無誘導性克林霉素敏感生長=誘導性克林霉素耐藥59細菌藥敏試驗及其耐藥表型檢測5/9/2024萬古霉素中介耐藥的金黃色葡萄球菌（VISA）耐藥是由于：增厚的細胞壁檢測困難；表型不穩(wěn)定菌落形態(tài)不典型金葡菌萬古霉素敏感萬古霉素中介細胞壁60細菌藥敏試驗及其耐藥表型檢測5/9/2024MRSA(notVISA)VISA血瓊脂上48小時生長61細菌藥敏試驗及其耐藥表型檢測5/9/2024當有以下一個或多個情況時菌株可疑為VISA

-內(nèi)酰胺類藥物的MIC降低達托霉素MIC升高菌落形態(tài)不典型（一些為微小菌落）肉湯中生長遲緩（如血培養(yǎng)）凝固酶反應微弱/延遲經(jīng)過幾次次代培養(yǎng)后：菌落回復為典型形態(tài)萬古霉素MIC降低并且菌株變?yōu)槿f古霉素敏感62細菌藥敏試驗及其耐藥表型檢測5/9/2024萬古霉素耐藥的金黃色葡萄球菌（VRSA）耐藥是由于從萬古霉素耐藥腸球菌（VRE）中獲得vanA基因美國報道例數(shù)9個患者檢測