《生物化學(xué)》實驗基本知識與操作-趙春澎

生物化學(xué)實驗課座次安排：

（30人）座次安排：

（31人）座次安排：

（32人）座次安排：

（33人）座次安排：

（34人）座次安排：

（35人）座次安排：

（36人）前言一、生物化學(xué)實驗課的重要性二、實驗室守則1.整齊著裝、注意安全、尊師守紀；2.細心聽講、詳實記錄、按時作業(yè)；3.積極參與、規(guī)范操作、愛護儀器；4.有序值日、完成報告、批準離開。理論成績占70分,實驗成績占30分

（臨床專業(yè)討論課10分）三、實驗考試出勤、實驗室綜合表現(xiàn)、報告書寫10分實驗理論考試10分實驗操作考試10分四、實驗報告的書寫

實驗X實驗名稱【實驗?zāi)康摹俊緦嶒炘怼俊緦嶒灢襟E】【實驗結(jié)果】【結(jié)論分析】

（完成實驗后隔日交實驗報告，每組一份）生物化學(xué)實驗基本知識與操作一、目的：1.掌握常用玻璃儀器洗滌及干燥方法。2.熟悉幾種常用的液體混勻方法。3.掌握刻度吸量管及加樣槍的使用。4.掌握離心技術(shù)原理及掌握離心機的使用。5.掌握分光光度技術(shù)原理及722型分光光度計的使用。

玻璃儀器清洗程序一般玻璃儀器

毛刷刷洗容量分析玻璃儀器自來水沖洗蒸餾水沖洗

2-3次

自來水沖洗

2-3次洗液浸泡（12-24h）二、內(nèi)容（一）常用玻璃儀器的清洗與干燥（P9-10）標準：倒置顯示內(nèi)壁，既無成滴水珠，也不成股流下。

pH示中性。玻璃儀器的干燥：①自然干燥：將洗凈的玻璃儀器倒置在架子上使水瀝凈，

室溫下干燥；②加熱干燥:

容量儀器不可高溫干燥；

精密分析量器如需即用，只能在60℃以下干燥；其他一般在105℃-120℃烘箱中干燥。（二）液體的混勻（P10-11）1.旋轉(zhuǎn)混勻法試劑量小，反應(yīng)時間短，小口徑容器2.彈動混勻法適用于試管內(nèi)液體的混勻；3.倒轉(zhuǎn)混勻法適合具塞的容器，如容量瓶，磨口瓶；4.滴管混勻法用滴管將溶液反復(fù)吹打數(shù)次；5.玻棒攪拌混勻法大口徑或大容量的容器。（三）液體的量取1.

移液管2.

刻度吸量管3.

固定式微量吸量管（胖肚吸管）刻度吸量管的分類：兩種分類方法

規(guī)格（量取范圍）

用法（尖端殘液）分為0.1、0.2、0.5、1、2、5、10ml。分為完全流出式與不完全流出式?！按怠?.

刻度吸量管刻度吸量管的使用方法：拿法：選取：取液：調(diào)刻度：放液：清洗：“靠近原則”“三點一線”食指堵塞上端開口，垂直地面插入液面下1~2cm管壁始終與地面垂直最后以蒸餾水潤洗2~3次2.

刻度吸量管刻度吸量管使用中的注意事項：拿法：選取：取液：調(diào)刻度：放液：清洗：要求一次量取待測液體需要多少試劑，在管內(nèi)留下多少不允許以拇指堵塞上端開口插入液面下1~2cm即可禁止用嘴吹吸量管禁止甩吸量管2.

刻度吸量管刻度吸量管的使用：

“拿、選、取、調(diào)、放、洗”固定式微量吸量管的用途：一種量器，精確的試劑量取和轉(zhuǎn)移。3.固定式微量吸量管

又稱為加樣槍固定式微量吸量管的輔助設(shè)施：吸頭與吸頭盒3.固定式微量吸量管固定式微量吸量管的設(shè)計原理：柱塞定程運動的負壓原理密閉管腔吸頭移動活塞3.固定式微量吸量管固定式微量吸量管的分類：不同分類方法

規(guī)格（量取數(shù)值）

用法（量取數(shù)量）分為1、2、10、20、250、500、1000ul等。分為單槍與排槍等。3.固定式微量吸量管固定式微量吸量管的使用方法：“輕取重放”取樣時：放液時：在第一次阻力處停止在第二次阻力處停止3.固定式微量吸量管固定式微量吸量管的注意事項：精密儀器，輕取輕用就近原則，準確量取取液慢，防污染進展快，多思考輕：準：慢：變：3.固定式微量吸量管生活中的離心技術(shù)：（四）離心技術(shù)（P78）離心技術(shù)的概念：根據(jù)不同物質(zhì)顆粒的沉降系數(shù)、密度不同，在同一轉(zhuǎn)速、同一部位受到的離心力不同而出現(xiàn)不同的沉降速度，從而達到濃縮、分離、純化目的的一種實驗技術(shù)。（四）離心技術(shù)離心技術(shù)的原理：①根據(jù)力學(xué)的基本原理

勻速圓周運動時物體受到的離心力:F=ρvrω2

F：物質(zhì)作勻速圓周運動時受的離心力

ρ：被分離物質(zhì)的密度v：物質(zhì)的體積r：離心半徑ω:離心角速度（四）離心技術(shù)離心技術(shù)的原理：由此可見：

在同一離心機中，同一轉(zhuǎn)速下，離心半徑和角速度平方的乘積是固定值，做勻速圓周運動的顆粒所受的離心力大小與顆粒密度相關(guān)。（四）離心技術(shù)離心技術(shù)的原理：②

沉降速度:離心時，在一定條件下顆粒在介質(zhì)中受力平衡，勻速運動，經(jīng)計算得：沉降速度V=D2×（ρ顆-ρ介）×rω2/18ηD:顆粒直徑η:介質(zhì)的粘度（四）離心技術(shù)離心技術(shù)的原理：②

沉降速度:介質(zhì)與顆粒的密度差決定著顆粒運動的方向、沉降速度。若ρ顆>ρ介，顆粒下沉若ρ顆=ρ介，顆粒懸浮若ρ顆<ρ介，顆粒上浮

（四）離心技術(shù)離心技術(shù)的常用分類：不同分類方法

速度目的制備性離心：如差速離心和密度梯度離心分析性離心普通離心（6000r/min以下）高速離心（20000~25000r/min）超速離心（50000~80000r/min）（四）離心技術(shù)離心技術(shù)的科研應(yīng)用：樣品的分離純化和制備；生物大分子分子量的測定；生物大分子純度的計算評估；生物大分子構(gòu)象的分析等。（四）離心技術(shù)檢查→配平→放置→離心→結(jié)束→收整注意：配平時，套管中加液體，

單管離心設(shè)配平管；放置時，對稱放置；離心時，取出多余套管，離心中勿開蓋；收整時，停轉(zhuǎn)后開蓋，速度旋鈕歸零。離心機的使用：離心機的使用：①檢查：儀器放置是否平整，是否有異常。②配平：離心管必須要兩兩配平③放置：等質(zhì)量的試管必須對稱放置

停轉(zhuǎn)后打開蓋速度旋鈕歸零三、注意事項1.容量分析玻璃儀器的清洗方法2.刻度吸量管的握持方法3.加樣槍的握持方法4.離心機的使用方法參考教材：學(xué)習(xí)資料：學(xué)習(xí)網(wǎng)站：生物化學(xué)微課：/course/201084535.html開工！（五）光譜光度分析技術(shù)（P16）1.概念：光譜光度分析技術(shù)是根據(jù)物質(zhì)具有吸收或發(fā)射輻射能的性質(zhì)，通過測量物質(zhì)所產(chǎn)生的發(fā)射光、吸收光或散射光的波長和強度而建立起來的一種分析方法。優(yōu)點：靈敏度高，測定簡便，快速等優(yōu)點，

是最為常用的一種生化檢測技術(shù)。2.比色法與分光光度法有色溶液的顏色深淺，與溶質(zhì)濃度有關(guān)：

顏色越深，濃度越高；顏色越淺，濃度越低。比色法：利用比較溶液顏色的深淺來測知溶液中所含有色物質(zhì)濃度的方法。分光光度法與比色法相似，只是要求入射光更接近于單色光。3.

基本原理(1)有色溶液與光吸收的關(guān)系

光是一種電磁波。

人的視覺所能感覺到的光稱為可見光，波長范圍在400～760nm；

我們?nèi)说难劬Ω杏X不到的還有紅外光（波長大于760nm）、紫外光（波長小于400nm）、X射線等。(2)光的吸收定律――Lambert－Beer定律當一束平行的單色光通過均勻、無散射現(xiàn)象的溶液時，入射光與出射光強度如何變化。溶液的濃度愈大，則光被吸收得愈多。

通過的液層厚度愈大，則光被吸收得愈多。Ａ：吸光度：可以作為衡量光被吸收程度的一個物理量，吸光度越大，說明被溶液所吸收的光越多。Ｃ：物質(zhì)的濃度Ｌ：液層厚度。Ｋ：是指吸光系數(shù)，是一個比例常數(shù)。在一定條件下，吸光系數(shù)是物質(zhì)的特性常數(shù)之一，它與光的強度，溶液濃度，液層厚度都無關(guān)，只與入射光的波長和物質(zhì)性質(zhì)有關(guān)。Lambert－Beer定律：A=KCL4.待測溶液濃度的計算：(1)標準管法在同樣的實驗條件下同時測定標準溶液與待測溶液的吸光度值。標準溶液---就是用待測濃度的那種物質(zhì)，配成已知的濃度。根據(jù)朗伯-比爾定律公式標準溶液：A標=KC標L標待測溶液：A測=KC測L測兩式相比A標/A測=C標/C測C測=A測C標/A標(2)標準曲線法①先取與被測物質(zhì)含有相同組分的標準品，配成一系列濃度不同的標準溶液。

然后分別測其吸光度。③作圖：以溶液濃度C為橫坐標，以相應(yīng)的吸光度A為縱坐標，繪制曲線圖。CuSO4溶液標準曲線繪制范例：CuSO4溶液標準曲線C(g/L)A管號123456CuSO4原液（mL）012345蒸餾水（mL）543210濃度值（g/L）01020304050吸光度（A）CuSO4溶液標準曲線繪制下午的實驗操作：？空白管5.分光光度計結(jié)構(gòu)與用法光源：

提供工作所需的所有波長的光。單色器：單色器的作用是從波長范圍較寬的光線中，

分出單色光的一個裝置。吸收池：放置比色皿，是盛樣品或標準液的容器。石英比色皿(波長≤350nm)，玻璃比色皿(波長≥350nm)檢測器：對光強度進行測量，并以電信號的形式表示，

這種光電轉(zhuǎn)化設(shè)備就被成為檢測器。顯示器：是將檢測器獲得的電信號放大，

并能將待測結(jié)果的數(shù)據(jù)顯示出來的裝置。722G型分光光度計：722G分光儀的操作：開機→預(yù)熱→配置試劑→設(shè)置波長

→校正儀器（調(diào)節(jié)“０%”和“100%”）

→測定→收整注意：調(diào)節(jié)“０%”和“100%”的方法和順序；比色皿的使用方法。開工！實驗結(jié)果匯總（2018.09.03）：組號A2A3A4A5A6123456789101112實驗結(jié)果匯總（2018.0