(公開(kāi)課)微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)(人教版選修1)

課題1微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)專題2微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用1.提供營(yíng)養(yǎng)和條件2.防止污染一.培養(yǎng)基：微生物生存的環(huán)境和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)1.根本成分：思考：微生物“吃”什么？碳源、氮源、水、無(wú)機(jī)鹽⑴碳源無(wú)機(jī)碳源：有機(jī)碳源：CO2、CO32-、HCO3-牛肉膏、蛋白胨等自養(yǎng)微生物異養(yǎng)微生物⑵氮源無(wú)機(jī)氮源：有機(jī)氮源：NH4＋、NO3-牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等注：含C、H、O、N的有機(jī)物是異養(yǎng)型微生物的：碳源、氮源、能源。一.培養(yǎng)基：微生物生存的環(huán)境和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)2.特殊營(yíng)養(yǎng)：維生素〔如乳酸桿菌〕、堿基等〔牛肉膏、酵母膏、蛋白胨中含有〕3.pH、氧氣的需求：霉菌〔pH調(diào)至酸性〕細(xì)菌〔pH調(diào)至中性或微堿性〕厭氧生物需提供無(wú)氧條件。一.培養(yǎng)基：微生物生存的環(huán)境和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)4.培養(yǎng)基種類固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基有無(wú)凝固劑瓊脂別離鑒定工業(yè)生產(chǎn)化學(xué)成分：物理性質(zhì)：天然培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基考點(diǎn)1、微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)一、培養(yǎng)基的分類

選擇培養(yǎng)基的應(yīng)用參加青霉素的培養(yǎng)基——?jiǎng)e離酵母菌、霉菌等真菌參加高濃度食鹽的培養(yǎng)基——?jiǎng)e離金黃色葡萄球菌不加氮源的無(wú)氮培養(yǎng)基——?jiǎng)e離固氮菌不加含碳有機(jī)物的無(wú)碳培養(yǎng)基——?jiǎng)e離自養(yǎng)型微生物伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基——鑒別大腸桿菌問(wèn)題討論假設(shè)硝化細(xì)菌、圓褐固氮菌、不固氮的藍(lán)藻混合在一起，我們配置什么樣的培養(yǎng)即可以將三種微生物別離？碳源氮源能源硝化細(xì)菌CO2氨氨圓褐固氮菌糖類等含碳有機(jī)物N2有機(jī)物不固氮的藍(lán)藻CO2銨鹽、硝酸鹽光不同的微生物往往需要采用不同的培養(yǎng)基配方調(diào)節(jié)pH2、成分水、碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽、生長(zhǎng)因子(生長(zhǎng)因子即細(xì)菌生長(zhǎng)必需，而自身不能合成的化合物,如維生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶)真菌：5～6細(xì)菌：6.5～

7.5有時(shí)會(huì)加一定量的氯化鈉以維持一定的滲透壓5.配制原那么⑴目的明確：⑵營(yíng)養(yǎng)全面、濃度適宜、比例恰當(dāng)⑶適宜的pH值：有機(jī)碳源異養(yǎng)型：根據(jù)微生物的種類、培養(yǎng)目的選擇原料自養(yǎng)型：不加碳源參加緩沖劑細(xì)菌偏堿，真菌偏酸〔CO2碳源〕生產(chǎn)科研2.無(wú)菌范圍：實(shí)驗(yàn)操作空間消毒操作者的手、衣著消毒實(shí)驗(yàn)用具滅菌實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程二.無(wú)菌技術(shù)：防止外來(lái)雜菌的污染1.消毒與滅菌：酒精燈旁操作超凈工作臺(tái)比較消毒與滅菌(原理相同〕比較項(xiàng)理化因素的作用強(qiáng)度消滅微生物的數(shù)量芽孢和孢子能否被消滅消毒滅菌較為溫和局部生活狀態(tài)的微生物不能能全部微生物強(qiáng)烈高壓蒸汽滅菌〔濕熱滅菌〕灑精燈灼燒滅菌干熱滅菌〔1〕滅菌方法：3、常用的滅菌和消毒的方法培養(yǎng)基、無(wú)菌水、各種耐高溫的玻璃金屬器具100kPa、121℃下維持15-30min需要保持枯燥耐高溫的玻璃金屬器皿160-170℃下加熱1-2h接種環(huán)等金屬器具1、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min2、巴氏消毒法：70-75℃下煮30min或80℃下煮15min3、化學(xué)藥劑消毒法:用75%酒精、新潔爾滅等進(jìn)行皮膚消毒;氯氣消毒水源4、紫外線消毒……(2)消毒的方法：3.常用的消毒與滅菌的方法請(qǐng)你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。如果需要，請(qǐng)選擇適宜的方法。〔1〕培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿〔2〕玻棒、試管、燒瓶和吸管〔3〕實(shí)驗(yàn)操作者的雙手思考單個(gè)或少數(shù)菌體2.特征：大小、形狀、光澤度、顏色、透明度等。3.功能：1.定義：三.菌落鑒定菌種的重要依據(jù)固體培養(yǎng)基上大量繁殖子細(xì)胞群體1000ml牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配方H2O定容至1000mlNaCl5g蛋白胨10g牛肉膏5g瓊脂20.0g四.大腸桿菌的純化培養(yǎng)：㈠制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基1.計(jì)算：培養(yǎng)基用量2.稱量：3.溶化：牛肉膏黏稠，用稱量紙稱取牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加蓋牛肉膏、稱量紙、少量水加熱溶解→取紙→蛋白胨、NaCl→瓊脂→補(bǔ)水定容4.調(diào)pH、分裝、封口：5.滅菌：6.倒平板：培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿分散成單個(gè)細(xì)胞,形成單個(gè)菌落7．無(wú)菌檢查：將滅菌的培養(yǎng)基放入37℃的溫室中培養(yǎng)24—48小時(shí)，以檢查滅菌是否徹底。1.培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50℃左右時(shí)，才能用來(lái)倒平板。你用什么方法來(lái)估計(jì)培養(yǎng)基的溫度？問(wèn)題討論答：可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺(jué)錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時(shí)，就可以進(jìn)行倒平板了。2.為什么需要使錐形瓶的瓶口通過(guò)火焰？答：通過(guò)灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。3.平板冷凝后，為什么要將平板倒置？4.在倒平板的過(guò)程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個(gè)平板還能用來(lái)培養(yǎng)微生物嗎？為什么？答：平板冷凝后，皿蓋上會(huì)凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基外表的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基外表的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。答：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個(gè)平板培養(yǎng)微生物。⑴平板劃線法：二.大腸桿菌的純化培養(yǎng)：㈠制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基㈡純化大腸桿菌：1.接種：⑵稀釋涂布平板法：2.培養(yǎng)：將接種后的培養(yǎng)基和一個(gè)未接種的培養(yǎng)基放入37℃恒溫箱中培養(yǎng)12h～24h后，觀察并記錄形成單個(gè)菌落分散成單個(gè)細(xì)胞,〔三〕平板劃線別離法主要器具：操作過(guò)程：注意：無(wú)菌操作方法：同前。將培養(yǎng)皿______〔蓋在下〕，放于_____℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)__________小時(shí)。在作第二次以及其后的劃線操作時(shí)，要從上一次劃線的開(kāi)始________劃線。接種環(huán)、思考：假設(shè)如上圖所示進(jìn)行劃線別離，那么接種環(huán)總共進(jìn)行幾次灼燒滅菌？恒溫培養(yǎng)箱。每次劃線前接種環(huán)都要灼燒滅菌，再冷卻。末端１２～２４倒置３７

1.為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了防止接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時(shí)，接種環(huán)上的菌種直接來(lái)源于上次劃線的末端，從而通過(guò)劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時(shí)菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到單個(gè)菌落。2、在劃線操作結(jié)束時(shí)，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留的菌種，防止細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。3.在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線？以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。4.在作第二次以及其后的劃線操作時(shí)，為什么總是從上一次劃線的末端開(kāi)始劃線？劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開(kāi)始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來(lái)的菌落。5、如何判斷接種操作是否符合無(wú)菌要求？如果培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落的顏色、形狀、大小根本一致，并符合大腸桿菌菌落的特點(diǎn)，那么說(shuō)明接種操作是符合要求的；如果培養(yǎng)基上出現(xiàn)了其他菌落，那么說(shuō)明接種過(guò)程中，無(wú)菌操作還未到達(dá)要求?！菜摹诚♂屚坎计桨宸ㄖ饕骶撸翰Ａ枪蔚丁⒁埔汗芑蛭懿僮鬟^(guò)程：先將培養(yǎng)菌液稀釋〔10-5~10-7倍〕用移液管或吸管取0.1ml稀釋度不同的菌液，加在平板上，用無(wú)菌玻璃三角刮刀均勻涂布在培養(yǎng)基平面上。在適當(dāng)稀釋度下，可培養(yǎng)得到相互分開(kāi)的的菌落。將培養(yǎng)皿倒置〔蓋在下〕，放于３７℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)１２～２４小時(shí)。劃線別離方法簡(jiǎn)單；涂布別離，易形成單菌落，且可計(jì)數(shù)，但操作復(fù)雜些。6支試管，分別加入9ml無(wú)菌水1ml1011ml1021ml1031ml1041ml1051ml106⑵稀釋涂布平板法：a.梯度稀釋菌液：菌液微量移液器⑵稀釋涂布平板法：a.梯度稀釋菌液：b.涂布平板：不超過(guò)0.1ml各梯度分別涂布3個(gè)平板1個(gè)不涂布作空白對(duì)照滴灼試涂稀釋103倍稀釋104倍稀釋105倍10g土樣從土壤中別離微生物稀釋涂布法三.菌種的保藏：1.臨時(shí)保藏：試管固體斜面培養(yǎng)基上4℃2.長(zhǎng)期保存：菌種易被污染、變異甘油管藏1ml甘油＋1ml菌液－20℃思考：菌種保存為何采用斜面而不是平板？試管斜面培養(yǎng)基密閉效果比平面的好很多,不容易進(jìn)入雜菌，同時(shí)能用來(lái)做純細(xì)菌的長(zhǎng)期保存。