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細(xì)菌的實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)一、病料的采集、保存及運(yùn)送(一)采集病料的原則無(wú)菌、適時(shí)、含病原多部位、適量(二)采集病料的方法液體材料的采集方法實(shí)質(zhì)臟器的采集方法腸道及其內(nèi)容物的采集方法皮膚及羽毛的采集方法胎兒(三)病料的保存與運(yùn)送低溫。有冰的保溫瓶或4-10℃冰箱滅菌液體石蠟或30%甘油鹽水緩沖保存液二、細(xì)菌的形態(tài)檢查直接采集病料做細(xì)菌涂片分離培養(yǎng)后做細(xì)菌涂片三、細(xì)菌的分離培養(yǎng)分離出目的病原菌培養(yǎng)基的選擇菌落形態(tài)的觀察涂片四、細(xì)菌的生化試驗(yàn)指示劑PH敏感范圍顏色變化酚紅(P.R)6.8-8.4黃紅溴麝香草酚蘭(B.T.B)6.0-7.4黃蘭甲基紅(M.R)4.4-6.4紅黃溴酚蘭(B.P.B)3.0-4.6黃蘭中性紅(N.R)6.8-8.0紅黃細(xì)菌學(xué)中常用的幾種酸堿指示劑⊕+--+1、糖分解試驗(yàn)Eg:E.coli能發(fā)酵乳糖和葡萄糖,而沙門(mén)氏菌、傷寒桿菌只能發(fā)酵葡萄糖。糖類(lèi)
丙酮酸酶(E.coli)
CO2和H2O
(產(chǎn)酸產(chǎn)氣)⊕:產(chǎn)酸產(chǎn)氣+:產(chǎn)酸不產(chǎn)氣
-:不產(chǎn)酸不產(chǎn)氣①糖發(fā)酵試驗(yàn)⊕+--+GE.coli
丙酮酸(pH≤4.5)(+)(紅色)G產(chǎn)氣桿菌
2丙酮酸
1乙酰甲基甲醇(pH>5.4(-)(桔黃色)②甲基紅試驗(yàn)(M.R.)+-G產(chǎn)氣桿菌
丙酮酸
乙酰甲基甲醇+O2
二乙酰+胍基化合物
紅色化合物
VP(+)
E.coli不生成乙酰甲基甲醇,故Vp(-)③VP試驗(yàn):
(Voges和Proskauer)-+
產(chǎn)氣桿菌分解枸櫞酸鹽(唯一碳源)生成碳酸鹽,并分解培養(yǎng)基中的銨鹽生成NH3,使培養(yǎng)基由酸性變?yōu)閴A性,使培養(yǎng)基中的B.T.B.由淡綠色轉(zhuǎn)為深藍(lán)色,稱為“+”。④枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)+-大腸桿菌產(chǎn)氣桿菌
有些細(xì)菌(E.coli)能分解色氨酸生成吲哚,再與二甲基氨基苯甲醛結(jié)合,生成玫瑰吲哚(紅色),“+”。⑤吲哚試驗(yàn)(Indoletest)Indoletest(吲哚實(shí)驗(yàn))MRtest(甲基紅實(shí)驗(yàn))VPtest(Vi)citrateutilizationtest(枸櫞酸實(shí)驗(yàn))IMViC試驗(yàn)--鑒定腸道桿菌IMViC試驗(yàn)大腸桿菌
++--
產(chǎn)氣桿菌
--++有些細(xì)菌(變形桿菌)能分解含硫氨基酸,生成H2S,若與醋酸鉛或硫酸亞鐵反應(yīng),則生成硫化鉛或硫化亞鐵(黑色)。⑥硫化氫試驗(yàn)變形桿菌能分解尿素(尿素酶)產(chǎn)氨,使培養(yǎng)基堿性增加(酚紅由黃色變?yōu)榧t色),“+”。而沙門(mén)氏菌為陰性。左:+右:-⑦尿素酶/脲酶試驗(yàn)
氧化型細(xì)菌:必須有分子氧參加。發(fā)酵型細(xì)菌(兼性厭氧菌):可以進(jìn)行無(wú)氧降解,但在有氧或無(wú)氧環(huán)境中都能分解葡萄糖。
O/F試驗(yàn)一般多用葡萄糖進(jìn)行。產(chǎn)堿型細(xì)菌:不分解葡萄糖。利用此試驗(yàn)可區(qū)別細(xì)菌代謝類(lèi)型。⑧氧化—發(fā)酵試驗(yàn)(O/Ftest)⑧氧化—發(fā)酵試驗(yàn)(O/Ftest)高層斜面(0.1%葡萄糖、1%乳糖、1%蔗糖,酚紅)
⑨三糖鐵試驗(yàn)(TSItest)
反應(yīng)TSIAIK/A(斜面紅色/底黃色)僅發(fā)酵葡萄糖,利用蛋白胨A/A(黃/黃)發(fā)酵葡萄糖、乳糖+(或)蔗糖AIK/AIK(紅/紅)均不發(fā)酵
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