水產(chǎn)品中河豚毒素的快速檢測 膠體金免疫層析法

水產(chǎn)品中河豚毒素的快速檢測膠體金免疫層析法本文件規(guī)定了水產(chǎn)品中河豚毒素的膠體金免疫層析快速檢測方法。本文件適用于河豚魚、織紋螺、蝦等水產(chǎn)品中的河豚毒素成分的快速篩查。2規(guī)范性引用文件GB5009.206—2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)水產(chǎn)品中河豚毒素的測定》GB/T6682實驗室用水規(guī)格和試驗方法3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1檢測線testline即T線，用于判斷是否檢測到了特定抗原或抗體。3.2質(zhì)控線controlline即C線，用于驗證試劑的有效性。4原理本方法采用競爭抑制免疫層析原理。樣品中河豚毒素經(jīng)提取后與膠體金標(biāo)記的河豚毒檢測線顏色深淺的變化。通過檢測線與質(zhì)控5試劑與材料5.1試劑5.1.1乙酸（CH3COOH）。5.1.2對甲苯磺酸（TsOH）。5.2試劑配制2混合均勻。）：），溶于800mL水中，最后加水定容至1000mL。5.3標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)表1標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)信息英文名稱CAS登錄號分子式相對分子質(zhì)量河豚毒素Tetrodotoxin4368-28-9C11H17O8N35.4標(biāo)準(zhǔn)溶液配制5.4.2河豚毒素標(biāo)準(zhǔn)中間液（50μg/mL移取河豚毒素標(biāo)準(zhǔn)儲備液（5.3.1）500μL置于等應(yīng)在氫氧化鈉溶液(1mol/L)中浸泡1h以上,以使毒素分解。5.5空白試樣經(jīng)參比方法（GB5009.206—2016）檢測不含河豚毒素的水產(chǎn)品。5.6材料河豚毒素膠體金免疫層析試劑盒：一般包含膠體金試紙條、金標(biāo)微孔及6儀器與設(shè)備6.1天平：感量為0.1mg和0.01g。6.7膠體金讀數(shù)儀（可選）7分析步驟7.1試樣制備剪刀將魚體分解成肌肉、肝臟、皮膚和性腺(精巢或卵巢)等部分,各部分組織分別用水洗去并標(biāo)明標(biāo)記。7.2試樣提取緩沖液（5.2.3），渦旋混合30s，作為待測液。7.3試樣測定取100μL樣品待測液加入金標(biāo)微孔中，充分混勻后室溫孵育3min，隨后將微孔內(nèi)的所有溶液吸出，加到試紙條的樣品墊上，反應(yīng)5min后觀察結(jié)果。7.4質(zhì)量控制7.4.1每批樣品應(yīng)同時進(jìn)行空白試驗和質(zhì)控試驗。7.4.1.1空白試驗準(zhǔn)確吸取液體或稱取固體空白試樣，按照7.1、7.2和7.3步驟7.4.1.2質(zhì)控試驗使河豚毒素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)濃度為10μg/kg，按照7.1、7.2和7.3步驟與試樣同法操作。8性能指標(biāo)8.1性能指標(biāo)計算方法按照附錄A執(zhí)行。8.3靈敏度：≥99%。8.4假陰性率：≤1%。8.5假陽性率：≤3%。8.6特異性；≥97%。9結(jié)果判定通過對比C線和T線的顏色深淺進(jìn)行結(jié)果判定，目視判定示意圖見圖1或2。結(jié)果判定也可根據(jù)產(chǎn)品說明書進(jìn)行。圖1試紙條目視判定示意圖圖2檢測卡目視判定示意圖的測定》中第三法液相色譜-熒光檢測法進(jìn)行確證。5方法規(guī)定的各項性能指標(biāo)。快速檢測方法性能指標(biāo)