病毒的研究方法

病毒學的研究方法1可編輯ppt分離技術電子顯微鏡技術組織和細胞培養(yǎng)技術血清學方法分子生物學方法2可編輯ppt圖1.1混合物分離原料（混合物）殘余物分離設備分離劑產品進一步綜合利用一、分離技術3可編輯ppt機械分離傳質分離分類反應分離4可編輯ppt1、機械分離過濾分離：過濾介質固體顆粒大小沉降分離：重力作用密度差離心分離：離心力密度差旋風分離：慣性力密度差靜電除塵：靜電場使細顆粒帶電特點：相間無物質傳遞5可編輯ppt離心常用于病毒的純化6可編輯pptA:等速度沉降，B:等密度沉降7可編輯ppt2、傳質分離平衡分離過程：蒸發(fā)、蒸餾、吸收、萃取、結晶、離子交換、吸附、干燥、浸取、泡沫吸附等傳質分離速率控制分離過程：氣體擴散熱擴散電滲析電泳反滲透微濾、超濾和納濾8可編輯ppt3、反應分離可逆反應（如離子交換、反應萃取）；不可逆反應（反應吸收、反應結晶）；分解反應（生物分解、電化學反應、光化學反應）等。9可編輯ppt二、電子顯微鏡技術1932年Ruska發(fā)明了以電子束為光源的透射電子顯微鏡（TEM），電子束的波長要比可見光和紫外光短得多，并且電子束的波長與發(fā)射電子束的電壓平方根成反比，也就是說電壓越高波長越短。目前TEM的分辨力可達0.2nm。10可編輯ppt技術方法負染色法超薄切片技術免疫電鏡技術冷凍電鏡技術11可編輯ppt肌動蛋白纖維的負染電鏡照片用重金屬鹽（如磷鎢酸、醋酸雙氧鈾）對鋪展在載網上的樣品進行染色。1、負染色法12可編輯ppt通常以鋨酸和戊二醛固定樣品，以環(huán)氧樹脂包埋，以熱膨脹或螺旋推進的方式推進樣品切片，切片厚度20~50nm，切片采用重金屬鹽染色，以增大反差.萊卡超薄切片機2、超薄切片技術13可編輯ppt冰凍蝕刻,亦稱冰凍斷裂。標本置于-100?C的干冰或-196?C的液氮中，進行冰凍。然后用冷刀驟然將標本斷開，升溫后，冰在真空條件下迅即升華，暴露出斷面結構，稱為蝕刻。在電鏡下得到的影像即代表標本中細胞斷裂面處的結構.3、冰凍蝕刻14可編輯ppt人冠狀病毒（左）與SARS冠狀病毒病毒粒子三維重構模型電鏡觀察發(fā)現(xiàn)痘病毒是整個病毒粒子通過吞噬作用進入細胞的15可編輯ppt三、組織和細胞培養(yǎng)技術指從機體中取出組織或細胞，模擬機體內的生理條件在體外進行培養(yǎng)，使之生存和生長。16可編輯ppt1、組織培養(yǎng)的原理組織培養(yǎng)主要是為病毒易感的組織細胞提供一個良好的生存環(huán)境，使細胞對環(huán)境產生適應性，獲得生長繁殖的能力。17可編輯ppt群體培養(yǎng)（左）和克隆培養(yǎng)（右）群體培養(yǎng):將含有一定數(shù)量細胞的懸液置于培養(yǎng)瓶中，讓細胞貼壁生長，匯合后形成均勻的單細胞層。克隆培養(yǎng):將高度稀釋的游離細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，各個細胞貼壁后，彼此距離較遠，經過生長增殖每一個細胞形成一個細胞集落，稱為克隆。18可編輯ppt2、細胞培養(yǎng)技術原代和次代細胞培養(yǎng)：分離病毒最為敏感

二倍體細胞：用于病毒分離和疫苗制備

傳代細胞系：用于病毒的分離鑒定和抗病毒藥物篩選研究。病毒基因轉染細胞系：用于病毒基因調控和抗病毒藥物的研究。19可編輯ppt20可編輯ppt常用的細胞培養(yǎng)21可編輯ppt細胞病變效應（CPE）由病毒增殖引起的細胞改變，稱細胞病變效應。22可編輯ppt23可編輯ppt3、細胞培養(yǎng)的基本條件細胞接種數(shù)：接種傳代細胞一般為10—30萬/ml合成培養(yǎng)液：如Eagle氏液，RPMI1640，Eagle’sMEM。酸堿度：細胞生長最適宜的PH范圍是7.0–7.4。溫度：細胞培養(yǎng)的最適溫度與細胞來源的動物體溫一致。無菌條件培養(yǎng)器皿的處理24可編輯ppt4、組織培養(yǎng)的優(yōu)缺點優(yōu)點：可提供大量生物性狀相同的細胞作為研究對象，對疫苗生產來說，其抗原性更接近于自然流行株，可減少宿主蛋白成分，減少變態(tài)反應。缺點：病毒復制后滴度低，不易保存，保存時易使病毒滴度丟失，傳代細胞含致癌因子，不宜用于疫苗生產。且隨著細胞代數(shù)增加，對病毒敏感性也隨之下降。25可編輯ppt四、血清學方法中和試驗：適用于病毒鑒定，機體中抗體的檢測，分析病毒抗原的性質，疫苗接種效果評估等補體結合試驗血凝抑制試驗：常用于正粘病毒和副粘病毒感染的診斷和病毒亞型鑒定及抗原變異的監(jiān)測，如流感病毒的分型酶聯(lián)免疫吸附試驗放射免疫試驗免疫熒光檢測26可編輯ppt五、病毒學研究常用方法聚合酶鏈反應（PCR）轉印雜交：So