人白細(xì)胞分化抗原4(CD4)ELISA試劑盒說明書

第第頁人白細(xì)胞分化抗原4（CD4）ELISA試劑盒說明書產(chǎn)品名稱：人白細(xì)胞分化抗原4（CD4）ELISA試劑盒應(yīng)用：用于人血清、血漿或其他相關(guān)生物液體中白細(xì)胞分化抗原CD4的測定。工作原理：本試劑盒采用的是雙抗體夾心法酶聯(lián)免疫吸附檢測技術(shù)（ELISA）。測定樣品中人白細(xì)胞分化抗原CD4水平。向預(yù)先包被了抗人白細(xì)胞分化抗原CD4抗體的酶標(biāo)孔中，加入標(biāo)準(zhǔn)品和樣本，溫育后，加入生物素標(biāo)記的抗白細(xì)胞分化抗原CD4抗體。再與HRP標(biāo)記的鏈霉親和素結(jié)合，形成免疫復(fù)合物，再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶，然后加入顯色底物TMB，產(chǎn)生藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。最終，在450nm處測定反應(yīng)孔樣品吸光度（OD）值，樣本中的人白細(xì)胞分化抗原CD4濃度與OD值成正比，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出樣本中人白細(xì)胞分化抗原CD4的濃度。試劑準(zhǔn)備:1.使用前將全部的試劑和標(biāo)本緩慢均衡至室溫（1825oC）,試劑不能直接在37oC溶解。2.標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）:每瓶標(biāo)準(zhǔn)品加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1mL,蓋好后室溫靜置約莫10分鐘,同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為2000pg/mL。準(zhǔn)備7個稀釋標(biāo)準(zhǔn)品的EP管,每個EP管中加入150μL的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液,如圖所示依次倍比稀釋成不同的梯度,標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液（0pg/mL）直接作為空白孔。為保證試驗結(jié)果有效性,每次試驗請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。3.濃洗滌液:用580mL蒸餾水或去離子水將20mL濃洗滌液稀釋至600mL,進(jìn)行30倍稀釋。試劑和樣本的掌控方法:一、試劑1.試劑的選擇:國家明確要求要采用批批檢定的形式對ELISA試劑嚴(yán)格把關(guān),我司嚴(yán)格依照國家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行,已獲得國家承認(rèn)的“三證”,每一個產(chǎn)品都有對應(yīng)的批號,只要客戶提前下單,我們就能為您供應(yīng)新批次的產(chǎn)品,不必掛念會有過期的試劑。我司的試劑,值得您選擇。2.試劑的準(zhǔn)備:先將試劑盒先從冰箱中拿出來,在室溫下放置2030min后,再進(jìn)行測定,使試劑盒在使用前與室溫平衡,這樣做的目的能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度較快地實現(xiàn)所需的溫度,以滿足后面的測定需求。二、樣本1.內(nèi)源性干擾因素:包含類因子、補(bǔ)體、高濃度的非特異免疫球蛋白、異嗜性抗體、某些自身抗體等；類因子的掌控方法:①用F（ab）2替代完整的IgG；②標(biāo)本用聯(lián)有熱變性IgG的固相吸附劑處理；③檢測抗原時,可用2巰基yi乙醇加入到標(biāo)本稀釋液中使RF降解樣本試驗前準(zhǔn)備:ELISA試劑盒液體樣本:包含血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。（1）血清室溫血液自然凝固1020分鐘后,離心20分鐘左右（20003000轉(zhuǎn)/分）。認(rèn)真收集上清。保管過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。（2）血漿:應(yīng)依據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合1020分鐘后,離心20分鐘左右（20003000轉(zhuǎn)/分）。認(rèn)真收集上清。保管過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。（3）尿液:用無菌管收集。離心20分鐘左右（20003000轉(zhuǎn)/分）。認(rèn)真收集上清。保管過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。（4）細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右（20003000轉(zhuǎn)/分）。認(rèn)真收集上清。（5）培養(yǎng)細(xì)胞檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時,用PBS（PH7.27.4）稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度實現(xiàn)100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（20003000轉(zhuǎn)/分）。認(rèn)真收集上清。保管過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。（6）組織標(biāo)本切割標(biāo)本后,稱取重量。加入肯定量的PBS,PH7.4.用液氮快速冷凍保管備用。標(biāo)本溶化后仍然