安捷倫液相色譜儀安裝及使用方法 液相色譜操作規(guī)程

第第頁安捷倫液相色譜儀安裝及使用方法液相色譜操作規(guī)程安捷倫液相色譜儀由高壓液體泵、檢測器及液相色譜柱等三部分構(gòu)成，其中液相色譜柱的正確安裝和使用，是液相色譜工作的關(guān)鍵；也是液相色譜工獲得正確牢靠的試驗(yàn)

安捷倫液相色譜儀由高壓液體泵、檢測器及液相色譜柱等三部分構(gòu)成，其中液相色譜柱的正確安裝和使用，是液相色譜工作的關(guān)鍵；也是液相色譜工獲得正確牢靠的試驗(yàn)數(shù)據(jù)的必經(jīng)之路。

第一：色譜儀安裝條件：

一、環(huán)境要求：

1、溫度：15～30℃

2、日溫差：±3℃

3、相對濕度：20%～85%

4、地面：平滑、不易起塵

5、安裝場所：無震動、四周無腐蝕性介質(zhì)、無電磁場干擾，操作臺縱深尺寸60cm以上，避開空調(diào)直吹風(fēng)，避開直射陽光。

6、推舉液相色譜儀工作臺：長2米、寬0.8米，承重點(diǎn)于80公斤。建議離墻距離0.3米以上。

一般在安裝的實(shí)際空間上，還要考慮：

與其它儀器間距大于60cm，儀器后面板應(yīng)留有不小于50cm的空間，前面板至操作臺邊緣距離不小10cm；儀器安裝平穩(wěn)堅(jiān)固，接入了UPS電源，儀器外殼與地線連接。

二、電源要求：

1、單相交流220V，（+5%～—10%），50～60Hz，有單獨(dú)的良好接地。

2、若電壓不穩(wěn)，需配置穩(wěn)壓電源，功率大于2.5千瓦。

3、準(zhǔn)備1個合格的萬用接線板，總數(shù)不小于5個扁平三角接線插座。

4、斷電續(xù)電本領(lǐng)：斷電情形，設(shè)備能持續(xù)運(yùn)行1小時以上。

5、接地：安裝場所應(yīng)有牢靠接地線裝置

三、溶劑要求：

1、二次重蒸餾水，1000毫升以上（建議用0.45微米水相濾膜過濾）。

2、乙腈或甲醇（色譜純或優(yōu)級純），1500毫升以上（建議用0.45微米有機(jī)相濾膜過濾）。

四、操作系統(tǒng)：WindowsXP操作系統(tǒng)

硬件要求：內(nèi)存不低于2G；硬盤不低于160G；配有網(wǎng)絡(luò)適配器（2個網(wǎng)卡）；帶光區(qū)驅(qū)動

第二、液相色譜儀安裝方法：

1、液相色譜柱的結(jié)構(gòu)：

a、空柱由柱接頭、柱管及濾片組裝而成。

柱接頭接受低死體積結(jié)構(gòu)，柱接頭是兩端螺紋組件，一端是為7/16英寸外螺紋，另一端是3／16英寸的內(nèi)螺紋（國內(nèi)外已規(guī)范化）。7／16英寸外螺紋與1／4英寸柱管（Φ6.35mm）連接，中心放置壓壞用于密封。3／16英寸的內(nèi)螺紋與1／16英寸（Φ1.57mm）的連接管連接，中心也放置壓環(huán)用于柱接頭的密封。為了盡量削減柱外死體積，在安裝色譜柱時，用Φ1.57mm連接管通過空心螺釘壓環(huán)后要盡量插到底，然后再擰緊空心螺釘。壓環(huán)被空心螺釘擠壓變形后緊箍在連接管上（連接管通過壓環(huán)后露出的管長度應(yīng)嚴(yán)格掌控在2．5mm長或其他固定尺寸）。

在兩端柱接頭內(nèi)，柱管兩端各放置一片不銹鋼濾片（或?yàn)V網(wǎng)），用于封堵柱填料不被流動相沖出柱外而流失?？罩鹘M件均為316#不銹鋼材質(zhì)，能耐受一般的溶劑作用。但由于含氯化物的溶劑對其有確定的腐蝕性，故使用時要注意，柱及連接管內(nèi)不能長時間存留此類溶劑，以避開腐蝕。

b、柱填料：

液相色譜柱的分別作用是在填料與流動相之間進(jìn)行的，柱子的分類是依據(jù)填料類型而定。

正相柱：多以硅膠為柱填料。依據(jù)外型可分為無定型和球型兩種，其顆粒直徑在3—10μm的范圍內(nèi)。另一類正相填料是硅膠表面鍵合—CN，—NH2等官能團(tuán)即所謂的鍵合相硅膠。

反相柱：緊要是以硅膠為基質(zhì)，在其表面鍵合十八烷基官能團(tuán)（ODS）的非極性填料。也有無定型和球型之分。

常用的其他的反相填料還有鍵合C8、C4、C2、苯基等，其顆粒粒徑在3—10μm之間。

2、色譜柱的安裝：

a、拆開柱包裝盒，確認(rèn)色譜柱的類型、尺寸、出廠日期以及柱內(nèi)貯存的溶劑。

b、擰下柱兩端接頭的密封堵頭放回包裝盒供備用。

c、按柱管上標(biāo)示的流動相流向，將色譜柱的入口端通過連接管與進(jìn)樣閥出口相連接（如條件允許，建議在柱前使用保護(hù)柱）；柱的出口與檢測器連接。連接管是外徑為1.57mm、內(nèi)徑為0.1—0.3mm的不銹鋼管。連接管的兩端均有空心螺釘及密封用壓環(huán)。在接管時確定要設(shè)法降低柱外死體積。連接管通過空心螺釘、壓環(huán)后盡量用力插到底，然后順時針擰緊空心螺釘，直到擰不動為止，再用扳手連續(xù)順時針擰1／4—1／2圈，切記不要用力過大。如色譜柱通過流動相加壓后有漏液現(xiàn)象，請用扳手連續(xù)順時針擰1／4圈，直至不漏液為止。

第三、液相色譜柱的使用：

色譜柱在使用前，可以進(jìn)行柱的性能測試，并將結(jié)果保存起來，作為今后評價柱性能變化的參考。但要注意：柱性能可能由于所使用的樣品、流動相、柱溫等條件的差異而有所不同；另外，在做柱性能測試時是依照色譜柱出廠報告中的條件進(jìn)行（出廠測試所使用的條件是較佳條件），只有這樣，測得的結(jié)果才有可比性。

1、樣品的前處理：

a、可以使用流動相溶解樣品。

b、使用予處理柱除去樣品中的強(qiáng)極性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質(zhì)。

c、使用0.45μm的過濾膜過濾除去微粒雜質(zhì)。

2、流動相的配制：

液相色譜是樣品組分在柱填料與流動相之間質(zhì)量交換而達(dá)到分別的目的，因此要求流動相具備以下的特點(diǎn)：

a、流動相對樣品具有確定的溶解本領(lǐng)，保證樣品組分不會沉淀在柱中（或長時間保留在柱中）。

b、流動相具有確定惰性，與樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)（特別情況除外）。

c、流動相的黏度要盡量小，以便在使用較長的分析柱時能得到好的分別效果；同時降低柱壓降，延長液體泵的使用壽命（可運(yùn)用提高溫度的方法降低流動相的黏度）。

d、流動相的物化性質(zhì)要與使用的檢測器相適應(yīng)。如使用UV檢測器，可以使用對紫外吸取較低的溶劑配制。

e、流動相沸點(diǎn)不要太低，否則簡單產(chǎn)生氣泡，導(dǎo)致試驗(yàn)無法進(jìn)行。

f、在流動相配制好后，確定要進(jìn)行脫氣。除去溶解在流動相中的微量氣體既有利于檢測，還可以防止流動相中的微量氧與樣品發(fā)生作用。

3、流動相流速的選擇：

因柱效是柱中流動相線性流速的函數(shù)，使用不同的流速可得到不同的柱效。對于一根特定的色譜柱，要努力探求較佳柱效，可以使用較佳流速。對內(nèi)徑為4.6mm的色譜柱，流速一般選擇1ml／min，對于內(nèi)徑為4.0mm柱，流速0.8ml／min為佳。

當(dāng)選用較佳流速時，分析時間可能延長?？山邮芨牧鲃酉嗟南礈鞆?qiáng)度的方法以縮短分析時間（如使用反相柱時，可適當(dāng)加添甲醇或乙腈的含量）。

注意：

a．由于甲醇廉價，對于反相柱推舉使用甲醇體系（必需使用乙腈的場合除外）。

b．對于正相柱推舉使用沸程為30—60℃的石油醚或提純后的己烷作流動相，沒有提純的己烷不得使用。用水可以使用超純水（電阻率大于18兆歐），去離子水及雙蒸水中含有酚類雜質(zhì)，有可能影響分析結(jié)果。

c．含水流動相可以在試驗(yàn)前配制，尤其是夏天使用緩沖溶液作為流動相不要過夜?？梢约尤氙B氮化鈉，防止細(xì)菌生長。

d．流動相要求使用0.45μm濾膜過濾，除去微粒雜質(zhì)。

e．使用HPLC級溶劑配制流動相，使用合適的流動相可延長色譜柱的使用壽命，提高柱性能。

4、柱性能測試：

啟動液相色譜儀：a、流動相流速設(shè)定為1ml／min。

b、UV檢測器波長設(shè)定為254nm。

使用出廠測試時使用的流動相構(gòu)成及測試樣品。

記錄并計(jì)算測試結(jié)果。

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液相色譜儀各部分的維護(hù)和修理與保養(yǎng)：

1、泵。泵是液相色譜儀的心臟。處于良好工作狀態(tài)的泵，基線平穩(wěn)，保留時間重現(xiàn)性好，梯度洗脫時壓力變化緩慢而且平穩(wěn)。

1）選擇的溶劑和試劑，在進(jìn)入儀器前用0.45um膜過濾，并進(jìn)行脫氣處理。

2）泵開始使用時，確定要用合適的流動相徹底清洗干凈。

3）定期檢查并更換在線過濾片及有關(guān)的墊圈，常常清洗進(jìn)液處的微孔濾頭。

4）更改流動相時，應(yīng)注意沉淀的產(chǎn)生，以防止泵堵塞。

2、色譜柱。色譜柱是化合物分別的關(guān)鍵。保養(yǎng)良好的色譜柱具有很高的塔板數(shù)，基線平穩(wěn)。

1）色譜柱比較嬌氣不能夠碰撞、彎曲或猛烈震蕩；安裝時要保證閥件或管路的清潔。

2）流動相在使用前必需進(jìn)行脫氣處理，盡量不使用或少使用高粘度的流動相。

3）在充分靈敏度的前提下，盡可能的使用小進(jìn)樣量。假如樣品比較臟，要進(jìn)行凈化或提純處理。

4）分析結(jié)束后要清洗掉進(jìn)樣閥中殘留的樣品，并用流動相或適當(dāng)?shù)娜軇┣逑瓷V柱。

5）如長期不用，用適當(dāng)?shù)挠袡C(jī)溶劑保存并封閉或定期補(bǔ)充合適的流動相。

3、液相色譜儀—檢測器

分析完成后，立刻關(guān)閉檢測器。

4、液相色譜儀—進(jìn)樣器

分析結(jié)束后反復(fù)沖洗進(jìn)樣口，防止樣品的交叉污染或堵塞。1、短期停機(jī)

在完成一天工作以后，都要停機(jī)等第二天再連續(xù)工作，則可按以下步驟停機(jī)。

A）關(guān)閉二次儀表（記錄儀、積分儀或色譜工作站）。

B）關(guān)閉檢測器電源（同時切斷柱箱溫度檢測器的電源）。

C）停止恒流泵工作，然后切斷其電源。

D）用二次蒸餾水沖洗進(jìn)樣閥的進(jìn)樣孔（在“LOAD”和“INJECT”兩個位置）。

E）切斷試驗(yàn)室工作電源，加滿盛液瓶中的流動相，待第二天使用。

F）將儀器罩上防塵罩。2、長期停機(jī)

液相色譜儀數(shù)周或數(shù)月暫不使用，這時除按《短期停機(jī)》的A）～D）步驟處理外，還須完成以下步驟：

A）拆下恒流泵的流動相盛液瓶，換上色譜柱指定的保護(hù)試劑（例：甲醇、去離子水等），開啟泵數(shù)分鐘（流速0.5mL/min～1.5mL/min）后停泵。

B）從系統(tǒng)中拆下色譜柱，用專用的密封螺帽將柱管兩端密封后保存。

C）用一般1.6導(dǎo)