高效液相色譜法在中藥質(zhì)量標準提高中的應用

高效液相色譜法在中藥質(zhì)量標準提高中的應用前言中藥是中國醫(yī)藥學的瑰寶，對中華民族的繁衍昌盛做出了偉大的貢獻。為了保證中藥的安全性和有效性，數(shù)千年來中醫(yī)藥一直處于不斷標準化、規(guī)范化的進程中，《神農(nóng)本草經(jīng)》則是最早的中藥材標準。李時珍的《本草綱目》是中藥材標準規(guī)范的深化。歷史發(fā)展到今天，總結前人經(jīng)驗，補充完善、制定中藥系列標準是中藥現(xiàn)代化的需要，也是中藥國際化，造福全人類的需要。2一、我省中藥材質(zhì)量標準狀況1、部分中藥材無質(zhì)量標準。

廣東是一個中藥材生產(chǎn)、銷售、使用的大省，我省用于生產(chǎn)中藥成方制劑及臨床配方的中藥材有上千種，《中國藥典》2005年版收載的中藥材有551種；現(xiàn)有質(zhì)量標準的中藥材遠不能滿足我省中藥材的需求和使用，尚有數(shù)百種經(jīng)常使用、療效較好的廣東地產(chǎn)中藥材，既無國家藥品質(zhì)量標準也無省級藥品質(zhì)量標準。2、與藥典同名異物

廣東是“川、廣、云、貴地道藥材”的主產(chǎn)地之一，“南藥”是廣東的特產(chǎn)。有些特產(chǎn)藥材已收入《中國藥典》如陳皮、廣藿香、廣金錢草、廣防己、廣棗、砂仁、巴戟天、沉香、地龍、化橘紅、何首烏、佛手、丁公藤……等。但尚有大部分廣東常用中藥材未被《中國藥典》收載，有的其習用名稱卻與《藥典》收載的名稱相同，為同名異物的中藥材.43、已有的質(zhì)量標準偏低。

《廣東省中藥材標準》收載119個品種，建立了定量測定方法的有13個，其中高效液相色譜法5個。5二、高效液相色譜法在國家藥品

標準中的運用

高效液相色譜法由于儀器化程度高、分離效能高、準確性和重現(xiàn)性好，更適合中藥復雜成分的分離分析和標準色譜圖庫的建立，成為中藥含量測定的主導方法。

6（一）、HPLC在部標中藥成方制劑的應用

《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準》“中藥成方制劑”分20冊，共4052種，建立量化指標項目的占11%，其中采用高效液相色譜分析方法的有４２項，占１.１２％，見表1。7表1部頒品種量化指標方法分析含測方法揮發(fā)油測定容量法、重量法分光光度法液相色譜法氣相色譜法薄層掃描法其他浸出物合計項目189812542183029564168（二）、HPLC在《中國藥典》的應用

HPLC在《中國藥典》的應用，在我國藥學工作者的努力下，經(jīng)歷了一個從無到有、從少到多的過程。9表２近3版版藥典品含量測定方法分析年份總收載數(shù)薄層掃描法氣相色譜法高效液相色譜法比例（%）1995920173111.22000992601110510.620051146454751845.210三、運用高效液相色譜法進行藥品標準定量部分提高工作中藥是多種成分的混合物，其化學成分可有幾十種甚至上百種，雖然中藥藥效是多成分綜合作用的結果已漸成共識，但由此認為中藥全成分均為有效成分的觀點則是片面的，以我們目前的技術及實驗條件要想對所有的成分進行測定也是不可能的，選擇1~

2個有效成分作為中藥質(zhì)量評價的標準，雖然這種方法不夠充分、客觀，但卻是目前我們的技術及實驗條件所能做到的。11（一）、指導思想１、在制定中藥標準中突出中醫(yī)理論的指導作用，反映中醫(yī)用藥與質(zhì)量標準的內(nèi)在關系。２、在檢測成分上也要注意以中醫(yī)臨床功能主治與現(xiàn)代藥理學相結合進行研究。３、如所測成分含量低，應制定浸出物或增加一味藥的含量測定。12表3多指標測定品種與項目序號品名檢測成分1西紅花羥基紅花黃色素、山奈素2山楂葉總黃酮、金絲桃苷3馬錢子馬錢子堿、士的寧4丹參丹參酮IIA、丹酚酸B5甘草甘草酸、甘草苷6半枝蓮總黃酮、野黃芩苷7肉桂揮發(fā)油、桂皮醛8紅花羥基紅花黃色素、山奈素9蘆薈庫拉素蘆薈、好望角蘆薈10沙棘總黃酮、異鼠李素11虎杖大黃素、虎杖苷1312金銀花綠原酸、木犀草素13銀杏總黃酮醇苷、萜類內(nèi)酯14淫羊藿總黃酮、淫羊藿苷15紫草羥基萘醌總色素、?-?’-二甲基丙酰阿卡寧16槐花總黃酮、無水蘆丁17蜂膠白揚素、高良姜素18六味地黃丸牡丹皮中的丹皮酚、山茱萸中馬錢苷19六味地黃顆粒牡丹皮中的丹皮酚、山茱萸中馬錢苷20注射用雙黃連金銀花中綠原酸、黃芩中黃芩苷、連翹中連翹苷21獨一味膠囊總黃酮、正丁醇提取物、木犀草素22清開靈口服液黃芩中黃芩苷、總氮量23清開靈注射液含氮量、膽酸、梔子中梔子苷、黃芩中黃芩苷24鼻竇炎口服液正丁醇提取物、黃芩中黃芩苷14表4規(guī)定的含量限度為多成分之和序號品名檢測成分測定方法含量限度（%）1人參人參皂苷Rg1和Re、的總量；Rb1HPLC≥0.30；0.22人參葉人參皂苷Rg1、Re的總量HPLC≥2.253兒茶兒茶素和表兒茶素的總量HPLC≥21.04三七人參皂苷Rg1、Rb1和三七皂苷R1的總量HPLC≥5.05木香木香烴內(nèi)酯、去氫木香烴內(nèi)酯HPLC≥1.86木通齊墩果酸、常春藤皂苷元HPLC≥0.157瓦松槲皮素、山奈素HPLC≥0.028西紅花西紅花苷-I、西紅花苷-II≥10.09西洋參人參皂苷Rg1、Re、Rb1的總量HPLC≥2.010大黃蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚的總量HPLC≥1.511防己粉防己堿、防己諾林HPLC≥1.612防風升麻甙和5-O-甲基維斯阿米醇苷的總量HPLC≥0.241513紅參人參皂苷Rg1和Re、的總量；Rb1HPLC≥0.25；0.2014吳茱萸吳茱萸堿和吳茱萸次堿的總量HPLC≥0.1515補骨酯補骨酯素、異補骨酯素HPLC≥0.716苦參苦參堿、氧化苦參堿HPLC≥1.217金錢草槲皮素、山奈素HPLC≥0.1018胡黃連胡黃連苷-I、胡黃連苷-IIHPLC≥9.019厚樸厚樸酚與和厚樸酚的總量HPLC≥2.020厚樸花厚樸酚與和厚樸酚的總量HPLC≥0.2021牽牛子咖啡酸、咖啡酸乙酯HPLC≥0.2022香薷麝香草酚、香荊芥酚HPLC≥0.1623重樓重樓皂苷I、重樓皂苷IIHPLC≥0.8024穿心蓮穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯的總量HPLC≥0.8025蟾酥華蟾蜍次素和脂蟾毒配基的總量HPLC≥6.016（二）、提高的程度１、以中國藥典２００５年版一部為基準。２、中國藥典２００５年版一部，成方制劑和單味制劑共收載５６4個品種，其中有３２５個項目采用了高效液相色譜法進行定量分析，占５７.6％。17３、在３２５個分析項目中測定芍藥苷的有４５項，占１３.８％，測定黃芩苷的４３項，占１３.２％，測定鹽酸小檗堿的１８項，占５.５％，測定大黃素的２０項，占６.２％。18類別被測成分所屬藥材測定條件芍藥苷白芍、赤勺乙腈-0.1%磷酸溶液（13：87）乙腈-水（17：83）；230nm生物堿鹽酸小檗堿黃連、黃柏乙腈-0.033mol/L磷酸二氫鉀溶液（35：65）；424nm鹽酸麻黃堿麻黃乙腈-0.02mol/L磷酸二氫鉀溶液（含0.2%三乙胺）磷酸調(diào)pH至2.7（4：10）；210nm苦參堿苦參乙腈-0.1%磷酸溶液（三乙胺調(diào)pH8.0）；220氫溴酸東莨菪堿洋金花乙腈-0.07mol/L磷酸鈉溶液（含0.0175mol/L十二烷基硫酸鈉，用磷酸調(diào)節(jié)pH至6.0）（50：100）；216nm荷葉堿荷葉乙腈-三乙胺-冰醋酸-水（27：1.8：0.78：70.6）；270馬錢子堿士的寧馬錢子乙腈-0.01mol/L庚烷磺酸鈉溶液與0.02mol/磷酸二氫鉀等量混合,用磷酸調(diào)節(jié)pH至2.8）（21：79）；260nm原阿片堿夏天無乙腈-三乙胺醋酸溶液（1000ml水中加冰醋酸30ml，三三乙胺8ml）（18：82）；289nm19黃酮類黃芩苷黃芩甲醇-水-磷酸（47：53：0.2）；280nm葛根素葛根乙腈-0.1%磷酸溶液（11：89）；250nm柚皮苷化橘紅甲醇-冰醋酸-水（30：4：60）；283nm橙皮苷陳皮、青皮甲醇-醋酸-水（42：4：54）；283淫洋藿苷淫洋藿乙腈-0.05%磷酸（26：74）；270nm蘆丁槐花甲醇-水-冰醋酸（45：54：1）；257nm金絲桃苷山楂葉甲醇-乙腈-四氫呋喃-0.5%冰醋酸（1：1：19.4：78.6）；363nm槲皮素山奈素異鼠李素銀杏甲醇-0.4%磷酸（50：50）；360nm木犀草素獨一味甲醇－0.4%磷酸溶液（50：50）；350nm20皂苷類甘草酸（單銨鹽）甘草甲醇-0.2mol/L醋酸銨溶液-冰醋酸（67：33：1）；250nm人參皂苷類人參、三七乙腈A；水B，梯度洗脫；203nm黃芪甲苷黃芪乙腈-水（32：68）；蒸發(fā)光散射檢測器蒽醌類大黃素、大黃酚大黃甲醇-0.1%磷酸溶液（85：15）；254nm丹參酮IIA丹參甲醇-水（75：25）；270nm丹酚酸B丹參甲醇-乙腈-甲酸-水（30：10：1：59）；286nm馬錢苷山茱萸乙腈-水（15：85）；240nm綠原酸金銀花乙腈-0.4%磷酸溶液（13：87）；327nm2122（三）、高效液相色譜分析方法建立的一般步驟：

一種高效液相色譜分析方法的建立，是由多種因素來決定的，除了了解樣品的性質(zhì)及實驗室具備的條件外，對液相色譜分離理論的理解，對前人從事過的相近工作的借鑒以及分析工作者自身的實踐經(jīng)驗，都對分析方法的建立起著重要的影響。通常在確定被分析的樣品以后，要建立一種高效液相分析方法必須解決以下問題：23（1）根據(jù)所測成分的性質(zhì)，制定其分析純化的方法。（2）根據(jù)被分析樣品的特性，選擇適用于樣品分析的高效液相色譜分析方法。（3）由獲得的色譜圖進行定性或定量分析。

24（四）、高效液相色譜圖存在問題、原因及解決方法

液相色譜系統(tǒng)的許多問題都能在譜圖上反映出來。其中有一些問題可以通過改變設備參數(shù)得到解決；而其他的問題必須通過修改操作程序來解決。對于色譜柱和流動相的正確選擇是得到好的色譜圖的關鍵。25峰拖尾26原因1、流動相PH選擇不當2、干擾峰3、樣品與填料表面殘留硅羥基發(fā)生反應解決方法調(diào)整PH值。a、使用更長的色譜柱。b、改變流動相或更換色譜柱。a、加入離子對試劑或堿性揮發(fā)性修飾劑b、更換色譜柱27峰前延28原因1、樣品過載2、樣品溶劑選擇不恰當3、柱溫低解決方法降低樣品含量。a、使用流動相作為樣品溶劑。升高柱溫2930

峰分叉31原因1、保護柱或分析柱污染2、樣品溶劑不溶于流動相解決方法1、取下保護柱再進行分析。改變樣品溶劑。32保留時間波動33原因色譜柱沒有平衡流動相組分變化溫控不當解決方法在每一次運行之前給予足夠的時間平衡色譜柱防止變化（蒸發(fā)、反應等）調(diào)好柱溫保留時間波動34原因1、柱溫波動。2、流動相不均勻。3、流通池被污染或有氣體4、檢測器出口阻塞5、流動相配比不當或流速變化解決方法1、控制好柱子和流動相的溫度2、使用HPLC級的溶劑，高純度的鹽和添加劑。3、流通池被污染或有氣體4、取出阻塞物或更換管子。5、更改配比或流速?；€漂移356、柱平衡慢，特別是流動相發(fā)生變化時。

1、柱溫波動。7、流動相污